一种翅果油树的组织培养方法技术

本发明专利技术公开了一种翅果油树的组织培养方法，剪取翅果油树外植体(枝条、芽或叶)，用流动的自来水冲洗，然后进行常规消毒处理；将消毒处理好的外植体用抗生素浸泡，然后接种于诱导愈伤组织培养基中培养，获得无菌苗；以获得的无菌苗为材料，将萌发的嫩枝条剪成小段接种于继代培养基中培养，待茎段生长成5‑10cm长的幼苗时，接种于诱导根培养基中继续培养，进行生根诱导，最终获得翅果油树苗。本发明专利技术将外植体灭菌为无菌外植体，使得无菌外植体诱导产生愈伤组织，愈伤组织进一步培养发芽，生根，相对于传统育苗方法，具有增殖率高和成本低廉的优点。

A Tissue Culture Method of Elaeagnus mollissima

The invention discloses a tissue culture method of Elaeagnus mollissima, which cuts out its explants (branches, buds or leaves), flushes them with flowing tap water, and then carries out routine disinfection treatment; soaks the sterilized explants with antibiotics, and then inoculates them in the induction callus culture medium to obtain sterile seedlings; The aseptic seedlings obtained were cut into small segments and inoculated in subculture medium. When the stem segments grew into 5 10 cm seedlings, they were inoculated in induction root medium for further cultivation and rooting induction, and eventually Elaeagnus mollis seedlings were obtained. The invention sterilizes the explant as a sterile explant, so that the sterile explant can induce callus, and the callus can be further cultured, germinated and rooted. Compared with the traditional seedling raising method, the method has the advantages of high proliferation rate and low cost.

【技术实现步骤摘要】
一种翅果油树的组织培养方法
本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种翅果油树的组织培养方法。
技术介绍
植物组织培养概念(广义)又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念(狭义)指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。组织培养技术已经普遍应用于花卉、经济作物、林木的生产、保存、纯化、脱病毒、快速繁殖及新品种选育等过程。一直以来人们想了很多方法来保存植物，如保留果实，储存种子，储存块根、块茎、种球、鳞茎；用常温、低温、变温、低氧、充惰性气体等，这些方法在一定程度上收到了好的或比较好的效果，但仍存在许多问题。主要问题是付出的代价高，占的空间大，保存时间短，而且易受环境条件的限制。植物组织培养结合超低温保存技术，可以给植物种质保存带来一次大的飞跃。因为保存一个细胞就相当与保存一粒种子，但所占的空间仅为原来的几万分之一，而且在-193℃的液氮中可以长时间保存，不像种子那样需要年年更新或经常更新。翅果油树(拉丁学名ElaeagnusmollisDiels)，被子植物门、双子叶植物纲、蔷薇目、胡颓子科、胡颓子属直立乔木或灌木。公元1899年，法国植物学家格德首次在山西发现了这种前所未见的神奇物种；1966年，中国农林科学院院长郑万均教授确定了该树的中文学名——翅果油树，国务院于1999年8月将翅果油树列为国家二级重点保护植物，目前仅分布在我国的陕西和山西两地，为我国特有品种。2018年被列为国家一类保护树种。翅果油树有两种繁殖方式：其一是种子繁殖，但种子发芽率较低，未经任何处理的种子，发芽率为5.93％，发芽后能正常发育成籽苗的仅为1.69％。经过沙积处理的种子的发芽率为45.76％，但发芽后能正常发育成苗的也仅为11.02％。另外，翅果油树种子的寿命也短，保存一年后其发芽率几乎为零(上官铁梁，张峰，我国特有珍稀植物翅果油树濒危原因分析[J].生态学报，21(3)：502-505，2001)，且自然状态下的种子苗很少；其二是通过植株根蘖苗繁殖，但根蘖苗自生根能力差，繁殖系数低，而且通过这种营养繁殖方法长成的苗木病害严重。因此利用组织培养方法，尤其用种子苗为材料进行快速繁殖生产的翅果油树苗木具有无病毒、无菌，且繁殖系数高等优点。但目前关于翅果油树组织培养的研究非常少，更没有形成产业规模，这与传统组织培养方法不适应与翅果油树有一定关系。申请号为201610780875.7的中国专利公开了一种翅果油树定芽增殖与植株再生方法，该方法根据翅果油树腋芽处易萌发新芽的特点，采用成熟翅果油树种子无菌萌发获得实生苗，剪取带有腋芽或顶芽的幼嫩茎段为外植体，通过组织培养的方法促进腋芽萌发、伸长，获得具有一定木质化程度的健壮新枝，从而实现增殖的目的，然后经生根培养实现植株再生。但这种方法有以下缺点：生根率偏低，最大生根率为36.7％。为此，我们提出一种成本低廉，简便快速的组织培养方法以提高翅果油树的生根率。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的是根据翅果油树试管苗的建立过程和特点，提供一种成本低廉，简便快速的适用于翅果油树组织培养方法来培育翅果油树苗。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种翅果油树的组织培养方法，包括以下步骤：(1)剪取翅果油树外植体，所述外植体用流动的自来水冲洗，然后进行常规消毒处理；(2)将消毒处理好的外植体用抗生素浸泡；(3)将步骤(2)中处理好的外植体接种于诱导愈伤组织培养基中培养15-20天，获得无菌苗；(4)以步骤(3)获得的无菌苗为材料，将萌发的嫩枝条剪成小段接种于继代培养基中培养15-20天；(5)待步骤(4)中的茎段生长成5-10cm长的幼苗时，接种于诱导根培养基中继续培养，进行生根诱导，最终获得翅果油树苗。所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.01-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量。所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.01-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量。所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸4.0-6.0mg/L、α-萘乙酸0.01-0.02mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量。作为本专利技术再进一步的方案：所述外植体是枝条、芽或叶，用流动的自来水冲洗40分钟。所述枝条的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡8分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中6分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍。所述芽的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡4分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中3分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍。所述叶的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡4分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中2分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍。作为本专利技术再进一步的方案：将所述10％次氯酸钠溶液替换为0.1％HgCl2溶液。作为本专利技术再进一步的方案：所述抗生素是60％青霉素G钾溶液或者60％青霉素钠溶液中的一种，浸泡30分钟。作为本专利技术再进一步的方案：所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.02-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-25g/L、琼脂粉6-8g/L、纯净水补足余量。所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.02-0.04mg/L、Vc0.15-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉6-8g/L、纯净水补足余量。所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸4.0-6.0mg/L、α-萘乙酸0.01-0.02mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-25g/L、琼脂粉6-8g/L、纯净水补足余量。作为本专利技术再进一步的方案：所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.5mg/L、α-萘乙酸0.02mg/L、Vc0.15g/L、蔗糖20g/L、琼脂粉8g/L、纯净水补足余量。所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.5mg/L、α-萘乙酸0.04mg/L、Vc0.15g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉8g/L、纯净水补足余量。所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸5.0mg/L、α-萘乙酸0.01mg/L、Vc0.1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种翅果油树的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)剪取翅果油树外植体，所述外植体用流动的自来水冲洗，然后进行常规消毒处理；(2)将消毒处理好的外植体用抗生素浸泡；(3)将步骤(2)中处理好的外植体接种于诱导愈伤组织培养基中培养15‑20天，获得无菌苗；(4)以步骤(3)获得的无菌苗为材料，将萌发的嫩枝条剪成小段接种于继代培养基中培养15‑20天；(5)待步骤(4)中的茎段生长成5‑10cm长的幼苗时，接种于诱导根培养基中继续培养，进行生根诱导，最终获得翅果油树苗；所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4‑0.6mg/L、α‑萘乙酸0.01‑0.04mg/L、Vc 0.10‑0.20g/L、蔗糖15‑30g/L、琼脂粉4‑8g/L、纯净水补足余量；所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4‑0.6mg/L、α‑萘乙酸0.01‑0.04mg/L、Vc 0.10‑0.20g/L、蔗糖15‑30g/L、琼脂粉4‑8g/L、纯净水补足余量；所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸4.0‑6.0mg/L、α‑萘乙酸0.01‑0.02mg/L、Vc 0.10‑0.20g/L、蔗糖15‑30g/L、琼脂粉4‑8g/L、纯净水补足余量。...

