一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，包括先将水华蓝藻进行预处理，通过改性活性炭对水华蓝藻产生的藻毒素进行吸附，且制备的改性活性炭孔隙较大且具有磁性，具有较好的吸附性，用预处理的水华蓝藻通过冻融法制得水华蓝藻溶液，水华蓝藻溶液采用硫酸铵分段盐析制备藻蓝蛋白干粉，将藻蓝蛋白干粉制得酶解液，最后将酶解液用大孔树脂分离纯化，即可得到减肥肽，本发明专利技术变废为宝，充分利用水华蓝藻，防止水华蓝藻污染水体，且制备的减肥肽较安全。

【技术实现步骤摘要】
一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法
本专利技术涉及功能食品
，具体涉及一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法。
技术介绍
日趋严重的富营养化现象使内陆水体水华蓝藻大量暴发，并在水体表面大量堆积，严重影响水体景观，而且其释放的藻毒素和异味物质严重损害水质，危及人类的健康和社会的可持续发展，但是水华蓝藻是丰富的蛋白质资源，其蛋白质含量高达38%~47%，是地球上所有已知生物中最高的，其中藻胆蛋白含量可达细胞干重的10%~20%，藻胆蛋白主要包括藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、藻红蛋白三类，藻胆蛋白具有重要的食品功能成分，因此收集水体的水华蓝藻并进行资源化利用，不仅利于减少水中的营养负荷、防止水质恶化，又能产生经济效益；目前我国肥胖人群已达7000万，肥胖因常伴有高血压、血脂异常、缺血性心脏病等出现，危害极大。因此，人们已经把更多的目光放在各种各样的减肥产品上。减肥产品主要由保健食品、药品、茶、外用、仪器五大类构成，目前肥胖治疗的药物种类单一，价格昂贵，减肥作用不稳定，而且长期使用副作用不容忽视，而生物活性肽与传统药物相比，具有安全，易吸收，生理功能多，健康营养，口感好，活性强等优点，为了变废为宝，本专利技术以水华蓝藻为原料，采用生物方法，制备具有减肥效果的多肽产品，但是由于藻毒素的存在，影响水华蓝藻蛋白质的提取，从而影响最终制备的减肥肽的效果。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，充分利用水华蓝藻，防止水华蓝藻污染水体，且制备的减肥肽较安全。本专利技术通过以下技术方案来实现：一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，包括以下步骤：步骤一、将水华蓝藻低温烘干，进行粗粉粹，得到粗粉碎后的水华蓝藻；步骤二、将粗粉碎后的水华蓝藻浸泡于添加有改性活性炭的蒸馏水中5~7h后，将水华蓝藻分离出来烘干，得到预处理的水华蓝藻；步骤三、将预处理的水华蓝藻溶于1mmol/L的PBS缓冲液中，摇匀后置于-10~-15℃冷冻，2~3h后3~5℃解冻，反复冻融多次，得到水华蓝藻溶液，备用；步骤四、将步骤三制得的水华蓝藻溶液制备得到藻蓝蛋白干粉；步骤五、将藻蓝蛋白干粉加水溶解，调节其PH为6.9~7.2，得到藻蓝蛋白溶液，将藻蓝蛋白溶液预热至80~90℃，保温30~40min后，使其冷却，向其加入中性蛋白酶，在48~53℃、pH值为6.9~7.2的条件下酶解4~6h，灭活后冷却离心获得酶解液；步骤六、将酶解液用大孔树脂分离纯化，即可得到减肥肽。