温敏型佐剂及其制作方法技术

本发明专利技术提供一种温敏型佐剂，其用于制备动物疾病疫苗、且能够随外界温度变化而发生相转变；所述温敏型佐剂包括：20wt％至60wt％的壳聚糖或壳聚糖衍生物；10wt％至40wt％的交联剂；1.0wt％至5.0wt％的胶质萃取物；1.0wt％至5wt％的增塑剂；以及其余为稀释剂。所述温敏型佐剂可以提高病毒抗原在生物体内的免疫原性，增加对免疫系统刺激的时间，进而可以增加动物的记忆性免疫效果，并且所述温敏型佐剂的制作方式简单、成本低廉，能够广泛地使用于动物疾病用的疫苗。

Temperature-sensitive adjuvants and their preparation methods

The invention provides a temperature-sensitive adjuvant, which is used for preparing animal disease vaccine and can change phase with the change of external temperature. The temperature-sensitive adjuvant includes: 20 wt% to 60 wt% chitosan or chitosan derivatives; 10 wt% to 40 wt% crosslinking agent; 1.0 wt% to 5.0 wt% colloid extract; 1.0 wt% to 5 wt% plasticizer; and the rest are diluents. The temperature-sensitive adjuvant can improve the immunogenicity of the virus antigen in vivo, increase the time of stimulating the immune system, and then increase the memory immune effect of animals. The preparation method of the temperature-sensitive adjuvant is simple, the cost is low, and it can be widely used in vaccines for animal diseases.

