一测多评法评价小蓟质量的方法技术

本发明专利技术提供一种一测多评法评价小蓟质量的方法，首先建立小蓟中4种主要药效成分的HPLC含量测定方法，以芦丁作为内参物，计算其他3种活性成分的相对校正因子，并考察相对校正因子的系统适用性和方法重现性，根据相对保留时间进行色请峰定位，再结合相对校正因子算各待测成分的含量，通过一测多评法与外标法的相互验证，证明含量测定结果无显著差异。本发明专利技术方法克服了对照品成本高、不易得等难题，通过相对校正因子及色谱峰定位计算指标成分含量，实现小蓟中多种药效物质的同步测定，可节省成本、简化操作，提高效率，且检测灵敏度高，稳定性好，测定结果准确可靠，对小蓟质量控制和临床疗效的保证具有重大意义。

A Method for Evaluating the Quality of Thistle by One Test and Multiple Assessment

【技术实现步骤摘要】
一测多评法评价小蓟质量的方法
本专利技术属于药物质量控制
，涉及一种一测多评法评价小蓟质量的方法。
技术介绍
小蓟HerbaCirsiiSetosi，民间俗称刺角芽、刺角，为菊科蓟属的植物小蓟的干燥地上部分，为常用中药。小蓟味甘、苦，性凉，归心、肝经，具有凉血止血，祛瘀消肿的作用。可用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外伤出血，痈肿疮毒等病症的治疗。小蓟粗提物具有明显的抗菌、抗炎活性，对肺炎双球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、伤寒村菌、绿脓杆菌、痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌等均有抑制作用。小蓟中主要含有挥发油、生物碱、黄酮等成分。研究发现小蓟中黄酮类成分中的芦丁具有维生素P样作用和抗炎作用；小蓟中的蒙花苷具有有抗衰老、抗缺氧、抗不良刺激以及促凝血的作用；木犀草素具有消炎、抗过敏、抗肿瘤、抗菌、抗病毒；小蓟中的芹菜素具有抑制致癌物质的致癌活性、抗炎、抗氧化、镇静、安神、降压的作用。而上述成分在小蓟中含量较高且活性较好，具有一定的代表性，有必要将其纳入小蓟药材质量控制和评价体系。近年来我们国家通过各种政策大力推行传统的中医药以及中药现代化，现在越来越多的中药制剂出现在医药市场上，为了能使中药制剂达到应有的疗效，对中药材的质量评价以及含量测定就显得尤为重要。现有中药标准多以单一成分含量反应中药产品质量，但中药成分复杂，具有多成分、多功效的特点，仅以一种成分含量无法全面反映中药质量的优劣，由此提出了多成分质量控制的理念。一测多评法(quantitativeanalysisofmulticomponentsbysinglemarker，QAMS)指利用中药有效成分内在的函数关系和比例关系，只测定其中的一个成分(对照品易于得到)，来实现多个成分(对照品难以得到或供应)的同步测定，是适合中药特点的多指标质量评价模式。在对照品不足的情况下，利用相对校正因子(relativecorrectionfactor，RCF)对药材进行质量控制是方便、快速、廉价的，其方法将会是中药多组分同步定量的发展方向。目前，用一测多评法同时测定小蓟中多种不同类型成分的含量的文献还没有。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种一测多评法评价小蓟质量的方法，解决了现有技术中小蓟在含量测定时标准品品种多，含量测定方法复杂，检测经济成本较高的问题，简化了小蓟定量检测方法，节约了小蓟的质量控制的检测经济成本。本专利技术所采用的技术方案是，一测多评法评价小蓟质量的方法，具体按照以下步骤进行：步骤1、对照品标准溶液制备步骤1.1、分别取芦丁标准品、蒙花苷标准品以及木犀草素标准品和芹菜素标准品，用甲醇溶解后置于容量瓶、定容，即得芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液；步骤1.2、分别取一定量的芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液混合后置于容量瓶中，用甲醇定容，得到混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备称取小蓟药材，置于索氏提取器中，加入石油醚，水浴加热脱脂至无色后晾干，将晾干后的小蓟药材再置于索氏提取器中，加入甲醇，水浴加热提取，将提取液置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到供试品溶液，备用；步骤3、高效液相色谱测定取步骤1.2中制备的混合对照品溶液和步骤2中制备的供试品溶液，进行色谱条件检测分析，得到混合对照品溶液的高效液相色谱图和供试品溶液的液相色谱图；其中，色谱条件如下：色谱柱：AgilentHC-C18；柱温：25℃-35℃；检测波长：260nm-350nm；流动相：甲醇为流动相A，0.1％冰醋酸水为流动相B；梯度洗脱70min：步骤4、目标化合物的含量计算步骤4.1、利用混合对照品溶液的高效液相色谱图，计算各色谱峰的峰面积，以芦丁为内参物，根据相对校正因子计算公式分别计算蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子；其中，Cs为内参物质量浓度，As为内参物色谱峰面积，Ck为其它成分质量浓度，Ak为其他成分色谱峰面积；步骤4.2、对供试品溶液的高效液相色谱图中芦丁、蒙花苷、木犀草素和芹菜素相对保留时间进行峰定位，并结合步骤4.1中得到的蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子，计算供试品溶液中蒙花苷、木犀草素和芹菜素的含量。