进一步的，所述步骤二中改性活性炭的制备方法为：（1）将水华蓝藻低温干燥，采用高速粉碎机破碎，得到破碎的水华蓝藻；（2）将破碎的水华蓝藻置于质量浓度为2mol/L的HCl中浸泡1~2h后，将其干燥，得到粗处理的水华蓝藻；（3）将粗处理的水华蓝藻置于添加有氯化亚铁溶液的发酵罐中发酵5~7h，待发酵结束后，将其取出干燥，得到二次处理的水华蓝藻，备用，所述发酵的条件为：温度为35~38℃，转速为350~500r/min；（4）将二次处理的水华蓝藻置于炭化炉中进行炭化，得到炭化物；（5）将炭化物浸泡于氢氧化钾溶液中，放置于恒温25℃的摇床中以160~180r/min的转速震荡11~13h；（6）将浸泡过氢氧化钾溶液的炭化物用蒸馏水冲洗后，干燥得到改性活性炭。进一步的，所述步骤三中PBS缓冲液的PH为7.0。进一步的，所述步骤四中藻蓝蛋白干粉的制备方法为：a、将步骤三得到的水华蓝藻溶液在冰浴条件下超声破碎处理20~30min后，离心收集上清液A，备用；b、将上清液A加入(NH4)2SO4达到28%的饱和度，搅拌45~52min后，于3~5℃静置过夜后，离心收集上清液B，备用；c、将上清液B再次加入(NH4)2SO4达到55%的饱和度，于3~5℃静置过夜后，离心收集沉淀，备用；d、将步骤c得到的沉淀用0.01mol/LPBS缓冲液溶解后装入透析袋去盐，离心，收集上清液C，将上清液C真空冷冻干燥，即可得到藻蓝蛋白干粉。进一步的，所述步骤a中超声破碎处理的间隙时间为2~4s，超声时间4~6s。进一步的，所述离心转速为9000~10050r/min，离心时间为55~65min。进一步的，所述步骤五中离心转速为3500~4500r/min，离心时间为25~35min。进一步的，所述步骤五中加酶量为123~127U/mL。本专利技术的有益效果在于：（1）本专利技术将粗粉碎后的水华蓝藻浸泡于添加有改性活性炭的蒸馏水中，通过改性活性炭吸附水华蓝藻溶液中的藻毒素，保证提取的蛋白质以及后续制备的减肥肽的质量；（2）本专利技术所述改性活性炭也是由水华蓝藻制得，使得水华蓝藻充分利用，实现经济利益最大化，通过将破碎的水华蓝藻浸泡于HCl溶液中，对水华蓝藻进行造孔，且通过将水华蓝藻置于添加有氯化亚铁溶液的发酵罐中发酵，使得氯化亚铁能够在水华蓝藻上附着并且进入其孔隙中，增大其孔隙结构且使得制得的活性炭具有磁性，从而具有较好的吸附性；（3）本专利技术的水华蓝藻溶液采用冻融法制得，可以高效的提取藻蓝蛋白，使蛋白质充分释放出来，同时避免其他细胞碎片的干扰，且藻蓝蛋白干粉的制备中采用硫酸铵分段盐析，不易引起蛋白质的变形，本专利技术将上清液C真空冷冻干燥，采用真空冷冻干燥，使得制得的藻蓝蛋白干粉具有疏松、溶解度好、保持天然结构等优点。具体实施方式下面结合具体实施例中的技术方案对本专利技术进行清楚、完整地描述。实施例1一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，包括以下步骤：步骤一、将水华蓝藻低温烘干，进行粗粉粹，得到粗粉碎后的水华蓝藻；步骤二、将粗粉碎后的水华蓝藻浸泡于添加有改性活性炭的蒸馏水中5h后，将水华蓝藻分离出来烘干，得到预处理的水华蓝藻，使用BENCKMAN高效液相色谱检测藻毒素的含量，直至藻毒素含量＜0.1μg/L；其中改性活性炭的制备方法为：（1）将水华蓝藻低温干燥，采用高速粉碎机破碎，得到破碎的水华蓝藻；（2）将破碎的水华蓝藻置于质量浓度为2mol/L的HCl中浸泡1~2h后，将其干燥，得到粗处理的水华蓝藻；（3）将粗处理的水华蓝藻置于添加有氯化亚铁溶液的发酵罐中发酵5h，待发酵结束后，将其取出干燥，得到二次处理的水华蓝藻，备用，所述发酵的条件为：温度为35℃，转速为350r/min；（4）将二次处理的水华蓝藻置于炭化炉中进行炭化，得到炭化物；（5）将炭化物浸泡于氢氧化钾溶液中，放置于恒温25℃的摇床中以160r/min的转速震荡11h；（6）将浸泡过氢氧化钾溶液的炭化物用蒸馏水冲洗后，干燥得到改性活性炭。