【技术特征摘要】
1.一种翅果油树的组织培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)剪取翅果油树外植体，所述外植体用流动的自来水冲洗，然后进行常规消毒处理；(2)将消毒处理好的外植体用抗生素浸泡；(3)将步骤(2)中处理好的外植体接种于诱导愈伤组织培养基中培养15-20天，获得无菌苗；(4)以步骤(3)获得的无菌苗为材料，将萌发的嫩枝条剪成小段接种于继代培养基中培养15-20天；(5)待步骤(4)中的茎段生长成5-10cm长的幼苗时，接种于诱导根培养基中继续培养，进行生根诱导，最终获得翅果油树苗；所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.01-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量；所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.01-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量；所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸4.0-6.0mg/L、α-萘乙酸0.01-0.02mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉4-8g/L、纯净水补足余量。2.根据权利要求1所述的翅果油树的组织培养方法，其特征在于，所述外植体是枝条、芽或叶，用流动的自来水冲洗40分钟；所述枝条的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡8分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中6分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍；所述芽的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡4分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中3分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍；所述叶的常规消毒处理方法：用70％酒精浸泡4分钟，浸泡过程中不断摇晃，取出，用无菌水冲洗3-5次，去除多余水分，浸泡在10％次氯酸钠溶液中2分钟，振动，取出，在超净工作台用无菌水冲洗6-8遍。3.根据权利要求2所述的翅果油树的组织培养方法，其特征在于，将所述10％次氯酸钠溶液替换为0.1％HgCl2溶液。4.根据权利要求1所述的翅果油树的组织培养方法，其特征在于，所述抗生素是60％青霉素G钾溶液或者60％青霉素钠溶液中的一种，浸泡30分钟。5.根据权利要求1所述的翅果油树的组织培养方法，其特征在于，所述每升诱导愈伤组织培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.02-0.04mg/L、Vc0.10-0.20g/L、蔗糖15-25g/L、琼脂粉6-8g/L、纯净水补足余量；所述每升继代培养基的组分及各组分的含量如下：MS、苄氨基嘌呤0.4-0.6mg/L、α-萘乙酸0.02-0.04mg/L、Vc0.15-0.20g/L、蔗糖15-30g/L、琼脂粉6-8g/L、纯净水补足余量；所述每升诱导根培养基的组分及各组分的含量如下：1/2MS、吲哚丁酸4.0-6....

【专利技术属性】
技术研发人员：王小帆，史玮，陈思思，
申请(专利权)人：西安同人五凤农业有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61