一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法技术

一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法，包括以下步骤；步骤一，选取丙烯酰胺测量其吸光度值；步骤二；不加丙烯酰胺测量其吸光度值；步骤三：实际样品的提取；步骤四：测定实际速溶咖啡样品中丙烯酰胺的含量；本发明专利技术研究了还原型谷胱甘肽易被氧化脱氢，丙烯酰胺和还原型谷胱甘肽发生亲核加成反应，在酸性条件下，以Fe

【技术实现步骤摘要】
一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法
本专利技术涉及测定丙烯酰胺
，特别涉及一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法。
技术介绍
丙烯酰胺是一种在热加工食品过程中形成的一种致癌化学物质。速溶咖啡中丙烯酰胺含量不容忽视。广泛使用的检测丙烯酰胺的分析方法是气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱法、高效液相色谱法(HPLC)和毛细管电泳法。丙烯酰胺常规检测方法存在仪器昂贵、测试成本高、样品预处理过程复杂等问题。电化学测定法在低成本，灵敏度高等方面显示出优越性，近年来多有报道。然而传感器的重现性还是亟待解决的重要问题。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法，研究了还原型谷胱甘肽易被氧化脱氢，丙烯酰胺和还原型谷胱甘肽发生亲核加成反应，在酸性条件下，以Fe3+-邻菲罗啉为显色体系，还原型谷胱甘肽将Fe3+还原为Fe2+，Fe2+与邻菲罗啉发生显色反应，加入的丙烯酰胺与还原型谷胱甘肽发生反应，降低了还原型谷胱甘肽的浓度，阻抑体系还原生成Fe2+。为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法，包括以下步骤；步骤一，选取丙烯酰胺测量其吸光度值；量取一定体积的丙烯酰胺标准溶液，依次加入还原型谷胱甘肽标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，转移至25mL容量瓶，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤二；不加丙烯酰胺测量其吸光度值；另取一25mL容量瓶，依次加入还原型GSH标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤三：实际样品的提取；称取速溶咖啡0.2g，然后用30ml热水将其溶解，将溶解后的速溶咖啡溶液转移至离心试管中，设置离心机转速4000r、离心时间30min，离心结束后取出上清液；步骤四：测定实际速溶咖啡样品中丙烯酰胺的含量；将1×105μg/L步骤一中的丙烯酰胺标准溶液逐级稀释浓度为1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L一系列溶液，取五个比色管各加入步骤三中的上清液2ml、5mlGSH(1×106μg/L)，分别加入1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L的丙烯酰胺溶液2ml，第五个比色管中为步骤二中的不加丙烯酰胺溶液，再分别加入0.9ml显色剂、5ml缓冲液，然后用水定容至25ml，经过加热和冷却后在510nm测定其吸光值，另取五个比色管加入2ml样品2的上清液，其他条件不变进行测定，参比溶液为5ml还原型谷胱甘肽、5mlHAc-NaAc缓冲溶液在比色管中用水定容至25ml得到的，然后与步骤一、二的吸光度值进行对比，得到数据。所述的丙烯酰胺的吸收波长为510nm。所述的HAc-NaAc缓冲液的pH为4.0，用量为5mL。所述的还原型谷胱甘肽标准溶液的浓度为1×105μg/L，用量为4mL。所述的显色剂的用量为0.9ml。所述的丙烯酰胺标准溶液的配制为：准确称取0.0100g丙烯酰胺，加入适量二次蒸馏水溶解，定容至100ml容量瓶，得到1×105μg/L丙烯酰胺标准溶液，使用前在4℃冰箱保存。所述的显色剂的配制：分别准确称取0.0910g邻菲罗啉和0.2380g硫酸铁铵混合、加入适量二次蒸馏水溶解后，加入2mL1mol/L盐酸溶液，转移至100mL容量瓶，定容至刻度线。本专利技术的有益效果：建立了一种可靠、准确、简便、快速、经济的速溶咖啡中AAm的分析方法，可作为速溶咖啡中丙烯酰胺分析的一种新方法，在食品质量监测方面推广使用。附图说明图1为本专利技术吸收曲线图。图2为本专利技术温度的影响图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步详细说明。实施例：步骤一，选取丙烯酰胺测量其吸光度值；量取一定体积的丙烯酰胺标准溶液，依次加入还原型谷胱甘肽标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，转移至25mL容量瓶，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤二；不加丙烯酰胺测量其吸光度值；另取一25mL容量瓶，依次加入还原型GSH标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤三：实际样品的提取；称取速溶咖啡0.2g，然后用30ml热水将其溶解，将溶解后的速溶咖啡溶液转移至离心试管中，设置离心机转速4000r、离心时间30min，离心结束后取出上清液；步骤四：测定实际速溶咖啡样品中丙烯酰胺的含量；将1×105μg/L步骤一中的丙烯酰胺标准溶液逐级稀释浓度为1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L一系列溶液，取五个比色管各加入步骤三中样品1的上清液2ml、5mlGSH(1×106μg/L)，分别加入1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L的丙烯酰胺溶液2ml，第五个比色管中为步骤二中的不加丙烯酰胺溶液，再分别加入0.9ml显色剂、5ml缓冲液，然后用水定容至25ml，经过加热和冷却后在510nm测定其吸光值，另取五个比色管加入2ml样品2的上清液，其他条件不变进行测定，参比溶液为5ml还原型谷胱甘肽、5mlHAc-NaAc缓冲溶液在比色管中用水定容至25ml得到的。(1)最佳吸收波长的确定取一25mL容量瓶中，依次加入2mlAAm标准溶液、5ml还原型GSH标准溶液、0.9ml显色剂和5mlHAc-NaAc缓冲液(pH4.0)，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，为待测阻抑体系。另取一25mL容量瓶，依次加入5ml还原型GSH标准溶液、0.9ml显色剂和5mlHAc-NaAc缓冲液(pH4.0)，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，为待测非阻抑体系。按照实验方法，在450～530nm波长范围内测定吸光度，如附图1所示。1线为待测非阻抑体系吸光度；2线为待测非阻抑体系吸光度测定结果。加入AA后整体的吸光值都有所下降，在510nm处出现最大吸收峰。(2)温度、反应时间的影响研究了温度及反应时间对测定结果的影响。附图2a为未加显色剂的试剂空白，b为加入显色剂后生成邻菲罗啉-Fe2+有色配合物，此时测定其吸光度值不稳定，是由于Fe3+反应不完全。为加快反应速率，将待测样品体系于沸水浴中加热后，冷却至室温进行测定。加热后颜色加深，如图2c所示。吸光度值随着加热时间的增加而增加，加热6min后，吸光度值达到最大，并不再发生变化。本法确定反应条件为在沸水浴中加热6min。(3)试剂用量的选择沸水浴中反应6min条件不变，在25mL容量瓶中固定还原型GSH标准溶液体积5mL，加入一定体积的样品溶液，依次加入显色剂和缓冲液，稀释至刻度，按照实验方法测定。实验表明，显色剂和HAc-NaAc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法，其特征在于，包括以下步骤；步骤一，选取丙烯酰胺测量其吸光度值；量取一定体积的丙烯酰胺标准溶液，依次加入还原型谷胱甘肽标准溶液、显色剂和HAc‑NaAc缓冲液，转移至25mL容量瓶，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤二；不加丙烯酰胺测量其吸光度值；另取一25mL容量瓶，依次加入还原型GSH标准溶液、显色剂和HAc‑NaAc缓冲液，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤三：实际样品的提取；称取速溶咖啡0.2g，然后用30ml热水将其溶解，将溶解后的速溶咖啡溶液转移至离心试管中，设置离心机转速4000r、离心时间30min，离心结束后取出上清液；步骤四：测定实际速溶咖啡样品中丙烯酰胺的含量；将1×10