步骤三、将预处理的水华蓝藻溶于1mmol/L的PBS缓冲液中，PBS缓冲液的PH为7.0，摇匀后置于-10℃冷冻，2h后3℃解冻，反复冻融多次，得到水华蓝藻溶液，备用；步骤四、将步骤三制得的水华蓝藻溶液制备得到藻蓝蛋白干粉，所述藻蓝蛋白干粉的制备方法为：a、将步骤三得到的水华蓝藻溶液在冰浴条件下超声破碎处理20min后，离心收集上清液A，备用，所述步骤a中超声破碎处理的间隙时间为2s，超声时间4s；b、将上清液A加入(NH4)2SO4达到28%的饱和度，搅拌45min后，于3℃静置过夜后，离心收集上清液B，备用；c、将上清液B再次加入(NH4)2SO4达到55%的饱和度，于3℃静置过夜后，离心收集沉淀，备用；d、将步骤c得到的沉淀用0.01mol本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、将水华蓝藻低温烘干，进行粗粉粹，得到粗粉碎后的水华蓝藻；步骤二、将粗粉碎后的水华蓝藻浸泡于添加有改性活性炭的蒸馏水中5~7h后，将水华蓝藻分离出来烘干，得到预处理的水华蓝藻；步骤三、将预处理的水华蓝藻溶于1mmol/L的PBS缓冲液中，摇匀后置于‑10~‑15℃冷冻，2~3h后3~5℃解冻，反复冻融多次，得到水华蓝藻溶液，备用；步骤四、将步骤三制得的水华蓝藻溶液制备得到藻蓝蛋白干粉；步骤五、将藻蓝蛋白干粉加水溶解，调节其PH为6.9~7.2，得到藻蓝蛋白溶液，将藻蓝蛋白溶液预热至80~90℃，保温30~40min后，使其冷却，向其加入中性蛋白酶，在48~53℃、pH值为6.9~7.2的条件下酶解4~6h，灭活后冷却离心获得酶解液；步骤六、将酶解液用大孔树脂分离纯化，即可得到减肥肽。

【技术特征摘要】
1.一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、将水华蓝藻低温烘干，进行粗粉粹，得到粗粉碎后的水华蓝藻；步骤二、将粗粉碎后的水华蓝藻浸泡于添加有改性活性炭的蒸馏水中5~7h后，将水华蓝藻分离出来烘干，得到预处理的水华蓝藻；步骤三、将预处理的水华蓝藻溶于1mmol/L的PBS缓冲液中，摇匀后置于-10~-15℃冷冻，2~3h后3~5℃解冻，反复冻融多次，得到水华蓝藻溶液，备用；步骤四、将步骤三制得的水华蓝藻溶液制备得到藻蓝蛋白干粉；步骤五、将藻蓝蛋白干粉加水溶解，调节其PH为6.9~7.2，得到藻蓝蛋白溶液，将藻蓝蛋白溶液预热至80~90℃，保温30~40min后，使其冷却，向其加入中性蛋白酶，在48~53℃、pH值为6.9~7.2的条件下酶解4~6h，灭活后冷却离心获得酶解液；步骤六、将酶解液用大孔树脂分离纯化，即可得到减肥肽。2.根据权利要求1所述的一种利用水华蓝藻制备减肥肽的方法，其特征在于：所述步骤二中改性活性炭的制备方法为：（1）将水华蓝藻低温干燥，采用高速粉碎机破碎，得到破碎的水华蓝藻；（2）将破碎的水华蓝藻置于质量浓度为2mol/L的HCl中浸泡1~2h后，将其干燥，得到粗处理的水华蓝藻；（3）将粗处理的水华蓝藻置于添加有氯化亚铁溶液的发酵罐中发酵5~7h，待发酵结束后，将其取出干燥，得到二次处理的水华蓝藻，备用，所述发酵的条件为：温度为35~38℃，转速为350~500r/min；（4）将二次处理的水华蓝藻置于炭化炉中进行炭化，得到炭化物；（5）将炭化物浸泡于氢氧化钾溶液中，放置于恒温25℃的...

【专利技术属性】
技术研发人员：田龙，褚学英，王丽，
申请(专利权)人：南阳师范学院，
类型：发明
国别省市：河南,41