一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，本发明专利技术中一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法包括如下步骤：选择新鲜的山楂，清洗后切碎打浆，与盐酸溶液按一定的质量比混合，热水浸提，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，用无水乙醇沉降，离心取沉淀，将沉淀冷冻干燥成山楂果胶粉，将所得山楂果胶粉在一定条件下酶解得到山楂果胶粗寡糖溶液，通过阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，并通过牛津杯法进行抑菌实验检测，收集对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。

A preparation method of hawthorn oligogalacturonic acid with bacteriostasis

【技术实现步骤摘要】
一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法
本专利技术涉及食品加工
，尤其涉及一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法。
技术介绍
随着社会的进步和人民生活水平的提高，人们对于食品保健意识日益增强。充分利用山楂资源，以山楂为原料制备山楂寡聚半乳糖醛酸，提高山楂加工利用率，为寡聚半乳糖醛酸在防腐剂等方面的开发利用打下良好基础。目前，已公开的关于山楂加工相关的专利都主要集中在饮料、果酱、蜜饯等，并没有具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法。与半乳糖醛酸相关的专利比较少，CN103399147A公开了多聚半乳糖醛酸(PGA)的新应用，即PGA在制备检测类风湿性关节炎的物质中的应用以及检测类风湿性关节炎的方法及试剂盒。本专利技术以山楂为原料，经过打浆、提取、果胶酶酶解、纯化得到寡聚半乳糖醛酸，并通过牛津杯抑菌试验检测制备具有抑菌活性的寡聚半乳糖醛酸。
技术实现思路
本专利技术目的是提供了一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法。本专利技术采取的技术方案如下：(1)原料的处理：选择新鲜的山楂，清洗后去核切碎，按2∶1山楂和水的比例打浆，放在冰箱中保存待用；(2)提取果胶：取山楂浆与pH为2～3的盐酸按质量比1∶30～1∶40混合，70℃热水浸提50～90min，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，用无水乙醇沉降，离心取沉淀，经过冷冻干燥得到山楂果胶粉；(3)酶解：称取山楂果胶粉，溶于20～30倍质量的pH7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.1％～0.3％的果胶酶，50℃水浴2h，离心取上清液即为山楂果胶粗寡糖溶液，4℃冷藏待用；(4)阴离子交换树脂预处理：取阴离子交换树脂，先用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，然后用两倍体积的4％的盐酸溶液浸泡2h，再用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，最后用蒸馏水反复冲洗直至中性；(5)纯化：通过D201大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，将酶解后的山楂果胶粗寡糖上样，用多功能全自动部份收集器收集寡聚半乳糖醛酸；(6)咔唑比色硫酸法测寡聚半乳糖醛酸含量：先用半乳糖醛酸标准品做标准曲线，再对样品进行测定，向试管中加入2mL硫酸，加入0.4mL待测样液，充分混匀，沸水加热10min，立即冷却，加入0.08mL咔唑，沸水加热15min，立即冷却，530nm比色测得吸光度值，对比标准曲线计算寡聚半乳糖醛酸含量；(7)抑菌性研究：通过牛津杯法进行抑菌实验，将固体培养基倒入平板中，凝固之后放上牛津杯，将15～20mL有指示菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)的半固体培养基倒入平板中，待半固体培养基完全凝固之后拔掉牛津杯，在孔中加入50μL不同浓度的半乳糖醛酸，并加氨苄做阳性对照，加蒸馏水做阴性对照。培养观察抑菌圈直径，分离得到对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。本专利技术与现有产品相比具有以下优点：本专利技术充分利用山楂制备具有抑菌活性的寡聚半乳糖醛酸，为山楂半乳糖醛酸作为天然防腐剂的研究奠定基础。具体实施方式通过以下具体实施例进一步详细说明本专利技术，但并不受限于此，可以在本专利技术权利要求限定的范围内进行各种改变。实施例1：一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备(1)原料的处理：选择新鲜的山楂，清洗后去核切碎，按2∶1山楂和水的比例打浆，放在冰箱中保存待用；(2)提取果胶：取山楂浆与pH为2.5的盐酸按质量比1∶35混合，70℃热水浸提70min，离心取上清液，旋转蒸发浓缩至总体积的十分之一。用1.5倍体积的无水乙醇沉降5h，离心取沉淀，经过冷冻干燥得到山楂果胶粉；(3)酶解：称取0.4g山楂果胶粉溶于10mLpH为7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.2％的果胶酶，50℃水浴2h，离心取上清液即为山楂果胶粗寡糖溶液，4℃冷藏待用；(4)阴离子交换树脂预处理：称取25g阴离子交换树脂，先用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，然后用两倍体积的4％的盐酸溶液浸泡2h，再用两倍体积的4％的氢氧化钠溶液浸泡2h，最后用蒸馏水反复冲洗直至中性；(5)纯化：通过D201大孔强碱性苯乙烯系阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，将酶解后的山楂果胶粗寡糖上样，用多功能全自动部份收集器收集寡聚半乳糖醛酸；(6)咔唑比色硫酸法测寡聚半乳糖醛酸含量：先用半乳糖醛酸标准品做标准曲线，再对样品进行测定，向试管中加入2mL硫酸，0.4mL待测样液，充分混匀，沸水加热10min，立即冷却，加入0.08mL咔唑，沸水加热15min，立即冷却，530nm比色测得吸光度值，对比标准曲线计算寡聚半乳糖醛酸含量；(7)抑菌性研究：通过牛津杯法进行抑菌实验，将固体培养基倒入平板中，凝固之后放上牛津杯，将20mL有指示菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌)的半固体培养基倒入平板中，待半固体培养基完全凝固之后拔掉牛津杯，在孔中加入50μL不同浓度的半乳糖醛酸，并加氨苄做阳性对照，加蒸馏水做阴性对照，培养观察抑菌圈直径，分离得到对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，其特征在于以新鲜的山楂为原料，清洗后切碎打浆，与盐酸溶液按一定的质量比混合，热水浸提，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，离心取沉淀，将沉淀冷冻干燥成山楂果胶粉，将所得山楂果胶粉在一定条件下酶解得到山楂果胶粗寡糖溶液，通过阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，并通过牛津杯法进行抑菌实验，检测分离得到对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。

