The invention provides a method for culturing stem cells of white goat hair follicle in the Yangtze River Delta by tissue block method. The cell line is in a good state of growth and division, showing a typical paving stone shape. Primary cells climb out of tissue blocks faster. On the third day, cells can climb out of tissue blocks, and on the fourth day, around each tissue block can be observed in the field of microscopy. A large number of cells climbed out of the tissue mass. On the fifth day, a large mass of cells could be observed around the tissue mass under the microscope. At this time, the first passage was carried out. The hair follicle stem cell lines constructed in the Yangtze River Delta have strong vitality and high positive rate of hair follicle stem cell markers, which can provide a good practical model for the study of gene expression and pathway regulation of skin cells, the growth and differentiation mechanism of skin accessory structures, especially the interaction mechanism between skin main cells.
【技术实现步骤摘要】
组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法
本专利技术属于生物
,具体涉及一种简单、快速分离组织块法培养长江三角洲白山羊(海门山羊)毛囊干细胞方法。
技术介绍
哺乳动物的毛发是由毛囊内的成体干细胞分化而来的,经历脱落和再生两个过程,毛囊是研究成体干细胞的理想模型。毛囊干细胞广泛的存在于皮肤毛囊结构中,是毛囊中的原始细胞,具有多向分化潜能,能通过自身的分裂增殖产生机体所需的细胞。毛囊干细胞位于毛囊隆突部,对毛发周期的维持、组织维持和更新、皮肤损伤修复等密切相关。毛囊(HF)是研究成体干细胞的理想系统,毛囊干细胞与毛囊周期状态密切相关,,毛囊干细胞在受到外界刺激如皮肤损伤或者剪毛等,毛囊干细胞发生募集,促进皮肤修复和毛发生成。目前大多数分离方法都以小鼠触须毛囊和人类毛发为实验材料,这两种实验材料的毛囊组织较大,通过肉眼可轻松观察并分离培养。主要的分离方法有机械分离法和酶消化法,两种方法虽然均能获得毛囊干细胞细胞,但仍存在组织块贴附不牢、细胞因酶消化和机械分离而损伤等不足,目前国内外鲜有方法描述山羊毛囊干细胞分离过程,大多集中在细毛羊和绒山羊,而绵羊和山羊的毛囊结构在显微镜大小、形态都有差别,就使得毛囊干细胞的分离方法在物种间不能完全适用。长江三角洲白山羊是唯一能生产三类笔料毛的山羊,对于长江三角洲白山羊毛囊干细胞的研究对于我国长江三角洲白山羊产业发展具有重要的意义,不仅可为长江三角洲白山羊羊毛生长调节机制、毛囊生长规律等研究奠定坚实的理论基础,而且可为羊毛品质、产量和质量的提高提供重要的理论和技术支持。因此,找到一种适合长江三角洲白山羊毛囊干细胞的制备 ...
【技术保护点】
1.组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法,其特征是,包括以下步骤:1)样本选取120天胎龄的长江三角洲白山羊,采集其颈背部皮肤冲洗消毒后带回实验室;2)将步骤1)中的样本切成1mm×1mm大小的组织块,放入0.25%的胰蛋白酶中,在37℃饱和湿度的培养箱中消化90min;3)随即拿出并用含10%胎牛血清的培养液,漂洗组织块,并把组织块贴附在用I型鼠尾胶原包被的培养皿上;4)把培养皿放入培养箱中37℃消化孵育30min后,加入含10%胎牛血清的培养液,37℃饱和湿度培养,每隔3天换液观察细胞生长情况;5)当在显微镜下观察到每块组织块周围有大片原代细胞迁移出组织块时,进行传代培养。
【技术特征摘要】
1.组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法,其特征是,包括以下步骤:1)样本选取120天胎龄的长江三角洲白山羊,采集其颈背部皮肤冲洗消毒后带回实验室;2)将步骤1)中的样本切成1mm×1mm大小的组织块,放入0.25%的胰蛋白酶中,在37℃饱和湿度的培养箱中消化90min;3)随即拿出并用含10%胎牛血清的培养液,漂洗组织块,并把组织块贴附在用I型鼠尾胶原包被的培养皿上;4)把培养皿放入培养箱中37℃消化孵育30min后,加入含10%胎牛血清的培养液,37℃饱和湿度培养,每隔3天换液观察细胞生长情况;5)当在显微镜下观察到每块组织块周围有大片原代细胞迁移出组织块时,进行传代培养。2.根据权利要求1所述的组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法,其特征是,步骤1)中,样本采集于江苏省国营海门市种羊场,先用手术刀刮干净表面的羊毛,用酒精消毒,再用手术刀割下2cm×2cm的完好皮肤组织样,该皮肤组织样包含表皮层、真皮层、皮下结缔组织,用生理盐水洗净,75%酒精消毒30s后再次用加入5%双抗的生理盐水冲洗3次并放入无血清培养液,于冰盒中带回实验室,在12h内进行分离培养。3.根据权利要求2所述的组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法,其特征是,步骤2)中,将步骤1)中采集的皮肤组织样经75%酒精浸泡30s,1×PBS冲洗干净,放入培养皿中,在超净台中用手术刀片将皮肤组织样顺着毛发生长的方向切割成1mm×1mm,放入培养皿中,加入0.25%胰蛋白酶使之没皮肤组织样,37℃饱和湿度消化90min。4.根据权利要求3所述的组织块法培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞的方法,其特征是,步骤3)中,所...
【专利技术属性】
技术研发人员:李拥军,王强,尹修远,瞿静雯,
申请(专利权)人:扬州大学,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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