The invention discloses a rapid detection method of molecular biology for Aspergillus fumigatus azole resistance, which collects clinical samples, extracts fungal DNA with fungal trace DNA extraction kit, amplifies fungal ITS specific citation, sequences the amplified results, determines fungal species in samples by blast, optimizes TaqMan probe if Aspergillus fumigatus exists, and detects L98H mutant by realtime PCR technology. Does the corresponding nucleic acid locus DNA 363 365 BP have mutation? The present invention has the advantages of short time-consuming, good sensitivity and high accuracy.
【技术实现步骤摘要】
一种烟曲霉唑类耐药的分子生物学快速检测方法
本专利技术涉及一种烟曲霉唑类耐药的分子生物学快速检测方法，属于耐药监测领域。
技术介绍
曲霉是最常见的环境真菌，多感染免疫缺陷人群引起肺、鼻窦和脑曲霉病，治疗困难且病死率高。一项北美对960例侵袭性曲霉病的研究发现，主要为血液肿瘤、器官移植和造血干细胞移植患者并发肺部感染，12周内病死率高达45.6％。我国的数据提示侵袭性曲霉病在血液干细胞移植患者发病率10.8％而病死率60％，肝移植患者发病率4.8％而病死率62.5％，并且侵袭性曲霉病的发病率在逐年增加。侵袭曲霉病绝大多数由烟曲霉引起，在欧洲达到95％以上。自1997年美国报道了首例伊曲康唑耐药以来，烟曲霉耐药逐渐增加，中国孙毅等也陆续报道了烟曲霉伊曲康唑耐药和联合耐药。英国研究发现烟曲霉唑类耐药比率1997-1998年为0％，2004-2005年为5％，2007年为17％，2008年为14％，2009年为20％，其中2008-2009年78％耐药株为多重耐药。唑类药物使真菌病治疗有了革命性的突破，不仅仅因为抗菌谱广，还因为相对于两性霉素B药物毒性明显降低。2008年美国感染性疾病协会发表的曲霉病治疗方案中，肺、鼻窦和脑等侵袭性曲霉病首选伏立康唑，其次为两性霉素B及其脂质体、卡泊芬净、泊沙康唑和伊曲康唑。伊曲康唑、伏立康唑和泊沙康唑可口服，故慢性或过敏性曲霉病首选。因此，烟曲霉唑类耐药的临床危害很大，且有逐渐增加的趋势，需要密切关注和积极研究。国内外的真菌耐药检测还是以传统真菌培养和药敏实验为主，耗时长，敏感性差。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的上述缺陷，...
【技术保护点】
1.一种烟曲霉唑类耐药的分子生物学快速检测方法，其特征在于：采集临床标本，用真菌微量DNA提取试剂盒提取真菌DNA，使用真菌ITS特异引文进行扩增，将扩增结果进行测序，blast确定标本中真菌种类，如果有烟曲霉，优化TaqMan探针，使用realtimePCR技术检测L98H突变型对应的核酸位点DNA第363‑365bp有无突变。
【技术特征摘要】
1.一种烟曲霉唑类耐药的分子生物学快速检测方法，其特征在于：采集临床标本，用真菌微量DNA提取试剂盒提取真菌DNA，使用真菌ITS特异引文进行扩增，将扩增结果进行测序，blast确定标本中真菌种类，如果有烟曲霉，优化TaqMan探针，使用r...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘沐桑，刘维达，郑海林，梁官钊，
申请(专利权)人：中国医学科学院皮肤病医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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