一种山茶科花类组培繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种山茶科花类组培繁殖方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2‑3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类，生根率达到95%以上。本发明专利技术通过对山茶科花类的茎尖进行诱导、增殖、生根，快速获得山茶科花类组培苗，生根快，缩短了山茶科花类组培时间，成本低，同时提高了山茶科花类成活、分化和生根率，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

A Method of Tissue Culture and Propagation of Camellia Flowers

The invention discloses a method for tissue culture and propagation of Camellia flowers, including explant treatment, induction culture, multiplication culture and rooting culture, selecting camellia flower seeds as explants, washing, sterilizing and disinfecting the explants, inoculating them in induction medium to obtain camellia flower callus, and then inoculating them into induction medium to obtain camellia flower callus. The callus of Camelliaceae flowers was transferred to the proliferation medium for multiplication culture. At last, the 2 3 cm long cluster buds were transferred to the rooting medium for rooting. The rooting rate of Camelliaceae flowers was more than 95%. By inducing, proliferating and rooting the stem tips of Camelliaceae flowers, the tissue culture seedlings of Camelliaceae flowers can be obtained quickly, the rooting time is shortened, the cost is low, and the survival, differentiation and rooting rate of Camelliaceae flowers are improved, with better economic, social and ecological benefits.

【技术实现步骤摘要】
一种山茶科花类组培繁殖方法
本专利技术涉及植物栽培
，涉及一种山茶科花类组培繁殖方法。
技术介绍
杜鹃红山茶、越南抱茎茶(高继银等，2005)和崇左金花茶(梁盛业等，2010)均为山茶科迄今为止发现的花期最长(几乎可达全年)的3种山茶原种，又称四季茶花。不仅是育种专家用来培育四季开花的茶花新品种的最佳亲本(高继银等，2010)，而且有非常高的观赏价值，(罗燕英，2009)认为在家庭盆栽、园林绿化具有广阔的应用前景。为了形成山茶科花类规模化生产，探索出一种适合山茶科花类组织快繁的方法是很有必要的。
技术实现思路
本专利技术是为了克服现有技术的不足，提供一种生长周期短，生长效果好，扩繁快的山茶科花类组培繁殖方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下：一种山茶科花类组培繁殖方法，包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类；主要包括如下步骤：（1）外植体处理：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡15-20min，用清水洗净后用体积浓度0.15%高锰酸钾溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的山茶科花类子株的茎段接种到诱导培养基中培养，光照培养，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间25-28d，培养得到山茶科花类愈伤组织；（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的山茶科花类愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度25-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；（4）生根培养：将步骤（3）中分化出的芽长至2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间20-30d，得到生根山茶科花类。以上步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+IAA6.0-8.0mg/L+KT2.0-3.0mg/L+VC15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB215mg/+琼脂粉3.6g/L+蔗糖20g/L。以上步骤（3）所述的增殖培养基的配方为：改良LS培养基+IAA3.0-5.0mg/L+NAA1.5-2.0mg/L+ZT0.1-0.5mg/L+脯氨酸10mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉3.6g/L+蔗糖30g/L。以上步骤（4）所述的生根培养基的配方为：改良LS培养基+IAA1.5-2.0mg/L+NAA0.5-1.0mg/L+VC10mg/L+VB220mg+脯氨酸10mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉3.6g/L+蔗糖30g/L。以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3650mg/L+KNO3920mg/L+CaCl2·2H2O420mg/L+MgSO4.·7H2O180mg/L+KH2PO4280mg/L+H3BO310.2mg/L+MnSO4.·4H2O22.3mg/L+ZnSO4·4H2O8.6mg/L+KI0.56mg/L+Na2MoO4·H2O0.25mg/L+CuSO4.·5H2O0.025mg/L+CoCl2·6H2O0.025mg/L+FeSO427.8mg/L+NaEDTA37.0mg/L+肌醇75mg/L+烟酸0.5mg/L+盐酸吡哆醇0.5mg/L+甘氨酸2mg/L+盐酸吡哆醇0.5mg/L。本专利技术具有的优点及有益效果如下：1、本专利技术以山茶科花类子株作为外植体作为外植体，经过诱导培养基培养，山茶科花类愈伤组织诱导率达到98%以上；经过5-6个周期增殖培养，形成丛生芽，芽增殖系数4/30d-6/30d，再将丛生芽接入生根培养基中培养30-35d，生根率达到95%以上。2、本专利技术对LS基本培养基进行了改良，添加酚类物质的专一性吸附剂聚乙烯吡咯烷酮（PVP），迅速有效的抑制山茶科花类组培芽的褐死，同时加入促进芽生长并且粗壮的氨基酸和维生素，使得培养基的营养更加全面，更有效的促使山茶科花类芽诱导的发生、增殖和生根，实现大量增殖。3、本专利技术通过对山茶科花类的茎尖进行诱导、增殖、生根，快速获得山茶科花类组培苗，生根快，缩短了山茶科花类组培时间，成本低，同时提高了山茶科花类成活、分化和生根率。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡15min，用清水洗净后用体积浓度0.15%高锰酸钾溶液对外植体浸泡20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用。将处理后的山茶科花类子株的茎段接种到诱导培养基中培养，光照培养，光照时间12h/d，光照强度1500lx，培养温度25-26℃，培养时间26d，培养得到山茶科花类愈伤组织；其中，所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+IAA6.0mg/L+KT2.0mg/L+VC15mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+VB215mg/+琼脂粉3.6g/L+蔗糖20g/L。将得到的山茶科花类愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10h/d，光照强度3000lx，培养温度25-26℃，培养时间20-25d，分化出芽；其中，所述的增殖培养基的配方为：改良LS培养基+IAA3.0mg/L+NAA1.5mg/L+ZT0.1mg/L+脯氨酸10mg/L+聚乙烯吡咯烷酮50mg/L+琼脂粉3.6g/L+蔗糖30g/L。将增殖分化出的芽长至2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间12h/d，光照强度1500lx，培养温度25-27℃，培养时间20-30d，得到生根山茶科花类，生根率达到96%；其中，改良LS培养基+IAA1.5mg/L+NAA0.5mg/L+VC10mg/L+VB220mg+脯氨酸10mg/L+聚乙烯吡咯烷酮30mg/L+琼脂粉3.6g/L+蔗糖30g/L。以上所述的改良LS培养基的配方为：NH4NO3650mg/L+KNO3920mg/L+CaCl2·2H2O420mg/L+MgSO4.·7H2O180mg/L+KH2PO4280mg/L+H3BO310.2mg/L+MnSO4.·4H2O22.3mg/L+ZnSO4·4H2O8.6mg/L+KI0.56mg/L+Na2MoO4·H2O0.25mg/L+CuSO4.·5H2O0.025mg/L+CoCl2·6H2O0.025mg/L+FeSO427.8mg/L+NaEDTA37.0mg/L+肌醇75mg/L+烟酸0.5mg/L+盐酸吡哆醇0.5mg/L+甘氨酸2mg/L+盐酸吡哆醇0.5mg/L。实施例2：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡18min，用清水洗净后用体积浓度0.15%高锰酸钾溶液对外植体浸泡16min进行灭本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山茶科花类组培繁殖方法，其特征在于：包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2‑3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类；主要包括如下步骤：（1）外植体处理：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2‑3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡15‑20min，用清水洗净后用体积浓度0.15 % 高锰酸钾溶液对外植体浸泡15‑20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的山茶科花类子株的茎段接种到诱导培养基中培养，光照培养，光照时间12h/d，光照强度1500‑2000lx，培养温度25‑28℃，培养时间25‑28d，培养得到山茶科花类愈伤组织；（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的山茶科花类愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10‑12h/d，光照强度3000‑3500lx，培养温度25‑28℃，培养时间20‑25d，分化出芽；（4）生根培养：将步骤（3） 中分化出的芽长至2‑3cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500‑2000lx，培养温度25‑28℃，培养时间20‑30d，得到生根山茶科花类。...

