针对PRAME的高亲和力T细胞受体制造技术

本发明专利技术提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合VLDGLDVLL‑HLA A2复合物的特性；并且所述TCR对所述VLDGLDVLL‑HLA‑A0201复合物的结合亲和力是野生型TCR对VLDGLDVLL‑HLA‑A0201复合物的结合亲和力的至少2倍。本发明专利技术还提供了此类TCR与治疗剂的融合分子。此类TCR可以单独使用，也可与治疗剂联用，以靶向呈递VLDGLDVLL‑HLA‑A0201复合物肿瘤细胞。

High affinity T cell receptor for PRAME

The invention provides a T cell receptor (TCR), which has the characteristics of binding VLDGLDVLL HLA A2 complex, and the binding affinity of the TCR to the VLDGLDVLL HLA A0201 complex is at least twice that of the wild TCR to the VLDGLDVLL HLA A0201 complex. The invention also provides a fusion molecule of such TCR with a therapeutic agent. These TCRs can be used alone or in combination with therapeutic agents to target the delivery of VLDGLDVLL HLA A0201 complex tumor cells.

【技术实现步骤摘要】
针对PRAME的高亲和力T细胞受体
本专利技术涉及生物
，更具体地涉及能够识别衍生自PRAME蛋白多肽的T细胞受体(Tcellreceptor,TCR)。本专利技术还涉及所述受体的制备和用途。
技术介绍
仅仅有两种类型的分子能够以特异性的方式识别抗原。其中一种是免疫球蛋白或抗体；另一种是T细胞受体(TCR)，它是由α链/β链或者γ链/δ链以异二聚体形式存在的细胞膜表面的糖蛋白。免疫系统的TCR总谱的组成是在胸腺中通过V(D)J重组，然后进行阳性和阴性选择而产生的。在外周环境中，TCR介导了T细胞对主组织相容性复合体-肽复合物(pMHC)的特异性识别，因此其对免疫系统的细胞免疫功能是至关重要的。TCR是呈递在主组织相容性复合体(MHC)上的特异性抗原肽的唯一受体，这种外源肽或内源肽可能会是细胞出现异常的唯一迹象。在免疫系统中，通过抗原特异性的TCR与pMHC复合物的结合引发T细胞与抗原呈递细胞(APC)直接的物理接触，然后T细胞及APC两者的其他细胞膜表面分子就发生相互作用，这就引起了一系列后续的细胞信号传递和其他生理反应，从而使得不同抗原特异性的T细胞对其靶细胞发挥免疫效应。与TCR相对应的MHCI类和II类分子配体也是免疫球蛋白超家族的蛋白质但对于抗原的呈递具有特异性，不同的个体有不同的MHC，从而能呈递一种蛋白抗原中不同的短肽到各自的APC细胞表面。人类的MHC通常称为HLA基因或HLA复合体。PRAME为黑色素瘤特异性抗原(preferentiallyexpressedantigenofmelanoma，PRAME)，在88％初发和95％转移黑色素瘤中都有表达(IkedaH,etal.Immunity,1997,6(2):199-208),正常皮肤组织和良性黑素细胞则不表达。PRAME在细胞内生成后被降解成小分子多肽，并与MHC(主组织相容性复合体)分子结合形成复合物，被呈递到细胞表面。VLDGLDVLL(SEQIDNO:103)是衍生自PRAME抗原的短肽，是PRAME相关疾病治疗的一种靶标。除了黑色素瘤，PRAME还在多种肿瘤表达，包括肺鳞状细胞癌、乳腺癌、肾细胞癌、头颈部肿瘤、霍杰金氏淋巴瘤、肉瘤及成神经管细胞瘤等(van'tVeerLJ,etal.Nature,2002,415(6871):530-536；BoonK,etal.Oncogene,2003,22(48):7687-7694)另外，其在白血病中PRAME亦有显著表达，急性淋巴细胞白血病17％～42％，急性粒细胞白血病30％～64％(SteinbachD,etal.CancerGenetCytogene,2002,138(1):89-91)。因此，VLDGLDVLL-HLAA2复合物提供了一种TCR可靶向肿瘤细胞的标记。能够结合VLDGLDVLL-HLAA2复合物的TCR对肿瘤的治疗具有很高的应用价值。例如，能够靶向该肿瘤细胞标记的TCR可用于将细胞毒性剂或免疫刺激剂递送到靶细胞，或被转化入T细胞，使表达该TCR的T细胞能够破坏肿瘤细胞，以便在被称为过继免疫治疗的治疗过程中给予患者。对于前一目的，理想的TCR是具有较高的亲和力的，从而使该TCR能够长期驻留在所靶向的细胞上面。对于后一目的，则优选使用中等亲和力的TCR。因此，本领域技术人员致力于开发可用于满足不同目的的靶向肿瘤细胞标记的TCR。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对VLDGLDVLL-HLA-A0201复合物具有较高亲和力的TCR。本专利技术的再一目的是提供一种上述类型TCR的制备方法及上述类型TCR的用途。本专利技术的第一方面，提供了一种T细胞受体(TCR)，其具有结合VLDGLDVLL-HLA-A0201复合物的活性。在另一优选例中，所述T细胞受体(TCR)具有结合VLDGLDVLL-HLA-A0201复合物的活性，并且所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：DRGSQSCDR2α：IYSNGDCDR3α：AVARTYTGNQFY，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1α的第4位ST或ACDR1α的第6位SACDR2α的第1位IQ或L或TCDR2α的第2位YVCDR2α的第3位SM或V或QCDR2α的第4位NP或DCDR3α的第3位AVCDR3α的第4位RLCDR3α的第5位TSCDR3α的第6位YWCDR3α的第7位TK或A或R或L或Q或FCDR3α的第8位GSCDR3α的第9位NTCDR3α的第10位QG或R和/或，所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：SEHNRCDR2β：FQNEAQCDR3β：ASSSQKFSGIQPQH，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR2β的第3位ND或GCDR2β的第4位ES或RCDR2β的第5位AI或SCDR2β的第6位QECDR3β的第3位SNCDR3β的第4位SA或P或N或K或Q或T或M或RCDR3β的第5位QS或G或TCDR3β的第6位KP或G或L；CDR3β的第7位FV或L在另一优选例中，所述TCRα链CDR区的突变个数可以为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个。在另一优选例中，所述TCRβ链CDR区的突变个数可以为1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个或8个。在另一优选例中，根据本专利技术的T细胞受体(TCR)，包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包括CDR1α、CDR2α、和CDR3α。在另一优选例中，所述CDR3α包含序列：AVAR[3αX1][3αX2][3αX3]S[3αX4][3αX5]FY，其中，[3αX1]、[3αX2]、[3αX3]、[3αX4]、[3αX5]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[3αX1]为T或S。在另一优选例中，所述[3αX2]为Y或W。在另一优选例中，所述[3αX3]为K或A或R或L或Q或F。在另一优选例中，所述[3αX4]为T或N。在另一优选例中，所述[3αX5]为G或R或Q。在另一优选例中，所述[3αX1]为T或S、[3αX2]为W、[3αX3]为K、[3αX4]为T并且[3αX5]为G或Q。在另一优选例中，所述CDR3α包含选自下组的序列：AVARTYTGNQFY、AVARSWKSNQFY、AVARSWASNQFY、AVARTYRSTGFY和AVARTYKSTGFY。在另一优选例中，所述CDR1α包含序列：DRG[1αX1][1αX2][1αX3],其中，[1αX1]、[1αX2]、[1αX3]独立地选自任意的天然氨基酸残基。在另一优选例中，所述[1αX1]为S或T或A。在另一优选例中，所述[1αX2]为S或Q。在另一优选例中，所述[1αX3]为S或A。在另一优选例中，所述[1αX1]为T或A、[1αX2]为Q并且[1αX3]为A。在另一优选例中，所述CDR1α包含选自下组的序列：DRGSQS、DRGTQA、DRGAQA和DRGSQA。在另一优选例中，所述CDR2α包含序列：[本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合VLDGLDVLL‑HLA‑A0201复合物的活性，并且所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：DRGSQSCDR2α：IYSNGDCDR3α：AVARTYTGNQFY，并且含有至少一个下列突变：