【技术特征摘要】
1.一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，其特征在于以新鲜的山楂为原料，清洗后切碎打浆，与盐酸溶液按一定的质量比混合，热水浸提，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，离心取沉淀，将沉淀冷冻干燥成山楂果胶粉，将所得山楂果胶粉在一定条件下酶解得到山楂果胶粗寡糖溶液，通过阴离子交换树脂分离纯化寡聚半乳糖醛酸，并通过牛津杯法进行抑菌实验，检测分离得到对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑菌性的寡聚半乳糖醛酸。2.如权利要求1所述的一种具有抑菌性的山楂寡聚半乳糖醛酸的制备方法，包括以下步骤：(1)原料的处理：选择新鲜的山楂，清洗后去核切碎，按2∶1山楂和水的比例打浆，放在冰箱中保存待用；(2)提取果胶：取山楂浆与pH为2～3的盐酸按质量比1∶30～1∶40混合，70℃热水浸提50～90min，离心取上清液，旋转蒸发浓缩，用无水乙醇沉降，离心取沉淀，经过冷冻干燥得到山楂果胶粉；(3)酶解：称取山楂果胶粉，溶于20～30倍质量的pH7.4的PBS缓冲溶液中，加入0.1％～0.3％的果胶酶，50℃水浴2h，离心取上清液即为山楂果胶粗寡糖溶液，4℃冷藏待用；(4)阴离子交换树脂预处理：取阴离子...

【专利技术属性】
技术研发人员：张平平，孟亚志，郝亚妮，
申请(专利权)人：天津农学院，
类型：发明
国别省市：天津,12