【技术实现步骤摘要】
一种双sgRNA位点敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统与应用
本专利技术属于生物工程
,特别涉及肿瘤发生、发展相关基因敲除方法,具体涉及一种双sgRNA位点敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统与应用。
技术介绍
LRRC20(富亮氨酸重复序列20,leucinerichrepeatcontaining20),富亮氨酸重复序列(LRR)存在于多种蛋白质中,介导多种蛋白与蛋白之间的互用。近年来研究发现:LRRC超家族成员在不同类型的恶性肿瘤中,其表达特点和作用都存在差异,由于LRRC超家族成员作用的复杂性,因此推测LRRC超家族成员可能通过蛋白互作调控肿瘤细胞的生长和侵袭转移。LRRC超家族成员LRRC4、LRRC3B和LG11在多种肿瘤组织表达缺失或显著降低,并具有抑癌基因的功能;而另外一些LRRC超家族成员LGR4和LGR5在肿瘤中高表达,表现出原癌基因的作用。深入研究该家族成员在肿瘤发生和进展中的作用和机制,有助于发展新的肿瘤标志物和靶向治疗分子,为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌在长期演化过程中形成的一种适应性免疫防御,可用来消除入侵的病毒及外源DNA。CRISPR/Cas系统通过将入侵噬菌体和质粒DNA的片段整合到CRISPR中,并利用相应的CRISPRRNAs(crRNAs)来指导同源序列的降解,从而提供免疫性。此系统的工作原理是crRNA(CRISPR-derivedRNA)通过碱基配对与tracrRNA(trans-activatingRNA)结合形成tracrRNA/crRN ...
【技术保护点】
1.一种敲除LRRC20基因的sgRNA,其特征在于,包括LRRC20 sgRNA‑1和LRRC20 sgRNA‑2;所述LRRC20 sgRNA‑1的序列如下:LRRC20 sgRNA‑1:GGTGTAGGAAGTTCCCCTCCLRRC20 sgRNA‑1 oligo1:5’‑caccGGTGTAGGAAGTTCCCCTCC‑3’;LRRC20 sgRNA‑1 oligo2:5’‑aaacGGAGGGGAACTTCCTACACC‑3’;所述LRRC20 sgRNA‑2的序列如下:LRRC20 sgRNA‑2:GCTTACCGCCCTGCCGGCGCLRRC20 sgRNA‑2 oligo1:5’‑caccGCTTACCGCCCTGCCGGCGC‑3’;LRRC20 sgRNA‑2 oligo2:5’‑aaacGCGCCGGCAGGGCGGTAAGC‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种敲除LRRC20基因的sgRNA,其特征在于,包括LRRC20sgRNA-1和LRRC20sgRNA-2;所述LRRC20sgRNA-1的序列如下:LRRC20sgRNA-1:GGTGTAGGAAGTTCCCCTCCLRRC20sgRNA-1oligo1:5’-caccGGTGTAGGAAGTTCCCCTCC-3’;LRRC20sgRNA-1oligo2:5’-aaacGGAGGGGAACTTCCTACACC-3’;所述LRRC20sgRNA-2的序列如下:LRRC20sgRNA-2:GCTTACCGCCCTGCCGGCGCLRRC20sgRNA-2oligo1:5’-caccGCTTACCGCCCTGCCGGCGC-3’;LRRC20sgRNA-2oligo2:5’-aaacGCGCCGGCAGGGCGGTAAGC-3’。2.一种双sgRNA位点靶向敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统,其特征在于,包括权利要求1所述LRRC20sgRNA-1和LRRC20sgRNA-2的DNA序列。3.如权利要求2所述的双sgRNA位点靶向敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1,使用BsmbI酶切CRISPR/Cas9载体LentiCRISPRV2,得到酶切后的载体;步骤2,将所述靶向敲除LRRC20基因的sgRNA的DNA序列磷酸化后与酶切后的LentiCRISPR-V2载体连接,得到得到靶向敲除LRRC20基因的LentiCRISPRV2-LRRC20sgRNA-1&LentiCRISPRV2-LRRC20sgRNA-2,构建靶向敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统。4.如权利要求2或3所述靶向敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统在制备敲除LRRC20基因的细胞株中的应用。5.一种敲除LRRC20基因的细胞株,其特征在于,所述细胞株是运用权利要求2所述双sgRNA位点靶向敲除LRRC20基因的CRISPR/Cas9系统进行靶向敲除得到的细胞中的LRRC20基因缺失的细胞株。6.如权利要求5所述的敲除LRRC20基因的细胞株,其特征在于,所述细胞株为A549细胞株。7.如权利要求5所述的敲除LRRC20基因的细胞株,其特征在于...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵恩峰,贺小宏,王延宾,任江涛,韩露,
申请(专利权)人:南京北恒生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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