一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，采用同一供试品溶液，在四块薄层板上，鉴别了10味药材。不同的检视条件下，检视不同的中药成分，虽各成分相互交叉，但在不同的层次上，互不干扰，都能呈现出清晰的颜色斑点或荧光斑点。完成这些鉴别只需样品4g、各对照药材0.1～0.3g、提取溶剂与展开剂90ml、时间3小时。简便、快捷、高效，是目前已报道方法都不具备的。为畜禽抗病毒颗粒的监督投料，提供了快速鉴别方法。且硫酸显色后知母、浙贝母的增荧光斑点，陈皮的红色斑点；大青叶和板蓝根的新鉴别特征点为首次报道。

A Rapid TLC Method for Identification of Antiviral Granules from Livestock and Poultry

【技术实现步骤摘要】
一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法
本专利技术涉及一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法。多药味快速薄层鉴别方法是指采用薄层鉴别方法，对处方中的甘草、陈皮、大黄、知母、金银花、浙贝母、柴胡、丹参、大青叶、板蓝根10味中药进行了薄层鉴别。其特征在于一板多药味系指一块薄层板上鉴别2-3味药材；快速薄层鉴别方法是指每鉴别一味药材所花费时间平均不到20分钟、消耗的试剂不超过10ml。
技术介绍
在中药复方制剂中，特别是十八味以上组方的水提取复方制剂，由于药味多，各药味又都是水提取的，依据相似相容的提取原则，脂溶性成分基本已不复存在，提取的都是水溶性或偏水溶性成分，对于一些含量低微的成分，由于提取过程中的成分聚合、分解、破坏，基本也很难再检测到。所以导致薄层鉴别增订率低，定量测定指标少。查阅了2015年版中国药典一部，收载的十六味以上的传统水提取复方制剂很少，有可比性的类似制剂有6种，即，午时茶颗粒由19味药材组成，以橙皮苷、连翘苷、甘草次酸为对照，薄层鉴别了3味药材，鉴别增订率为15.8％；孕康胶囊由23味中药组成，以黄芪甲苷、当归、芍药苷、黄芩苷、补骨脂素为对照，鉴别了5味药材，鉴别增订率为21.7％；防风通圣颗粒由17味药材组成，以5-0-甲基维斯阿米醇苷、盐酸麻黄碱、大黄、栀子苷、桔梗、当归、川芎、黄芩苷、甘草为对照，鉴别了9味药材，鉴别增订率为52.9％；尪痹颗粒由17味药材组成，以独活、桂皮酸、芍药苷、菝葜皂苷元为对照，鉴别了4味药材，鉴别增订率为23.5％；解郁安神颗粒由16味药材组成，以远志、柴胡、甘草为对照，鉴别了3味药材，鉴别增订率为18.8％；甜梦胶囊由17味药材组成，以刺五加、黄芪甲苷、枸杞子、淫羊藿苷、橙皮苷为对照，鉴别了5为药材，鉴别增订率为29.4％；6种水提取制剂的薄层鉴别增订率平均为27.0％，也就是一个由18味药材组成的制剂，只有约1/4药材能够识别其有无投料，而众多的药材是无法控制其投料情况的，质量标准的检视水平太低，无法给质量监督提供有力支撑。即便在薄层鉴别增订率最高的品种中，薄层鉴别也多是一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。这样，一个有7～8味药材薄层鉴别和二项含量测定组成的质量标准检测完成，一般要花费一周的时间，如遇复试，时间翻倍，检测速度严重制约着中药现代化生产速度。所以寻找简便、快捷的检测方法、提高检测效率、降低检测成本，就成了中药质量检测必须突破的难关。就以上述薄层鉴别增订率最高的防风通圣颗粒为例，剖析一下具体方法如下：【鉴别】(1)取本品6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。(2)取本品6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，低温蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液4～8μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(4∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。(3)取本品6g，研细，加盐酸溶液(3→20)10ml，混匀，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸-水(6∶2∶0.4∶0.1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，斑点变为红色。(4)取【鉴别】(2)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。(5)取本品15g，研细，加7％硫酸乙醇溶液-水(1∶3)的混合溶液40ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，用水30ml洗涤，弃去水洗液，三氯甲烷用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(6)取本品20g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材、川芎对照药材各0.5g，分别同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。(7)取本品5g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液，水溶液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法，其特征在于：(1)甘草、陈皮和大黄的薄层鉴别 取畜禽抗病毒颗粒4g，研细，加甲醇15ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.1g、陈皮对照药材0.2g，研细，分别加甲醇2ml超声处理15分钟，取上清液作为甘草和陈皮对照药材溶液；再取大黄对照药材0.2g，加水40ml，小火煎煮30分钟，棉花滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为大黄对照药材；吸取上述对照药材溶液各5～6μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶2∶4∶0.5的氯仿‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草和陈皮对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的亮蓝色荧光主斑点，在与大黄对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同的红色荧光斑点；再喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液与乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色主斑点；(2)知母和金银花的薄层鉴别 取知母对照药材0.2g、金银花对照药材0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为各自的对照药材溶液；吸取对照药材溶液3～5μl，(1)项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶GF264薄层板上，以体积比为3.1∶1∶1的正丁醇‑冰醋酸‑水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与金银花对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与知母对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；(3)浙贝母和柴胡的薄层鉴别 取浙贝母对照药材0.3g、柴胡0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液。吸取对照药材溶液和(1)项下的供试品溶液各5～8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10∶4∶3∶0.5的三氯甲烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应的位置上，显一个相同颜色的荧光斑点；喷以10％的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与浙贝母对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝紫色荧光主斑点；再置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与二对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的棕褐色主斑点；(4)丹参、大青叶、板蓝根的薄层鉴别 取大青叶对照药材0.2g、板蓝根对照药材0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为大青叶和板蓝根对照药材溶液；另取丹参对照药材0.3g，加水40ml，小火煎煮30分钟，棉花滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为丹参对照药材溶液；吸取大青叶和板蓝根对照药材溶液各5～6μl、丹参对照药材溶液10μl、(1)项下的供试品溶液12μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为6∶4.5∶0.1的环己烷‑乙酸乙酯‑甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与丹参对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液与乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与大青叶和板蓝根对照药材色谱相应的位置上，分别显相同颜色主斑点。...

