与GDM辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物制造技术

本发明专利技术公开了与GDM辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物。与妊娠期糖尿病辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物，选自Q9Y4H2，或Q9Y4H2与选自Q6PFW1、P35658、P32004中的任意一个多肽或两个个多肽的组合。本发明专利技术所述的血清/血浆多肽标志物作为检测靶点在制备妊娠期糖尿病辅助早期诊断试剂中的应用。检测孕妇血清/血浆中上述标记物表达量能用于GDM辅助早期诊断。为临床医生准确预测孕妇的GDM发病结局，及时采取更具个性化的防治方案提供支持，从而最大限度的降低GDM的发病率，减少不良妊娠结局。

Serum/plasma polypeptide markers associated with early diagnosis of GDM

【技术实现步骤摘要】
与GDM辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物分案说明本申请是申请日为2018年9月6日，申请号为2018110390312，专利技术名称为“与妊娠期糖尿病辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物及其应用”的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术属于蛋白质组学领域，涉及与GDM辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物。
技术介绍
妊娠期糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)是指妊娠期发生或首次发现的不同程度的葡萄糖耐量异常，若发生在妊娠早期不排除葡萄糖耐量异常在妊娠前就已经存在的可能性。GDM是最常见的妊娠期合并症之一，约有3％-8％的孕妇在妊娠期间出现GDM，尤为值得关注的是，随着育龄妇女肥胖率的增加，GDM的发生率不断上升。GDM可给母体及胎儿带来一系列的并发症，如增加自然流产发生率、妊娠高血压综合征、羊水过多等，也增加了巨大儿、肩难产、产伤、早产、胎儿发育异常、胎儿宫内窘迫、死胎、死产发生率；并使新生儿易发生低血糖症、高胆红素血症，呼吸窘迫综合征、红细胞增多症等，同时增加了孕产妇发生2型糖尿病、代谢疾病和心血管疾病的风险。如果不及时进行诊断和治疗，不仅孕产妇及胎婴儿患病率和病死率将明显上升，产妇及其后代远期糖尿病患病率也将上升。因此，早期诊断、早期干预、及时合理治疗是预防GDM、减少母婴合并症的关键，是亟待解决的重大科学问题。目前国际上对GDM的筛查和诊断方法及标准尚未完全统一，通常GDM需在第2孕期晚期或第3孕期才能进行诊断，根据美国糖尿病协会(AmericanDiabetesAssociation，ADA)和美国妇产科学会(AmericanCollegeofObstetriciansandGynecologists，ACOG)指南，GDM的血清学筛查在24-28孕周进行，这样可用于干预时间少之又少。因此，我们亟需发现更加明确而有效的生物标志物，对GDM做出辅助早期诊断，这将有助于早期干预，减少不良妊娠结局。多年来，人们一直在研究基因和蛋白质组学，以寻找各种疾病的生物标志物。然而由于基因和蛋白质组学的特性，它们并不是常规分娩到生物液中，故而生物标志物的探索之路非常困难。而低分子量肽和分子质量的蛋白水解碎片被频繁地分泌到血清中，因此，多肽组学正成为血清生物标志物的研究的重点。多肽组学，被定义为是对生物样本中肽的全面定性和定量分析。在体液或组织中产生的循环蛋白碎片可反映生物事件，并为诊断生物标记提供了丰富的库。现今，许多肽都被用来作为癌症的生物标志物。例如，血浆纤维蛋白1可以作为筛查和诊断肾细胞癌的一种手段，在肾细胞癌的早期，血浆纤维蛋白1水平上升。现有的成熟多肽技术，包括对肽的定性和定量测定，表明利用血清肽作为分子生物标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新境界。然而，目前还没有用于GDM辅助早期诊断的较为稳定的生物标志物的报道，若能筛选出GDM特异或异常表达的血清/血浆肽作为生物标志物，并研制相应的辅助早期诊断试剂盒，对我国GDM的诊断现状必将是一次有力的推动。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对上述技术问题，提出一种与GDM辅助早期诊断相关的血清/血浆肽标志物。本专利技术的另一目的是提供所述标志物的应用。本专利技术的又一目的是提供一种GDM辅助早期诊断试剂盒。本专利技术的目的可通过如下技术方案实现：与妊娠期糖尿病辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物，其特征在于该标志物选自Q6PFW1、P35658、P32004和Q9Y4H2中的任意一个多肽或多个多肽；其中Q6PFW1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，P35658的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，P32004的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，Q9Y4H2的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。