本专利技术的特点还在于，步骤1.1中芦丁标准溶液的浓度为0.50mg/mL、蒙花苷标准溶液的浓度为0.05mg/mL、木犀草素标准溶液的浓度为0.51mg/mL，芹菜素标准溶液浓度分别为0.41mg/mL。步骤1.2中的混合对照品溶液中芦丁的浓度为0.050mg/mL、蒙花苷的浓度为0.005mg/mL、木犀草素的浓度为0.051mg/mL、芹菜素的浓度为0.041mg/mL。步骤2中脱脂时的水浴温度为60℃。步骤2中提取时的水浴温度为50℃-90℃。步骤2中水浴提取的时间为1h-5h。步骤2中小蓟药材、石油醚和甲醇的质量比为1:5-10:8-20。步骤3中高效液相色谱流动相流速为0.8ml/min-1.5ml/min；进样量为10μL-20μL。本专利技术的有益效果是：一测多评法评价小蓟质量的方法，以芦丁作为内参物，计算小蓟中蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子，并用校正因子计算蒙花苷、木犀草素和芹菜素的含量，不仅大幅度降低检测成本和检测时间，并且简化了小蓟的定量检测方法，提高效率，且检测灵敏度高，稳定性好，测定结果准确可靠，对小蓟的质量控制和临床疗效的保证具有重要意义。附图说明图1是本专利技术一测多评法评价小蓟质量的方法中混合对照品的HPLC图；图2是本专利技术一测多评法评价小蓟质量的方法中实施例1中的供试品的HPLC图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术进行详细说明。本专利技术中小蓟的多成分的检测方法，采用一测多评的方法，以芦丁作为内参物测定小蓟中蒙花苷、木犀草素和芹菜素的含量，具体包括以下步骤：步骤1、对照品标准溶液制备步骤1.1、分别取芦丁标准品、蒙花苷标准品以及木犀草素标准品和芹菜素标准品，用甲醇溶解后置于容量瓶、定容，即得浓度为0.50mg/mL的芦丁标准溶液、浓度为0.05mg/mL的蒙花苷标准溶液、浓度为0.51mg/mL的木犀草素标准溶液，浓度为0.41mg/mL的芹菜素标准溶液；步骤1.2、分别取一定量的芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液混合后置于容量瓶中，用甲醇定容，得到混合对照品溶液，其中混合对照品溶液中芦丁的浓度为0.050mg/mL、蒙花苷的浓度为0.005mg/mL、木犀草素的浓度为0.051mg/mL、芹菜素的浓度为0.041mg/mL；步骤2、供试品溶液制备称取小蓟药材，置于索氏提取器中，加入小蓟药材质量5-10倍的石油醚，于60℃水浴加热脱脂至无色后晾干，将晾干后的小蓟药材再置于索氏提取器中，加入小蓟药材质量8-20倍的甲醇，于50℃-90℃水浴加热提取1h-5h，将提取液置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，备用；步骤3、高效液相色谱测定取步骤1.2中制备的混合对照品溶液和步骤2中制备的供试品溶液，进行色谱条件检测分析，得到混合对照品溶液的高效液相色谱图和供试品溶液的液相色谱图；其中，色谱条件如下：色谱柱：AgilentHC-C18；柱温：25℃-35℃；检测波长：260nm-350nm；流动相：甲醇为流动相A，0.1％冰醋酸水本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一测多评法评价小蓟质量的方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤1、对照品标准溶液制备步骤1.1、分别取芦丁标准品、蒙花苷标准品以及木犀草素标准品和芹菜素标准品，用甲醇溶解后置于容量瓶、定容，即得芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液；步骤1.2、分别取一定量的芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液混合后置于容量瓶中，用甲醇定容，得到混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备称取小蓟药材，置于索氏提取器中，加入石油醚，水浴加热脱脂至无色后晾干，将晾干后的小蓟药材再置于索氏提取器中，加入甲醇，水浴加热提取，将提取液置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到供试品溶液，备用；步骤3、高效液相色谱测定取步骤1.2中制备的混合对照品溶液和步骤2中制备的供试品溶液，进行色谱条件检测分析，得到混合对照品溶液的高效液相色谱图和供试品溶液的液相色谱图；其中，色谱条件如下：色谱柱：Agilent HC‑C18；柱温：25℃‑35℃；检测波长：260nm‑350nm；流动相：甲醇为流动相A，0.1％冰醋酸水为流动相B；梯度洗脱70min：

