一种植物纳米微粒复合物及其制备方法和应用技术

一种植物纳米微粒复合物及其制备方法和应用，属于药物技术领域。植物纳米微粒复合物通过以下工艺步骤制备得到：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。该纳米微粒复合物包含植物次生代谢产物、miRNA成分，可用于改善肠道上皮黏膜屏障和肺气血屏障，预防、治疗诸如流行性感冒、哮喘、肺炎、慢性阻塞性肺病、糖尿病、脂肪肝、肝硬化等疾病的药物或保健功能性食品的开发。

A Plant Nanoparticle Complex and Its Preparation Method and Application

The invention relates to a plant nanoparticle complex and a preparation method and application thereof, belonging to the field of pharmaceutical technology. The plant nanoparticle complex was prepared by following process steps: fresh medicinal plants were taken, PBS buffer solution was used as medium, and the plant nanoparticle complex was prepared by High-Speed Homogenization of fresh roots and rhizomes, gradient high-speed centrifugation. The nanoparticle complex contains plant secondary metabolites and microRNAs, which can be used to improve intestinal epithelial mucosal barrier and lung-qi-blood barrier, to prevent and treat diseases such as influenza, asthma, pneumonia, chronic obstructive pulmonary disease, diabetes mellitus, fatty liver, cirrhosis, and to develop health-care functional foods.

