T细胞受体制造技术

本发明专利技术涉及T细胞受体(TCR)，其结合衍生自MAGE‑B2蛋白的HLA‑A*0201限制性的肽GVYDGEEHSV(SEQ ID NO：1)。本发明专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。还提供了编码TCR的核酸、工程化以提呈TCR的细胞、携带编码TCR的表达载体的细胞以及包含本发明专利技术的TCR、核酸或细胞的药物组合物。

T cell receptor

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞受体
本专利技术涉及T细胞受体(TCR)，其结合衍生自黑素瘤相关抗原(MAGE)B2蛋白(氨基酸230-239)的HLA-A*0201限制性的十肽GVYDGEEHSV。本专利技术的TCR显示了对于该MAGE表位的优异的特异性谱。
技术介绍
癌症睾丸抗原(CTA)是由约140个基因编码的肿瘤相关抗原(TAA)的亚类。这些抗原的表达限制于免疫豁免部位，如睾丸、胎盘和胎儿卵巢；它们通常不在其它组织中表达。已经在恶性肿瘤中观察到这些基因的表达。CTA的免疫原性导致在许多实体瘤中靶向这些抗原的癌症疫苗的广泛开发。在这一大类TAA中，黑素瘤相关抗原(MAGE)已成为癌症免疫疗法的有希望的候选物。作为多基因家族的成员，已经报道了超过30种癌症睾丸(CT)基因，其被组织入染色体X上的基因簇(CT-X抗原)。CT基因簇位于Xq24和Xq28之间，并且包括基因家族如MAGE和NY-ESO-1。I型MAGE基因簇是被最广泛表征的，包括MAGE-A、MAGE-B和MAGE-C家族。MAGE-A蛋白由12种不同的MAGE-A基因家族成员(MAGE-A1至MAGE-A12)编码，并由保守的165-171个氨基酸碱基定义，其被称为MAGE同源结构域(MHD)。MHD对应于所有MAGE-A家族成员共有氨基酸的唯一区域。T细胞识别以及与细胞表面分子和肽的复合物相互作用，所述细胞表面分子称为人白细胞抗原(“HLA”)，或主要组织相容性复合物(“MHC”)。肽衍生自较大的分子，其由还提呈HLA/MHC分子的细胞加工。T细胞和HLA/肽复合物的相互作用受到限制，需要T细胞对HLA分子和肽的特定组合具有特异性。如果不存在特异性的T细胞，即使其伴侣复合体存在，也没有T细胞响应。类似地，如果不存在特异性复合物但存在T细胞，则没有响应。该机制参与免疫系统对感染、自身免疫疾病的响应以及对异常(如肿瘤)的响应。一些MAGE基因家族蛋白(MAGE-A至MAGE-C家族)仅在生殖细胞和癌症中表达。其它(MAGE-D至MAGE-H)在正常组织中广泛表达。所有这些MAGE蛋白家族具有与其它MAGE蛋白的序列紧密匹配的同源区，并且包含在免疫识别中展示为HLA/肽复合物的肽。因此，重要的是选择针对期望的MAGE肽/HLA-A2抗原高度特异性的TCR临床候选物。MAGEB2是MAGEB基因家族的CTA成员。虽然认为它可能在胚胎发育中起作用，但功能未知。在肿瘤发病机理中，它似乎参与肿瘤转化或肿瘤进展的方面。MAGEB2涉及大量肿瘤，肽GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)对应于已知的MAGE-B2蛋白的氨基酸残基数231-241。MAGEA4是MAGEA基因家族的CTA。MAGEA4在睾丸和胎盘中以及在不同组织学类型的肿瘤的显著部分中表达。肽GVVDGREHTV(SEQIDNo：2)显示与MAGEB2的交叉反应性，使得某些TCR能够结合展示两种肽的HLA分子。
技术实现思路
我们开发了一种TCR，其与展示MAGEB2肽GVYDGEEHSV的HLA分子结合，优于MAGEA4。在第一方面，本专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的特性，当使用可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1-7.5的表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约20.0μM的解离常数，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中TCR可变结构域至少与GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的残基V2、Y3和D4构成接触。在实施方案中，根据本专利技术的TCR具有结合与HLA-A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的特性，使用可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1至7.5的表面等离子体共振测量时，具有约20μM至约50μM的解离常数，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域。在一些实施方案中，解离常数高于50微摩尔(microM)，如100μM、200μM、500μM或更高。因此，根据本专利技术的TCR能够有效地结合展示GVYDGEEHSV的HLA，但不能结合展示GVYDGREHTV的HLA。在一些实施方案中，TCR的α链可变结构域包含与SEQIDNo：3的氨基酸残基1-111的序列(α链)具有至少80％同一性的氨基酸序列，和/或β链可变结构域包含与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-111的序列(β链)具有至少80％同一性的氨基酸序列。在另一方面，本专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的特性，并且包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，所述α链可变结构域包含与SEQIDNo：3的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，和/或所述β链可变结构域包含与SEQIDNo：4的氨基酸残基1-111的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。GVYDGEEHSVHLA-A2复合物提供了本专利技术的TCR可靶向的癌症标志物。本专利技术提供了这样的TCR，其用于将细胞毒性或免疫效应剂递送至癌细胞和/或用于过继治疗(adoptivetherapy)用途的目的。使用国际免疫遗传学(IMGT)TCR命名法描述TCR，并且链接到TCR序列的IMGT公共数据库。天然α-β异二聚体TCR具有α链和β链。广泛地，每条链包含可变区、连接区和恒定区，β链通常还在可变区和连接区之间含有短的多变区，但是该多变区通常被认为是连接区的一部分。