【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测小RNA或与小RNA相关的蛋白质的方法
本专利技术涉及检测小RNA或与小RNA相关的蛋白质的方法，更具体地涉及利用具有X-Y-Z的结构且由可与待检测的小RNA(smallRNA)的全部或一部分碱基序列互补结合的碱基序列组成的单核酸来检测小RNA或与小RNA相关的蛋白质的方法。
技术介绍
微RNA(microRNA，miRNA)为存在于细胞中的小RNA(smallRNA)之一，据悉，在细胞的产生和分化及细胞程序性死亡等生物学过程中发挥着非常重要的作用，细胞中特定微RNA的表达程度差异与包括癌症的多种疾病有关。因此，最近特定微RNA的检测已成为科学研究领域中的重要部分。具体而言，对特定微RNA或与此相关的蛋白质进行检测及鉴定，可用作遗传、生物标记物，可利用为表示人的健康状态的指标。通过上述检测及鉴定，可开发简单地利用外周血、激素、脊髓液的试剂盒和可在体外(invitro)使用的诊断试剂盒。这种试剂盒可适用于痴呆症(阿尔茨海默氏症、帕金森病等)、糖尿病、癌症等的检查。然而，微RNA为约22个核苷酸(nucleotide)，由于非常短，因而难以检验及检测，在用作有效生物标记物的方面受限。通常，微RNA的检验基于核酸扩增方法，作为这种方法的示例，有聚合酶链式反应(polymerasechainreaction；PCR)、核酸序列依赖性扩增(nucleicacidsequencebasedamplification；NASBA)等。利用这种核酸扩增反应的现有的检测方法对于本专利技术所属
的普通技术人员而言是公知的。这种检测方法通常需要核酸扩增之后可检测所扩增...
【技术保护点】
1.一种检测小RNA的方法，其特征在于，包括：步骤a)，从生物学试样中获得包含待检测的小RNA的RNA；步骤b)，利用包含可与待检测的小RNA的一部分碱基序列互补结合的碱基序列的X‑Y‑Z结构的单核酸，由所述步骤a)中获得的RNA合成cDNA；步骤c)，扩增所述步骤b)的cDNA；步骤d)，测定通过可切断所述步骤b)的单核酸的Y部位的酶来切断的单核酸片段的量；或者包括：步骤a‑1)，从生物学试样中获得包含待检测的小RNA的RNA；步骤b‑1)，由所述步骤a‑1)中获得的RNA合成cDNA；步骤c‑1)，通过向所述步骤b‑1)的cDNA中混合包含可与所述cDNA的一部分碱基序列互补结合的碱基序列且可用作(i)正向引物及探针、(ii)反向引物及探针或者(iii)正向引物和反向引物及探针的单核酸来扩增所述cDNA；以及步骤d‑1)，测定通过可切断所述步骤c‑1)的单核酸的Y部位的酶来切断的单核酸片段的量；所述单核酸具有X‑Y‑Z的结构，单核酸的两个末端或内部附着有一个或其以上的可检测的标记物，并与以实时检测为目的的靶核酸或靶蛋白的特定部位相结合而形成复合体，当Y部位通过特定酶而被切断时，X部...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.27 KR 10-2016-01237101.一种检测小RNA的方法，其特征在于，包括：步骤a)，从生物学试样中获得包含待检测的小RNA的RNA；步骤b)，利用包含可与待检测的小RNA的一部分碱基序列互补结合的碱基序列的X-Y-Z结构的单核酸，由所述步骤a)中获得的RNA合成cDNA；步骤c)，扩增所述步骤b)的cDNA；步骤d)，测定通过可切断所述步骤b)的单核酸的Y部位的酶来切断的单核酸片段的量；或者包括：步骤a-1)，从生物学试样中获得包含待检测的小RNA的RNA；步骤b-1)，由所述步骤a-1)中获得的RNA合成cDNA；步骤c-1)，通过向所述步骤b-1)的cDNA中混合包含可与所述cDNA的一部分碱基序列互补结合的碱基序列且可用作(i)正向引物及探针、(ii)反向引物及探针或者(iii)正向引物和反向引物及探针的单核酸来扩增所述cDNA；以及步骤d-1)，测定通过可切断所述步骤c-1)的单核酸的Y部位的酶来切断的单核酸片段的量；所述单核酸具有X-Y-Z的结构，单核酸的两个末端或内部附着有一个或其以上的可检测的标记物，并与以实时检测为目的的靶核酸或靶蛋白的特定部位相结合而形成复合体，当Y部位通过特定酶而被切断时，X部位与靶核酸或靶蛋白保持复合体并起到引物作用，Y及Z从所述靶核酸或靶蛋白的特定部位分离，所述X、Y及Z为由碱基序列组成的DNA或RNA，当所述X、Y及Z中的任一个为DNA时，另外两个当中的一个以上为RNA。2.根据权利要求1所述的检测小RNA的方法，其特征在于，所述X为由1个至60个碱基序列组成的DNA或RNA；所述Y为由1个至10个碱基序列组成的DNA或RNA；以及所述Z为由0个至10个碱基序列组成的DNA或RNA，当所述Z为0时，Y为由3个至10个碱基序列组成的DNA或RNA，当所述Z为1时，Y为由2个至10个碱基序列组成的DNA或RNA。3.根据权利要求1所述的检测小RNA的方法，其特征在于，所述可检测的标记物为通过共价键或非共价键与单核酸相结合的荧光物质或由荧光物质和猝灭物质组成的荧光对。4.根据权利要求1所述的检测小RNA的方法，其特征在于，所述单核酸的X、Y及Z以完全甲基化或部分甲基化的方式合成，以防止非特异性切断。5.根据权利要求1所述的检测小RNA的方法，其特征在于，所述单核酸的X为由10个至30个碱基序列组成的DNA或RNA，所述Y为由1个至1...
【专利技术属性】
技术研发人员：南泳铉，
申请(专利权)人：纽丽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国,KR
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