【技术特征摘要】
1.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合VLDGLDVLL-HLA-A0201复合物的活性，并且所述T细胞受体包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCRα链可变域包含3个CDR区，所述TCRα链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1α：DRGSQSCDR2α：IYSNGDCDR3α：AVARTYTGNQFY，并且含有至少一个下列突变：突变前的残基突变后的残基CDR1α的第4位ST或ACDR1α的第6位SACDR2α的第1位IQ或L或TCDR2α的第2位YVCDR2α的第3位SM或V或QCDR2α的第4位NP或DCDR3α的第3位AVCDR3α的第4位RLCDR3α的第5位TSCDR3α的第6位YWCDR3α的第7位TK或A或R或L或Q或FCDR3α的第8位GSCDR3α的第9位NTCDR3α的第10位QG或R和/或，所述TCRβ链可变域包含3个CDR区，所述TCRβ链可变域的3个CDR区的基准序列如下，CDR1β：SEHNRCDR2β：FQNEAQCDR3β：ASSSQKFSGIQPQH，并且含有至少一个下列突变：优选地，所述TCR具有选自下组的CDR：2.一种T细胞受体(TCR)，其特征在于，其具有结合VLDGLDVLL-HLA-A0201复合物的活性，并包含TCRα链可变域和TCRβ链可变域，所述TCR在SEQIDNO：1所示的α链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括30S，32S，50I，51Y，52S，53N，92A，93R，94T，95Y，96T，97G，98N，99Q中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:1所示的编号；和/或所述TCR在SEQIDNO：2所示的β链可变域中发生突变，所述突变的氨基酸残基位点包括51N，52E，53A，54Q，95S，96S，97Q，98K，99F中的一个或多个，其中，氨基酸残基编号采用SEQIDNO:2所示的编号；优选地，突变后的所述TCRα链可变域包括选自下组的一个或多个氨基酸残基：30T或30A；32A；50Q、50L或50T；51V；52M、52V、...

【专利技术属性】
技术研发人员：李懿，黄金花，战凯，
申请(专利权)人：广东香雪精准医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44