一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，包括如下步骤：S1，将甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品溶于无机酸溶液中，过滤、水洗、干燥，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品；S2，将S1获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶解于洗脱剂中，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液，所述洗脱剂由无水甲醇、pH=2.5的磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈组成；S3，将S2获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液上层析柱，洗脱，收集HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸洗脱剂、浓缩、水洗、干燥；S4，将S3干燥后的产品经溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液、浓缩得到HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐。本发明专利技术的纯化方法，操作简单，稳定可靠，可以大批量制备纯度大于98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠。

A Purification Method of Sodium Glycine Goose Deoxycholate

【技术实现步骤摘要】
一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法
本专利技术涉及有机化学分离纯化
，尤其涉及一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法。
技术介绍
甘氨鹅脱氧胆酸钠，是一种胆汁酸盐，目前主要用于生化研究，可用作脂酶加速剂，阴离子去除剂和制备细菌培养基等。近些年来，科学家们研究发现，甘氨鹅脱氧胆酸钠不仅仅是一种参与膳食脂类、脂溶性营养素吸收的天然调节剂，同时也是人体内重要的信号分子，参与多个旁分泌和内分泌功能，与脂质和胆固醇水平的平衡有关，控制能量消耗和免疫系统的调节。如甘氨鹅脱氧胆酸钠对肝癌细胞有较强的细胞凋亡诱导作用，可用于肝癌生化和治疗研究。甘氨鹅脱氧胆酸钠用于药物治疗研究，要求的纯度较高。现有技术制备的样品，以及市场上购买的甘氨鹅脱氧胆酸钠样品的HPLC纯度一般在95%~97%，难以达到大于98%的纯度，不能满足药物研究的质量要求。有厂家采用流体化学方法可以得到HPLC纯度大于98%甘氨鹅脱氧胆酸钠，但该方法对设备的要求较高，适用于g级制备，不利于大批量生产。甘氨鹅脱氧胆酸钠分离纯化的不足，可能是限制其医药用途的一个主要原因。如何获得高纯度的甘氨鹅脱氧胆酸钠成为目前亟需解决的难题。
技术实现思路
为了解决现有技术制备的甘氨鹅脱氧胆酸钠纯度低于98%，无法满足药物研究或者即使得到纯度大于98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠，但是对设备要求较高，无法实现工业化的问题，本专利技术的目的是提供一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，本专利技术的纯化方法稳定性好、所得产品的纯度高，纯度达到98%以上。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，包括如下步骤：S1，将甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品溶于无机酸溶液中，过滤、水洗、干燥，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品；S2，将S1获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶解于洗脱剂中，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液，所述洗脱剂由无水甲醇、pH=2.5的磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈组成；S3，将S2获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液上层析柱，洗脱，收集HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸洗脱溶液、浓缩、水洗、干燥；S4，将S3干燥后的产品经溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液、浓缩得到HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐。其中，所述S1中的无机酸为6mol/L的盐酸。其中，所述S2的洗脱剂中无水甲醇、磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈的体积比为（5~7）：（2~4）：（0~1）。其中，所述S2的洗脱剂中无水甲醇、磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈的体积比为6:3:1。其中，所述磷酸二氢钾缓冲溶液的制备方法如下：3.4g磷酸二氢钾溶解于1L水中，滴加2mol/L的氢氧化钠溶液调pH=7，再用磷酸调pH=2.5。其中，所述S3中对层析柱的处理方法如下：将反向C18硅胶用无水甲醇充分浸泡后，重力沉降法装柱，无水甲醇洗涤，洗脱剂平衡后备用。柱层析纯化，常用的方式是正相柱层析，但是采用正相硅胶柱柱层析纯化，粗品纯度难以达到98%，而且样品大量吸附在硅胶上，纯化收率很低。通过反向硅胶柱层析，选用C18，粗品经过纯化，纯度达到98%以上，纯化收率较高，易于操作。其中，所述HPLC检测纯度的流动相A为pH=7的磷酸二氢钾缓冲溶液，流动相B为乙腈，洗脱梯度为70:30，检测波长为210nm，柱温为24-26℃。其中，所述S4中的溶剂为乙酸乙酯。与现有技术相比，本专利技术实现的有益效果：本专利技术的纯化方法，操作简单，稳定可靠，可以大批量制备纯度大于98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠。具体实施方式实施例110g甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品纯化磷酸二氢钾缓冲溶液配制：3.4g磷酸二氢钾溶解于1L纯水中，滴加2mol/L的氢氧化钠溶液调pH值到7，再用磷酸调pH值到2.5。洗脱剂的配制：取2L的无水甲醇、333.3mL的乙腈与1L上述配制好的磷酸二氢钾缓冲溶液混合搅拌均匀制备得到洗脱剂，待用。将10gHPLC检测纯度为95%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐溶于20mL水中，用6mol/L的盐酸溶液调pH<2，有大量白色固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥至恒重得到9.2g甘氨鹅脱氧胆酸粗品，用30mL的洗脱剂溶解待用。