每个可变区包含嵌入框架序列中的三个CDR(互补决定区)，一个是名为CDR3的高变区。有几种类型的α链可变(Vα)区和几种类型的β链可变(Vβ)区，其区别在于它们的框架、CDR1和CDR2序列以及部分限定的CDR3序列。在IMGT命名法中，Vα类型通过唯一的TRAV编号来指代。因此，“TRAV21”定义具有独特框架和CDR1和CDR2序列的TCRVα区，以及部分由TCR到TCR间保守的氨基酸序列限定的CDR3序列，但所述CDR3序列还包含TCR到TCR间变化的氨基酸序列。以相同的方式，“TRBV5-1”定义具有独特框架和CDR1和CDR2序列的TCRVβ区，但仅部分限定CDR3序列。类似地，TCR的连接区由独特的IMGTTRAJ和TRBJ命名法定义，而恒定区由IMGTTRAC和TRBC命名法定义。β链多变区在IMGT命名法中通过缩写TRBD指代，并且如所提及的，串联的TRBD/TRBJ区通常一起被认为是连接区。αβTCR的α和β链一般被认为各自具有两个“结构域”，即可变结构域和恒定结构域。可变结构域由可变区和连接区的连接组成。在本说明书和权利要求书中，术语“TCRα可变结构域”因此是指TRAV和TRAJ区的串联，术语TCRα恒定结构域指细胞外TRAC区或C-末端截短的TRAC序列。同样，术语“TCRβ可变结构域”是指TRBV和TRBD/TRBJ区的串联，术语TCRβ恒定结构域指细胞外TRBC区或C末端截短的TRBC序列。由IMGT命名法定义的独特序列是众所周知的，并且对于在TCR领域工作的人员是可得到的。例如，它们可以在IMGT公共数据库中找到。“TcellRece本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA‑A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQ ID No：1)的特性，当可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1‑7.5使用表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约20.0μM的解离常数，并且所述T细胞受体对与HLA‑A*0201复合的SEQ ID No：1结合的选择性为与HLA‑A*0201复合的GVYDGREHTV(SEQ ID No 2)结合的至少10倍，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中所述TCR可变结构域至少与GVYDGEEHSV(SEQ ID No：1)的残基V2、Y3和D4构成接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.08 GB 1606172.31.一种T细胞受体(TCR)，其具有结合与HLA-A*0201复合的GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的特性，当可溶形式的TCR在25℃和pH为7.1-7.5使用表面等离子体共振测量时，具有约0.05μM至约20.0μM的解离常数，并且所述T细胞受体对与HLA-A*0201复合的SEQIDNo：1结合的选择性为与HLA-A*0201复合的GVYDGREHTV(SEQIDNo2)结合的至少10倍，其中所述TCR包含TCRα链可变结构域和TCRβ链可变结构域，并且其中所述TCR可变结构域至少与GVYDGEEHSV(SEQIDNo：1)的残基V2、Y3和D4构成接触。2.根据权利要求1所述的TCR，其是α-β异二聚体，具有α链TRAV10+TRAC恒定结构域序列和β链TRBV24-1+TRBC-2恒定结构域序列。3.根据权利要求1所述的TCR，其是类型Vα-L-Vβ、Vβ-L-Vα、Vα-Cα-L-Vβ或Vα-L-Vβ-Cβ的单链形式，其中Vα和Vβ分别是TCRα和TCRβ可变区，Cα和Cβ分别是TCRα和TCRβ恒定区，L是接头序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其与可检测标记、治疗剂或PK修饰部分结合。5.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中，α链可变结构域包含与SEQIDNo：3的氨基酸残基1-105的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变：CDR2I3R其中参考SEQIDNo：3中所示的编号，和/或β链可变结构域包含与SEQIDNo：5的氨基酸残基1-105的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列，并且具有以下突变中的至少一种：CDR1H3RCDR3N10ECDR3N10R其中参考SEQIDNo：4中所示的编号。6.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQIDNO：3或SEQIDNo：7或SEQIDNO：8的氨基酸残基1-105的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1-27、34-47和54-90分别与SEQIDNo：3或SEQIDNo：7或SEQIDNO：8的氨基酸残基1-27、34-47和54-90的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基28-34、48-53和91-105分别与SEQIDNo：3或SEQIDNo：7或SEQIDNO：8的氨基酸残基28-34、48-53和91-105的序列具有至少90％或95％的同一性。7.根据权利要求1-7中任一项所述的TCR，其中α链可变结构域包含SEQIDNo：3或SEQIDNo：7的氨基酸残基1-105的氨基酸序列，或者包含氨基酸序列，其中其氨基酸残基1-27、34-47和55-89分别与SEQIDNo：3或SEQIDNo：7的氨基酸残基1-27、34-47和55-89的序列具有至少90％或95％的同一性，以及其中氨基酸残基28-33、48-53和91-105分别与SEQIDNo：3或SEQIDNo：7的氨基酸残基28-33、48-53和91-105的序列具有至少90％或95％的同一性。8.根据前述权利要求中任一项所述的TCR，其中在α链可变结构域中，序列为(i)其氨基酸残基1-27具有(a)与SEQIDNo：3的氨基酸残基1-26的序...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·特里布尔，W·劳伦斯，E·巴格，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB