一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，采用阶段性喂养的方式，使用普通维持饲料、高脂高胆固醇饲料和草料结合饲养6‑8周龄（儿童期）的大白兔，成功建立了儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型。该模型同时具备代谢综合征所引发的早期冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化，蛋白尿性肾病等疾病病征，可用于代谢综合征及其并发的多脏器病变的病因学，病理学研究和药学评价。

An Animal Model of Metabolic Syndrome in Children and Adolescents and Its Construction Method

The invention discloses a method for constructing an animal model of metabolic syndrome in children and adolescents. The animal experimental model of metabolic syndrome in children and adolescents has been successfully established by feeding the rabbits aged 6 to 8 weeks (childhood) with common maintenance feed, high-fat and high-cholesterol feed and forage. The model has the symptoms of early coronary heart disease, atherosclerosis, fatty liver and non-alcoholic steatohepatitis, liver fibrosis, proteinuric nephropathy and other diseases caused by metabolic syndrome. It can be used for the etiology, pathology and pharmacological evaluation of metabolic syndrome and its complicated multiple organ diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型及构建方法
本专利技术涉及医疗
，特别是涉及一种高脂高胆固醇诱发儿童及青少年代谢综合征的动物模型及建立方法。
技术介绍
代谢综合征(MS)是多种代谢成分异常聚集的病理状态,主要表现:腹型肥胖或超体质量、血脂异常、高血压、胰岛素抵抗和/或葡萄糖耐量异常,这些代谢紊乱症候群是心血管疾病和Ⅱ型糖尿病的高度危险因素。2018年中国大健康数据披露我国肥胖人口达到3.25亿，其中儿童及青少年的肥胖率占30%，未来20年这个数据将增加一倍，达到6.5亿。儿童及青少年肥胖的脂肪肝发生率达到40-50%。在肥胖儿童和青少年中,同样存在这些代谢异常并成流行趋势,儿童期MS预示成人期MS和Ⅱ型糖尿病的可能性大大增加。资料统计推测未来20年由肥胖引发的Ⅱ型糖尿病将增加33倍，心血管疾病将达到3亿人，肥胖引发的肿瘤将增加8倍。建立儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型对于儿童及青少年代谢综合征的研究以及临床预防具有很强的应用价值。现有技术下采用高脂高胆固醇饲料造模的方法多用于非酒精性脂肪性肝病、动脉粥样硬化、外源性高脂血症等动物模型的建立，然而这些模型通常只能出现一种或几种疾病的病征。目前儿童及青少年肥胖及其引发的代谢综合征的实验动物模型在实验研究、新药开发和医疗研究领域仍处于近空白区域。
技术实现思路
本专利技术利用实验大白兔的自然生理成长周期，采用特制的高脂高胆固醇饲料饲养6-8周龄（儿童期）的大白兔成功建立了儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型。该模型同时具备代谢综合征所引发的早期冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化，蛋白尿性肾病等疾病病征，可用于代谢综合征及其并发的多脏器病变的病因学，病理学研究和药学评价。本专利技术具体技术方案如下：一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，对6-8周龄的兔（兔生后一个月到八个月的期间相当于人儿童及青少年期）饲喂高脂高胆固醇饲料、普通维持饲料和草料构建动物模型，所述高脂高胆固醇饲料为含有质量百分比为8-15%%脂肪和0.75-2%胆固醇的普通维持饲料，所述草料为苜蓿草（干料），所述普通维持饲料为常规兔饲料，饲喂分为两个阶段：第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料等量进行投喂，同时添加普通维持饲料量30-50%的草料投喂，第三天至第七天采用梯度降低普通维持饲料的量并梯度提高高脂高胆固醇饲料的量进行投喂，普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料的总量维持不变，保持草料投喂量不变；第二阶段：建模第二周开始延续第一阶段第七天的饲料和草料配比进行每天投喂。本专利技术所述高脂高胆固醇饲料优选为含有10%脂肪（猪油）和2.0%胆固醇的普通维持饲料。本专利技术所述兔优选为雌性或雄性，6-8周龄新西兰白兔。本专利技术所述的构建方法，优选：第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为5：5：2进行投喂，第三天和第四天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为4：6：2进行投喂，第五天和第六天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为3：7：2进行投喂，第七天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂。第二阶段：建模第为建模第二周开始采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂。上述构建方法，优选：每日饲料（普通维持饲料+高脂高胆固醇饲料）饲喂总量100克，草料（苜蓿草）饲喂总量20克。饲喂方法分为两个阶段，第一阶段为模型第一周，饲喂方式为第一天和第二天普通维持饲料50克+高脂高胆固醇饲料50克，草料20克，第三天和第四天普通维持饲料40克+高脂高胆固醇饲料60克，草料20克，第五天和第六天普通维持饲料30克+高脂高胆固醇饲料70克，草料20克，第七天普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克。第二阶段为模型第二周至模型第二十一周，饲喂方式为普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克。本专利技术所述的构建方法，采用每天2次，每次总饲料（普通维持饲料+高脂高胆固醇饲料+草料）投喂量为60g/每只兔。本专利技术所述的构建方法，第二阶段时长为3-20周，优选8周。本专利技术另一目的在于提供一种高脂高胆固醇饮食基础上的儿童及青少年代谢综合征模型，采用本专利技术所述方法构建而成。本专利技术所述的模型伴有冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病等临床和病理特征。本专利技术的另一目的在于提供本专利技术所述的代谢综合征模型在动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病，特别是在儿童和青少年代谢综合征的基础研究中的应用以及在冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病的临床药物开发中的应用。本专利技术有益效果：（1）现有技术下采用成年兔进行造模，通常采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式，本专利技术在研究中发现对于未成年的兔采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式，动物难以耐受，会导致动物胃肠道消化功能紊乱，在造模的1-2周内会出现动物因不耐受高脂饮食而死亡，本专利技术对饲料配比以及饲喂方式进行了调整，采用阶段性逐渐提高高脂高胆固醇饲料的饲喂量，逐步提高未成年的兔的适应能力，保证造模成功率。（2）本专利技术进一步在饲喂过程中添加苜蓿草草料，不仅缓解动物对高脂高胆固醇饲料消化不良的症状，提高动物的存活率，还能够使造模中过程动物病程进展稳定，更好地模拟儿童及青少年代谢综合征的发病过程和的各种并发症状。（3）本专利技术在造模研究中发现不同配方的高脂高胆固醇饲料饲喂造模情况不同，虽然同属于高脂高胆固醇饲料，但有的配方存在成模情况不稳定性，成模时间的不确定的情况，本专利技术采用特定的配方和饲喂方式实现了100%造模成功。血液生化检测结果显示，本专利技术所述方法构建得到代谢综合征兔模型兼具早期冠心病的临床心电图变化和心脏以及冠状动脉的病理变化特点，非糖尿病性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎以及肝纤维化的特点，高脂高胆固醇诱发的动脉粥样硬化的病理变化特点，高脂高胆固醇以及肥胖诱发的肥胖性肾病的病理变化特点。模型成功率百分之百，稳定性好，无死亡率。填补了该领域的动物模型的空白，特别是动物冠心病模型，肥胖性肾病模型，为人类代谢综合征，特别是儿童和青少年的肥胖和代谢综合征的研究，以及新药研发提供了不可缺少的实验动物模型。附图说明图1为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时空腹血糖。图2为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆HDL-c和LDL-c。图3为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆TG和TC。图4为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时动物肝脏。图5为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏重量和肝脏指数。图6为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆ALT和AST。图7为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时肝细胞脂肪变评分、肝组织炎症评分、肝细胞气球样变评分及肝脏NAS评分结果。图8为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏病理学变化H&E染色结果。图9为本专利技术所述方法构建的模型动物8周及20周时肝纤维化定量分析结果。图10为本专利技术所述方法构建的模型动物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，其特征在于对6‑8周龄的兔饲喂普通维持饲料、高脂高胆固醇饲料、草料构建动物模型，所述高脂高胆固醇饲料为含有8‑15%脂肪和0.75‑2%胆固醇的普通维持饲料，所述草料为苜蓿草，饲喂分为两个阶段：第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料等量进行投喂，同时添加普通维持饲料量30‑50%的草料投喂，第三天至第七天采用梯度降低普通维持饲料的量并梯度提高高脂高胆固醇饲料的量进行投喂，普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料的总量维持不变，保持草料投喂量不变；第二阶段：建模第二周开始延续第一阶段第七天的饲料和草料配比进行每天投喂。

【技术特征摘要】
1.一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，其特征在于对6-8周龄的兔饲喂普通维持饲料、高脂高胆固醇饲料、草料构建动物模型，所述高脂高胆固醇饲料为含有8-15%脂肪和0.75-2%胆固醇的普通维持饲料，所述草料为苜蓿草，饲喂分为两个阶段：第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料等量进行投喂，同时添加普通维持饲料量30-50%的草料投喂，第三天至第七天采用梯度降低普通维持饲料的量并梯度提高高脂高胆固醇饲料的量进行投喂，普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料的总量维持不变，保持草料投喂量不变；第二阶段：建模第二周开始延续第一阶段第七天的饲料和草料配比进行每天投喂。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述高脂高胆固醇饲料为含有10%高脂和2.0%胆固醇的普通维持饲料。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述兔为新西兰白兔。4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于：第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄永杰，杨祖经，陈继巧，姜世浩，靳策，沈红英，甘婷，
申请(专利权)人：凯斯艾生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32