【技术实现步骤摘要】
温敏型佐剂及其制作方法
本专利技术涉及一种疫苗用佐剂，特别是关于一种会随着温度改变而发生相变化的温敏型佐剂。
技术介绍
疫苗接种被公认是用来预防病毒感染动物的最有效且最具效率的做法，很多传染病控制计划的基础是用活的微生物或经灭活的微生物或其产物制成疫苗并对动物接种来诱导专一性免疫。有效的疫苗接种程序可以在动物中形成针对专一抗原的免疫记忆能力，从而在日后与抗原接触时在动物中引起快速且强烈的免疫反应。然而，至今仍有许多病毒性或细菌性疾病尚无可利用的疫苗，或还未有能达到足够免疫作用的疫苗。此外，许多疫苗因为其抗原效能太低、使用劣质佐剂、会产生严重副作用、稳定性低或是价格昂贵而不适用。因此，亟需研发出更有效的疫苗或相关佐剂产品。将抗原与称为佐剂的物质混合后，一起注射于动物体内可增强免疫系统对抗原的免疫抗性，所述称为佐剂的物质通过直接作用于免疫系统或通过修改抗原的药物动力学特征来增强动物体对野外病毒的抵御反应，且藉此增加抗原与免疫系统的相互作用时间。举例来说，灭活抗原单独免疫动物时不足于产生免疫原性，特别是免疫原性低、分子量小的抗原，因此需要用不同种类的佐剂来增强抗原所诱导的免疫应答。然而，国内外兽用疫苗生产商推广应用的油质疫苗含有大量的矿物质油，在为养禽业保驾护航的同时也带来了不少的食品安全问题，例如，肉鸡屠体的疫苗残留问题已经引起越来越多人的担忧。油包水(W/O)型油质疫苗是由抗原液、界面活性剂及矿物质油混合后，在高剪切力作用下制备而成。其免疫机理是在接种部位贮存一段时间后，局部产生肉芽肿和炎症反应，吸引巨噬细胞、淋巴细胞等聚集以识别抗原，产生抗体。同时，缓慢扩散的油质佐剂使抗原输送到二级淋巴器官的时间延长，不断刺激机体的免疫系统，从而产生续期长、抗体水准高的免疫效力。虽然国内外疫苗生产厂家的生产工艺不断改进，用油品质也不断提高，但由于这种制剂的连续油相在注射部位有驻留的倾向，在不少的情形中，这种W/O型油质疫苗在接种部位附近产生大量肉芽肿，保护性抗体产生速度慢、易对动物屠体品质造成不良影响，并且在接种期间可能引起剧烈的疼痛。另外，水包油(O/W)型佐剂疫苗具有注射部位显现局部反应小且稳定性高的优势，然而包含或者暴露在连续相中的抗原很快在注射部位分散和被体液酶分解，难以提供长期的保护性抗体，常常需要特殊的免疫刺激剂和多次加强免疫，制备成本高，不被广泛使用。因此，近年来市面上已出现一种缓释疫苗，其是利用能够随着温度改变而发生相变化的温敏型原位凝胶作为疫苗的佐剂。原位凝胶在动物体外往往呈现为可供注射的流动性溶液态，抗原或佐剂均匀分布在其中；当将疫苗注入动物体内后，溶液态会受到动物体温影响而在注射部位发生相转变成为流动性差的凝胶态或固体状态，此时抗原分布在半固体凝胶中形成缓慢释放的药物储库，此时抗原分布在半固体凝胶中形成缓慢释放的药物储库，此类温敏型佐剂具备了油包水(W/O)型油质疫苗及水包油(O/W)型佐剂疫苗的优点，除了能够减少给药次数、提高患者依从性、增强并延长体液免疫应答、提高细胞免疫应答强度、以及有利于免疫记忆性反应的产生以外，更不会引起严重的炎症反应。然而，目前市面上的温敏型佐剂大多是以聚乙烯醇作为主要成分，其制作过程繁复且生产成本高昂，因此仅应用于适用对象为人类的疫苗，而无法广泛使用于动物疾病用的疫苗；另外亦有由壳聚糖为主成分所制得的温敏型佐剂，但所述类佐剂多以壳聚糖/甘油磷酸钠盐配方为主，其所形成的凝胶机械性能较差，凝胶成形状态不稳定，导致对于病毒抗原液的包覆率不佳，同时也造成后续在生物体内的药品释放速度不稳定。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术目的在于提供一种温敏型佐剂，该温敏型佐剂以壳聚糖为主要成分并改良常规的壳聚糖/甘油磷酸钠盐配方，具有良好的生物相容性及体内可降解性，并且所述温敏型佐剂的制作方式简单，且成本低廉，能够广泛使用于动物疾病用的疫苗。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种温敏型佐剂，其包括：20wt％至60wt％的壳聚糖或壳聚糖衍生物；10wt％至40wt％的交联剂；1.0wt％至5.0wt％的胶质萃取物；1.0wt％至5wt％的增塑剂；以及其余为稀释剂；所述温敏型佐剂可以提高病毒抗原在生物体内的免疫原性，对免疫系统刺激的时间增加，进而可以增加动物的记忆性免疫效果。根据本专利技术的一观点，在本专利技术的温敏型佐剂中，为了提高防止病毒的感染或增加疫苗稳定性及效能而达到防疫的效果，可以使产品达到良好的功效，在实际施用时，所述温敏型佐剂(Adj)与病毒抗原液(Vat)的掺混比(Adg：Vat)为1：4(v/v)～1：1(v/v)。例如，在本专利技术的所述温敏型佐剂(Adj)与病毒抗原液(Vat)的掺混比的比例可以是1：4(v/v)～1：1(v/v)；在某些具体实施例中，较佳为1：4(v/v)～2：3(v/v)；更佳为1：4(v/v)～3：7(v/v)；最佳为1：4(v/v)。根据本专利技术的观点，所述壳聚糖或壳聚糖衍生物相对于所述交联剂的重量比可以是1：10～10：1，较佳为1：10～6：1，更加为1：10～2：1；最佳为1：10～1：3。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏型佐剂的所述缓冲剂并未特别加以限定，举例来说，所述壳聚糖的脱乙酰程度一般为50％至100％；较佳为60％至100％；更佳为70％至100％；最佳为80％至100％。另外，所述壳聚糖的分子量一般为5万～200万；较佳为10万～200万；更佳为50万～200万；最佳为100万～200万。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏型佐剂的所述壳聚糖衍生物并未特别加以限定；举例来说，所述壳聚糖衍生物选自羧甲基壳聚糖、壳聚糖盐酸盐、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖醋酸盐、壳聚糖硫酸脂、壳聚糖季胺盐、壳聚寡糖或甲壳素。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏型佐剂的所述交联剂并未特别加以限定；举例来说，所述交联剂选自纤维素、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和聚丙烯酰胺中的至少一种；较佳是选自聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和聚丙烯酰胺中的至少一种；最佳为聚丙烯酸。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏型佐剂的所述增塑剂并未特别加以限定；举例来说，所述增塑剂可以是甘油、丙二醇、乙二醇、二乙二醇单乙基醚、甘油酯和聚乙二醇脂肪酸酯中的至少一种；较佳为甘油、丙二醇、乙二醇和甘油酯中的至少一种；更佳为甘油、乙二醇和甘油酯中的至少一种；最佳为甘油。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏形佐剂的胶质萃取物包含有β-葡聚糖。依据本专利技术的一观点，上述β-葡聚糖的黏度一般为4.0至7.0mm2/s；較佳为为4.5至7.0mm2/s的范围；更佳为在4.5至6.0mm2/s的范围；最佳为在5.0至6.0mm2/s的范围。依据本专利技术的一观点，上述β-葡聚糖的平均分子量一般为在16000至20000的范围；較佳为17000至20000；更佳为17500至20000；最佳为18000至20000。依据本专利技术的一观点，上述β-葡聚糖的pH值一般为5至8；較佳为5.5至8；更佳为5.5至7；最佳为5.5至6。依据本专利技术的一观点，可使用于本专利技术的温敏型佐剂的所述胶质萃取物可以进一步包含有芦荟萃取物、五加皮萃取物、马齿苋萃取物、葡萄柚萃取物、柿子叶萃取物、桑黄蘑萃取物、冬虫夏草萃取物及其衍生本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种温敏型佐剂，其特征在于，用于制备动物疾病疫苗、且能够随外界温度变化而发生相转变，所述温敏型佐剂包括：20wt％至60wt％的壳聚糖或壳聚糖衍生物；10wt％至40wt％的交联剂；1.0wt％至5.0wt％的胶质萃取物；1.0wt％至5wt％的增塑剂；以及其余为稀释剂；其中所述壳聚糖的脱乙酰程度为50％至100％，分子量为5万～200万；所述胶质萃取物包括β‑葡聚糖，且所述β‑葡聚糖的黏度为4.0至7.0mm