其中，Q6PFW1的前蛋白为肌醇己二磷酸和二磷酸肌醇/五磷酸激酶1(Inositolhexakisphosphateanddiphosphoinositol-pentakisphosphatekinase1)；P35658的前蛋白为核孔复合蛋白(NuclearporecomplexproteinNup214)；P32004的前蛋白为神经细胞粘附分子L1(NeuralcelladhesionmoleculeL1)；Q9Y4H2的前蛋白为胰岛素受体底物2(Insulinreceptorsubstrate2)。本专利技术所述的血清/血浆多肽标志物作为检测靶点在制备妊娠期糖尿病辅助早期诊断试剂中的应用。一种妊娠期糖尿病辅助早期诊断试剂盒，包含检测所述的血清/血浆多肽标志物的试剂；所述的妊娠期糖尿病辅助早期诊断试剂，优选包含Q6PFW1、P35658、P32004和Q9Y4H2中的任意一个多肽或多个多肽的ELISA检测试剂。有益效果：本专利技术采用严密的设计和评价体系，成熟的多肽实验方法获取疾病特异和异常表达的血清/血浆多肽，并随机挑选多肽进行验证，保证实验结果的稳定性。本专利技术通过控制年龄等对疾病发展的影响因素，研究血清/血浆多肽标志物在GDM早期诊断的应用前景，阐述异常表达的多肽标志物对于GDM进展的影响，揭示其筛查和早期诊断价值。因此，本专利技术获得了GDM发病特异性血清/血浆多肽表达数据库和特异性标志物；通过测定血清/血浆多肽标志物，可使得GDM的早期诊断更加方便易行，为临床医生准确预测孕妇的GDM发病结局，及时采取更具个性化的防治方案提供支持，从而最大限度的降低GDM的发病率，减少不良妊娠结局。同时本专利技术帮助临床医生快速准确掌握患者病情，为临床治疗效果评价奠定基础，并为发现具有潜在治疗价值的新型小分子药物靶标提供帮助。附图说明图1本专利技术多肽标志物的发现路线图此图为本研究的技术路线图，包括早期血清样本的采集、差异多肽的筛选、差异多肽的选择性验证等。图2本专利技术血清多肽标记物的选择性验证在血清差异多肽筛选的基础上，选择7条在GDM转归组高表达或者只在GDM转归组表达的差异多肽，采集正常组和GDM转归组的早期血清各30例，应用质谱的方法进行验证。A图为正常转归组和GDM转归组中P35658的表达对比图，B图为正常转归组和GDM转归组中Q6PFW1的表达对比图，C图为正常转归组和GDM转归组中P32004的表达对比图，D图为正常转归组和GDM转归组中Q9Y4H2的表达对比图。具体实施方式实施例1、样品的收集和样品资料的整理专利技术人于2015年4月至8月从南京市妇幼保健院收集了大量的14-18孕周孕妇的外周血样品(用于研究的样本为同期收取，采样、分装、保存条件均一)，通过对样品资料的整理，专利技术人从中选择了200例符合下列标准的样本作为实验样品：1、采血时为14-18孕周健康孕妇2、上述研究对象在24-28孕周GDM筛查时经OGTT确诊为GDM的孕妇定义为病例3、上述研究对象在24-28孕周GDM筛查时未发生GDM，与病例年龄、BMI、孕周匹配的健康孕妇定义为对照并系统采集了这些样本的人口学资料、临床资料等情况。实施例2、样品制备、蛋白质组学(多肽组学)筛选及生物信息学分析将上述符合条件的100例GDM病例和100例健康对照，进行超滤、TMT、LC-MS/MS等实验，具体步骤为：血清/血浆中样本的采集准备和超滤1、将样本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.与妊娠期糖尿病辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物，其特征在于该标志物选自Q9Y4H2，或Q9Y4H2与选自Q6PFW1、P35658、P32004中的任意一个多肽或两个个多肽的组合；其中Q6PFW1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，P35658的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，P32004的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，Q9Y4H2的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

【技术特征摘要】
1.与妊娠期糖尿病辅助早期诊断相关的血清/血浆多肽标志物，其特征在于该标志物选自Q9Y4H2，或Q9Y4H2与选自Q6PFW1、P35658、P32004中的任意一个多肽或两个个多肽的组合；其中Q6PFW1的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示，P35658的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，P32004的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，Q9Y4H2的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。2.权利要求1所述的血清/血浆多...

【专利技术属性】
技术研发人员：石中华，沈嵘，丁虹娟，蒋涛，尹玲凤，赵纯，单春剑，
申请(专利权)人：南京市妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：江苏,32