【技术特征摘要】
1.一种畜禽抗病毒颗粒的一板多药味快速薄层鉴别方法，其特征在于：(1)甘草、陈皮和大黄的薄层鉴别取畜禽抗病毒颗粒4g，研细，加甲醇15ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材0.1g、陈皮对照药材0.2g，研细，分别加甲醇2ml超声处理15分钟，取上清液作为甘草和陈皮对照药材溶液；再取大黄对照药材0.2g，加水40ml，小火煎煮30分钟，棉花滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为大黄对照药材；吸取上述对照药材溶液各5～6μl、供试品溶液5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比8∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草和陈皮对照药材色谱相应的位置上，分别显相同的亮蓝色荧光主斑点，在与大黄对照药材色谱相应的位置上，至少显一个相同的红色荧光斑点；再喷以体积比为1∶6的5％香草醛硫酸溶液与乙醇的混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，供试品色谱中，在与陈皮对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色主斑点；(2)知母和金银花的薄层鉴别取知母对照药材0.2g、金银花对照药材0.3g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为各自的对照药材溶液；吸取对照药材溶液3～5μl，(1)项下的供试品溶液5～6μl，分别点于同一硅胶GF264薄层板上，以体积比为3.1∶1∶1的正丁醇-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与金银花对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与知母对照药材色谱相应的位置上，显相同的亮蓝绿色荧光主斑点；(3)浙贝母和柴胡的薄层鉴别取浙贝母对照药材0.3g、...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，缪雪荣，兰新财，付莉，麻军法，韩桂茹，施杏芬，
申请(专利权)人：浙江金大康动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33