【技术特征摘要】
1.一种温敏型佐剂，其特征在于，用于制备动物疾病疫苗、且能够随外界温度变化而发生相转变，所述温敏型佐剂包括：20wt％至60wt％的壳聚糖或壳聚糖衍生物；10wt％至40wt％的交联剂；1.0wt％至5.0wt％的胶质萃取物；1.0wt％至5wt％的增塑剂；以及其余为稀释剂；其中所述壳聚糖的脱乙酰程度为50％至100％，分子量为5万～200万；所述胶质萃取物包括β-葡聚糖，且所述β-葡聚糖的黏度为4.0至7.0mm2/s、平均分子量为16000至20000和pH值为5至8；以及在实际施用时，所述温敏型佐剂(Adj)与病毒抗原液(Vat)的掺混比(Adg：Vat)为1：4(v/v)～1：1(v/v)。2.根据权利要求1所述的温敏型佐剂，其特征在于，所述壳聚糖衍生物为羧甲基壳聚糖、壳聚糖盐酸盐、壳聚糖乳酸盐、壳聚糖醋酸盐、壳聚糖硫酸脂、壳聚糖季胺盐、壳聚寡糖或甲壳素。3.根据权利要求1所述的温敏型佐剂，其特征在于，所述交联剂选自纤维素、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和聚丙烯酰胺中的至少一种。4.根据权利要求1所述的温敏型佐剂，其特征在于，所述增塑剂选自甘油、丙二醇、乙二醇、二乙二醇单乙基醚、甘油酯和聚乙二醇脂肪酸酯中的至少一种。5.根据权利要求1所述的温敏型佐剂，其特征在于，所述胶质萃取物进一步包含芦荟萃取物、五加皮萃取物、马齿苋萃取物、葡萄柚萃取物、柿子叶萃取物、桑黄蘑萃取物和冬虫夏草萃取物中的至少一种。6.根据权利要求1所述的温敏型佐剂，其特征在于，所述稀释剂选自磷酸盐缓冲剂(PBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：林建宏，
申请(专利权)人：国年实业有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71