【技术特征摘要】
1.一种速溶咖啡中丙烯酰胺含量的可见分光光度测定方法，其特征在于，包括以下步骤；步骤一，选取丙烯酰胺测量其吸光度值；量取一定体积的丙烯酰胺标准溶液，依次加入还原型谷胱甘肽标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，转移至25mL容量瓶，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤二；不加丙烯酰胺测量其吸光度值；另取一25mL容量瓶，依次加入还原型GSH标准溶液、显色剂和HAc-NaAc缓冲液，用二次蒸馏水稀释至刻度线，摇匀，将容量瓶放入沸水浴中加热6min，流水冷却至室温，设定最佳波长，用1cm比色皿，以试剂空白为参比测定其吸光度值；步骤三：实际样品的提取；称取速溶咖啡0.2g，然后用30ml热水将其溶解，将溶解后的速溶咖啡溶液转移至离心试管中，设置离心机转速4000r、离心时间30min，离心结束后取出上清液；步骤四：测定实际速溶咖啡样品中丙烯酰胺的含量；将1×105μg/L步骤一中的丙烯酰胺标准溶液逐级稀释浓度为1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L一系列溶液，取五个比色管各加入步骤三中样品1的上清液2ml、5mlGSH(1×106μg/L)，分别加入1400μg/L、1200μg/L、900μg/L、100μg/L的丙烯酰胺溶液2ml，第五个比色管中为步骤二中的不加丙烯酰胺溶液，再分别加入0.9ml显色剂、5ml缓冲液，然后用水定容至25ml，经过加热...

【专利技术属性】
技术研发人员：张东霞，罗春阳，寇宰，
申请(专利权)人：西京学院，
类型：发明
国别省市：陕西,61