反相C18硅胶用无水甲醇充分浸泡脱气后，重力沉降法装成层析柱，（甘氨鹅脱氧胆酸粗品与C18反相硅胶重量比为1:50，C18反相硅胶柱规格Φ20*400毫米），并以200mL甲醇洗脱后，再用200mL的洗脱剂洗脱。甘氨鹅脱氧胆酸粗品上柱，先用300mL洗脱剂洗脱，再用100mL80%的甲醇水溶液洗脱，最后用100mL无水甲醇洗脱，洗脱过程在常温常压条件下进行，用10mL的三角瓶分段收集洗脱溶液，通过HPLC检测纯度>98%的洗脱溶液合并，减压回收溶剂，加50mL乙酸乙酯溶解，30mL水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至恒重，得甘氨鹅脱氧胆酸6.8g，HPLC检测纯度为98.8%。甘氨鹅脱氧胆酸纯品6.8g，溶于35mL乙酸乙酯中，滴加氢氧化钠的甲醇溶液（0.6g氢氧化钠溶解于10mL无水甲醇中），搅拌1小时，减压浓缩至恒重，得到6.9g白色固体的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐，HPLC检测纯度为98.8%，纯化收率为69%。实施例2100g甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品纯化磷酸二氢钾缓冲溶液配制：6.8g磷酸二氢钾溶解于2L纯水中，滴加2mol/L的氢氧化钠溶液调PH值到7，再用磷酸调PH值到2.5。洗脱剂的配制：4L的无水甲醇、666.6mL的乙腈与2L上述配制好的磷酸二氢钾缓冲溶液混合搅拌均匀制备得到洗脱剂，待用。将100gHPLC纯度为95%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐溶于200mL水中，用6mol/L的盐酸溶液调pH<2，有大量白色固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥至恒重得到93.8g甘氨鹅脱氧胆酸粗品，用200mL的洗脱剂溶解待用。反相C18硅胶用无水甲醇充分浸泡脱气后，重力沉降法装成层析柱，（甘氨鹅脱氧胆酸粗品与C18反相硅胶重量比为=1:50，C18反相硅胶柱规格Φ50*400毫米），并以1L甲醇洗脱后，再用1L的洗脱剂洗脱。甘氨鹅脱氧胆酸粗品上柱，先用2.5L洗脱剂洗脱，再用1L80%的甲醇水溶液洗脱，最后用800mL无水甲醇洗脱，洗脱过程在常温常压条件下进行，用100mL的三角瓶分段收集洗脱溶液，通过HPLC检测纯度>98%的洗脱溶液合并，减压回收溶剂，加300mL乙酸乙酯溶解，150mL水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩至恒重，得甘氨鹅脱氧胆酸78g，HPLC纯度为98.2%。甘氨鹅脱氧胆酸纯品78g，溶于400mL乙酸乙酯中，滴加氢氧化钠的甲醇溶液（6.9g氢氧化钠溶解于80mL无水甲醇溶液），搅拌1小时，减压浓缩至恒重，得到81g白色固体的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐，HPLC检测纯度为98.2%，纯化收率为81%。实施例3200g甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品纯化磷酸二氢钾缓冲溶液配制：10.2g磷酸二氢钾溶解于3L纯水中，滴加2mol/L的氢氧化钠溶液调PH值到7，再用磷酸调PH值到2.5。洗脱剂的配制：6L的无水甲醇、1L的乙腈与3L上述配制好的磷酸二氢钾缓冲溶液混合搅拌均匀制备得到洗脱剂，待用。将200gHPLC纯度为95%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐溶于400mL水中，用6mol/L的盐酸溶液调pH<2，有大量白色固体析出，过滤，滤饼用纯化水洗涤，干燥至恒重得到182本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，将甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品溶于无机酸溶液中，过滤、水洗、干燥，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品；S2，将S1获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶解于洗脱剂中，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液，所述洗脱剂由无水甲醇、pH=2.5的磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈组成；S3，将S2获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液上层析柱，洗脱，收集HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸洗脱溶液、浓缩、水洗、干燥；S4，将S3干燥后的产品经溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液、浓缩，得到HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐。

【技术特征摘要】
1.一种甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，将甘氨鹅脱氧胆酸钠粗品溶于无机酸溶液中，过滤、水洗、干燥，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品；S2，将S1获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶解于洗脱剂中，得到甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液，所述洗脱剂由无水甲醇、pH=2.5的磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈组成；S3，将S2获得的甘氨鹅脱氧胆酸粗品溶液上层析柱，洗脱，收集HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸洗脱溶液、浓缩、水洗、干燥；S4，将S3干燥后的产品经溶剂溶解后，加入氢氧化钠溶液、浓缩，得到HPLC检测纯度＞98%的甘氨鹅脱氧胆酸钠盐。2.如权利要求1所述的甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，其特征在于，所述S1中的无机酸为6mol/L的盐酸。3.如权利要求1所述的甘氨鹅脱氧胆酸钠的纯化方法，其特征在于，所述S2的洗脱剂中无水甲醇、磷酸二氢钾缓冲溶液和乙腈的体积比为（5-7）：（2-4）：（0-1）。4.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：何秀君，
申请(专利权)人：药璞上海医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31