【技术实现步骤摘要】
一种植物纳米微粒复合物及其制备方法和应用
本专利技术属于药物
，具体涉及一种植物纳米微粒复合物及其制备方法和应用。
技术介绍
鲜药，即新鲜中药，主要是指新鲜植物类中草药的自然汁及其鲜活的动物或昆虫类药品。药材按季节采摘后，立刻用榨汁或低温冷藏的办法进行保鲜处理，然后将鲜药配入药方当中。从大量古代本草及方书文献中可窥见一斑，历代医家对鲜药区别于干药的特殊作用都有着精当的认识，对鲜药的运用有丰富的临床经验。尤其是随着温病学说的形成与发展，所用鲜药品种日益增多，所适应的病证日趋广泛成熟，对鲜药特殊功效的认识亦更加透彻，从而形成了中医临床用药的一大特色亮点，厚植人心。但其药效物质及其作用机制尚不清楚。多数情况下，细胞在匀浆匀浆和差速离心过程中，内膜系统(主要是内质网)的膜结构破裂后，可自行重新封闭起来，融合形成的近似球形的囊泡状结构，这些小囊泡的直径大约100nm，包含内质网膜、核糖体、细胞质等基本成分。由于这些纳米微粒粒径较小、体内渗透性强、极易透过血脑屏障用于局部疾病的治疗；再次，囊泡负载药物后可以绕开P-糖蛋白，显著降低药物进入细胞后的外排作用。因此，近年来采用细胞囊泡作为药物载体和治疗系统，成为恶性肿瘤疾病及阿尔茨海默症等疾病预防、治疗研究的热点。因此，新鲜中药榨汁后，滤液中的纳米小体，包括外泌体、囊泡、微粒体等，可携带植物细胞中的药效物质及miRNA等成分，通过口服直接吸收入血，直达患处进而发挥疗效。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种植物纳米微粒复合物及其制备方法和应用的技术方案。所述的一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。所述的一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：1）取新鲜药用植物，加新鲜药用植物质量3～10倍量的PBS缓冲溶液，采用匀浆机或搅拌机以30-100转/分钟破碎植物细胞5-30min；2）在4℃下，首先1000×g离心10min，吸取上清液，然后10000×g离心30min；吸取上清液后，10000～20000×g超速离心60-120min；3）除去上清液，所获得的沉淀即为纳米微粒复合物。所述的一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于所述的新鲜药用植物为生地黄、芦根、黄精、生姜、麦冬、天门冬或玉竹。所述的一种植物纳米微粒复合物，其特征在于通过以下工艺步骤制备得到：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。所述的一种植物纳米微粒复合物，其特征在于具体通过以下工艺步骤制备得到：1）取新鲜药用植物，加新鲜药用植物质量3～10倍量的PBS缓冲溶液，采用匀浆机或搅拌机以30-100转/分钟破碎植物细胞5-30min；2）在4℃下，首先1000×g离心10min，吸取上清液，然后10000×g离心30min；吸取上清液后，10000～20000×g超速离心60-120min；3）除去上清液，所获得的沉淀即为纳米微粒复合物。所述的一种植物纳米微粒复合物，其特征在于该复合物中活性成分占总重量的1‰～99.99％，所述的活性成分为新鲜药用植物中制备得到的植物次生代谢产物、miRNA成分或其药学上可接受的盐。所述的一种植物纳米微粒复合物，其特征在于所述的新鲜药用植物为生地黄、芦根、黄精、生姜、麦冬、天门冬或玉竹。所述的一种植物纳米微粒复合物在制备治疗肺部疾病和代谢性疾病药物中的应用。所述的应用，其特征在于所述的肺部疾病包括流行性感冒、哮喘、肺炎和慢性阻塞性肺病。所述的应用，其特征在于所述的代谢性疾病包括糖尿病、脂肪肝和肝硬化。通过本专利技术制得的纳米微粒复合物包含植物次生代谢产物、miRNA成分，可用于改善肠道上皮黏膜屏障和肺气血屏障，预防、治疗诸如流行性感冒、哮喘、肺炎、慢性阻塞性肺病、糖尿病、脂肪肝、肝硬化等疾病的药物或保健功能性食品的开发。附图说明图1为生地纳米微粒的外观（左图）和粒径大小（右图）；图2为对照品和生地纳米微粒中化学成分的HPLC色谱图，A为对照品，B为生地纳米微粒；图3为生地纳米微粒中microRNAs的相对表达丰度；图4为植物纳米微粒对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏脂质沉积的影响；图5为植物纳米微粒对TGF-β1诱导HSC细胞纤维化的抑制作用。具体实施方式以下结合实施例来进一步说明本专利技术。实施例1：生地纳米微粒的制备取新鲜洗净的生地黄药材160g，加PBS缓冲溶液1.5L，采用匀浆机或搅拌机以30-100转/分钟破碎植物细胞10min，细胞膜结构破裂后在溶液中重新自乳化形成10-100nm的纳米囊泡结构；在4℃下，首先1000×g离心10min，吸取上清液，然后10000×g离心30min；吸取上清液后，10000～20000×g超速离心60-120min；除去上清液，所获得的沉淀即为纳米微粒复合物。将上述2种沉淀重悬于（100μL）PBS缓冲液中，于-80℃冻存备用。采用透射电镜、纳米粒径仪、HPLC仪和高通量测序仪，分别检测生地纳米微粒的外观、粒径大小、化学成分及microRNA相对表达丰度。岛津LC-10AD液相色谱仪，SPD-10A紫外检测器，色谱柱：C18（250mm×4.6mm，5μm），流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液（1:99），检测波长为210nm，流速：1.0ml/min。在本色谱条件下，对照品与样品的色谱图见图1。由图1-3结果可知，生地纳米微粒粒径为100nm左右，呈圆形结构，其中含有地黄梓醇等药效成分（植物次生代谢成分）以及microRNA等成分。同法，可制备获得芦根、黄精、生姜、麦冬、天门冬、玉竹等植物纳米微粒，上述的纳米微粒粒径均在100nm左右，均含有植物次生代谢成分以及microRNA等成分。实施例2治疗流感病毒致小鼠急性肺损伤药效结果取4周龄ICR小鼠（18-20g），每组10只，雌雄各半。以10LD50的攻击量滴鼻感染，每鼠0.02ml，正常对照组在同一条件下，用无菌生理盐水代替病毒液滴鼻。于攻毒后2h开始尾静脉注射给药0.5mg/kg，每天一次，连续3次。于末次给药4h后处死小鼠，称肺重。表1植物纳米微粒对小鼠流感病毒肺炎的抑制作用注：与模型对照组相比，*p<0.05。由表1可知，生地、天门冬纳米微粒组，均可明显降低感染小鼠的肺指数，提高肺指数抑制率，减轻小鼠流感病毒所致肺炎的病变程度；而黄精、麦冬、玉竹纳米微粒尽管也能抑制感染小鼠的肺指数，但效果不及前面3种植物纳米微粒药效显著。实施例3治疗过敏性哮喘小鼠药效结果3周龄大小SPF级Balb/c小鼠，将小鼠随机分为正常组、哮喘组、地塞米松治疗组、生地纳米微粒组、黄精纳米微粒组、麦冬纳米微粒组、天门冬纳米微粒组及玉竹纳米微粒组。除对照组外，其余各组小鼠均于第0天、第14天给予100μlPBS（含100μgOVA）+100μl氢氧化铝凝胶共200μl腹腔注射致敏，第21天起给予5ml1%OVA高频雾化吸入进行激发，每天1次，每次30min，连续7d；治疗组于每间隔1天，在雾化前腹腔注射预先配好的含有相同浓度、不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。

【技术特征摘要】
1.一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于包括以下工艺步骤：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。2.如权利要求1所述的一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于具体包括以下步骤：1）取新鲜药用植物，加新鲜药用植物质量3～10倍量的PBS缓冲溶液，采用匀浆机或搅拌机以30-100转/分钟破碎植物细胞5-30min；2）在4℃下，首先1000×g离心10min，吸取上清液，然后10000×g离心30min；吸取上清液后，10000～20000×g超速离心60-120min；3）除去上清液，所获得的沉淀即为纳米微粒复合物。3.如权利要求1或2所述的一种植物纳米微粒复合物的制备方法，其特征在于所述的新鲜药用植物为生地黄、芦根、黄精、生姜、麦冬、天门冬或玉竹。4.一种植物纳米微粒复合物，其特征在于通过以下工艺步骤制备得到：取新鲜药用植物，以PBS缓冲溶液为介质，通过将新鲜植物块根、根茎高速匀浆，梯度高速离心，分离制备得到植物纳米微粒复合物。5.如权利要求4所述的一种植物纳米微粒复合物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：余陈欢，俞文英，张欢欢，应华忠，
申请(专利权)人：浙江省医学科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33