【技术特征摘要】
1.一种山茶科花类组培繁殖方法，其特征在于：包括外植体处理、诱导培养、增殖培养和生根培养，选取山茶科花类子株作为外植体，对外植体进行洗净灭菌消毒处理后，接种于诱导培养基中培养获得山茶科花类愈伤组织，再将山茶科花类愈伤组织转接至增殖培养基中进行增殖培养，最后将分化出的长2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中培养获得生根山茶科花类；主要包括如下步骤：（1）外植体处理：选取山茶科花类子株作为外植体，用纯净水冲洗外植体2-3次，然后在600mg/L赤霉素溶液中浸泡15-20min，用清水洗净后用体积浓度0.15%高锰酸钾溶液对外植体浸泡15-20min进行灭菌消毒，最后用无菌水冲洗干净外植体后，置于无菌滤纸上吸干水，备用；（2）诱导培养：将步骤（1）处理后的山茶科花类子株的茎段接种到诱导培养基中培养，光照培养，光照时间12h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间25-28d，培养得到山茶科花类愈伤组织；（3）增殖培养：将步骤（2）中诱导得到的山茶科花类愈伤组织转接到增殖培养基中，光照时间10-12h/d，光照强度3000-3500lx，培养温度25-28℃，培养时间20-25d，分化出芽；（4）生根培养：将步骤（3）中分化出的芽长至2-3cm的丛生芽转接到生根培养基中，光照时间10h/d，光照强度1500-2000lx，培养温度25-28℃，培养时间20-30d，得到生根山茶科花类。2.根据权利要求1所述的一种山茶科花类组培繁殖方法，其特征在于：步骤（2）所述的诱导培养基的配方为：改良LS培养基+IAA6.0-8.0mg/L+KT2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈向阳，李海飞，
申请(专利权)人：广西北流森艺瓷业有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45