【技术特征摘要】
1.一测多评法评价小蓟质量的方法，其特征在于，具体按照以下步骤进行：步骤1、对照品标准溶液制备步骤1.1、分别取芦丁标准品、蒙花苷标准品以及木犀草素标准品和芹菜素标准品，用甲醇溶解后置于容量瓶、定容，即得芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液；步骤1.2、分别取一定量的芦丁标准溶液、蒙花苷标准溶液、木犀草素标准溶液以及芹菜素标准溶液混合后置于容量瓶中，用甲醇定容，得到混合对照品溶液；步骤2、供试品溶液制备称取小蓟药材，置于索氏提取器中，加入石油醚，水浴加热脱脂至无色后晾干，将晾干后的小蓟药材再置于索氏提取器中，加入甲醇，水浴加热提取，将提取液置于容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得到供试品溶液，备用；步骤3、高效液相色谱测定取步骤1.2中制备的混合对照品溶液和步骤2中制备的供试品溶液，进行色谱条件检测分析，得到混合对照品溶液的高效液相色谱图和供试品溶液的液相色谱图；其中，色谱条件如下：色谱柱：AgilentHC-C18；柱温：25℃-35℃；检测波长：260nm-350nm；流动相：甲醇为流动相A，0.1％冰醋酸水为流动相B；梯度洗脱70min：步骤4、目标化合物的含量计算步骤4.1、利用混合对照品溶液的高效液相色谱图，计算各色谱峰的峰面积，以芦丁为内参物，根据相对校正因子计算公式分别计算蒙花苷、木犀草素和芹菜素的相对校正因子；其中，Cs为内参物质量浓度，As为内参物色谱峰面积，Ck为其它成分质量浓度，Ak为其他成分色谱峰面积；步骤4.2、对供试品溶液的高效液相...

【专利技术属性】
技术研发人员：张寒，郑梦迪，张彦，刘春叶，刘洁，翟西峰，
申请(专利权)人：西安医学院，
类型：发明
国别省市：陕西,61