温度敏感性生物凝胶制剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种温度敏感性生物凝胶制剂，以质量计，包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体20‑30份、泊洛沙姆407 20‑28份、泊洛沙姆188 5‑10份、用于调节胶凝温度和药物释放特性的高分子稳定剂0.9‑2.4份和水32‑54份。利用生物相容性可降解高分子聚合物为间充质干细胞外泌体的载药基质，加入高分子稳定剂调节胶凝温度和药物释放特性，从而使载入的MSCs外泌体持续释放，减少给药频率，防止药液的泄露，提高生物利用度，为治疗IUA提供安全、有效、临床应用方便的制剂。

Temperature sensitive bio gel preparation and its application

The invention relates to a temperature sensitive biological gel preparation, which comprises the following components: mass fraction of 20 exudates of mesenchymal stem cells, 28 parts of 40720 Losham, 28 1885 of Pol Losham 1885, 10 0.9 of 2.4 high molecular stabilizers for adjusting gelation temperature and drug release characteristics, and 32 32 54 of water. Biocompatible and biodegradable polymer was used as drug carrier for mesenchymal stem cell exosome. Polymer stabilizer was added to regulate gelation temperature and drug release characteristics, so as to sustain the release of MSCs exosome, reduce the frequency of administration, prevent drug leakage, improve the bioavailability, and provide a safe, effective and convenient preparation for the treatment of IUA.

【技术实现步骤摘要】
温度敏感性生物凝胶制剂及其应用
本专利技术涉及干细胞应用
，尤其涉及一种温度敏感性生物凝胶制剂及其应用。
技术介绍
间充质干细胞(MSCs)是一类来源于中胚层，具有自我更新、增殖和多向分化潜能的成体干细胞，能够分化为成骨细胞、成软骨细胞和成脂肪细胞。MSCs可以从骨髓、脂肪组织、肺、肝、脾、胎盘、羊水、脐血、脐带等多种组织中分离获得。由于MSCs具有易于分离、多向分化、独特的免疫表型和免疫调节的能力，被广泛应用于组织工程和免疫治疗方面。子宫内膜损伤后修复障碍是导致月经过少、宫腔粘连、闭经和继发不孕等临床常见疾病的重要原因，其中最常见的是人工流产后发生的宫腔粘连(IUA)。IUA为子宫内膜基底层损伤后修复障碍导致的宫腔部分或全部粘连闭塞，从而引起月经异常，周期性腹痛，不孕及反复流产等一系列并发症，目前多以宫腔粘连分解术治疗，术后于宫腔内放置宫内节育器、球囊导尿管或宫腔形状气囊等支架，能部分阻隔宫腔创面，预防再粘连。然而存在分离效果有限，易引起逆行感染等缺点。因此IUA严重威胁女性的生殖健康，已成为临床上亟待解决的难题。近年研究发现，IUA的发生可能与子宫内膜干细胞减少、缺失或功能障碍有关。体内移植实验证明，间充质干细胞能迁移到病变部位，促进其修复。路平等发现，MSCs可定植于子宫内膜损伤小鼠的子宫内膜组织(路平,etal.小鼠骨髓间充质干细胞在子宫内膜损伤小鼠子宫内膜中的定位.郑州大学学报(医学版)1(2015):101-104.)。Nagori等发现移植骨髓间充质干细胞可有效修复子宫内膜缺陷，包括不孕及子宫内膜厚度过薄(Nagori,C.B.etal.Endometrialregenerationusingautologousadultstemcellsfollowedbyconceptionbyinvitrofertilizationinapatientofsevereasherman'ssyndrome.JournalofHμmanReproductiveSciences,4(1),43-48.)。研究表明，MSCs可能主要通过旁分泌作用参与细胞间的交流。其中外泌体被认为是发挥主要作用的因子。外泌体是活细胞分泌的膜性囊泡，直径约30～100nm，内含蛋白质、mRNA、microRNA等，可在细胞间进行物质传递。MSCs来源的外泌体疗效类似于母细胞功能，对缺血性心脏病、肾损伤、肺损伤均有修复作用。如MSCs来源的外泌体在肾脏损伤动物模型中可促进肾脏修复；在大肠杆菌诱导的肺损伤小鼠模型中，MSCs来源的外泌体通过调控角质细胞生长因子mRNA水平，促进肺上皮修复。在肝纤维化的疾病模型中，MSCs来源的外泌体主要抑制EMT减轻肝纤维化程度。外泌体可获得与MSCs移植类似的疗效，避免了干细胞治疗带来的风险，为临床患者提供了治疗新策略。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供一种温度敏感性生物凝胶制剂及其应用，利于具有生物相容性的可降解高分子聚合物为凝胶基质，同时作为间充质干细胞外泌体的载药基质，加入高分子稳定剂调节胶凝温度和药物释放特性，使载入的MSCs外泌体持续释放，减少给药频率，防止药液的泄露，提高生物利用度，为治疗IUA提供安全、有效、临床应用方便的制剂。一方面，本专利技术提供了一种温度敏感性生物凝胶制剂，以质量计，包括以下比例的各组分：间充质干细胞(MSCs)外泌体20-30份、泊洛沙姆407(P407)20-28份、泊洛沙姆188(P188)5-10份、用于调节胶凝温度和药物释放特性的高分子稳定剂0.9-2.4份和水32-54份。进一步地，间充质干细胞外泌体来源于脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、外周血间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞中的一种。MSCs来源的外泌体具有减轻细胞损伤、诱导组织细胞增殖、促进组织修复的特性。优选地，间充质干细胞外泌体来源于人脐带间充质干细胞。采用无饲养层培养法，在无血清培养体系培养人脐带MSCs，收集培养基，收集纯化培养基中的外泌体，即为MSCs外泌体。进一步地，间充质干细胞外泌体是采用旋转超滤结合低温超速离方法收纯化集获得。进一步地，制剂中还包括其他具有生物相容性的可降解高分子聚合物，包括聚磷酸酯、聚丙烯、聚乳酸(PLA)、聚己内酯(PLC)和聚乙二醇(PEG)中的一种或者几种。本专利技术的具有生物相容性的可降解高分子聚合物作为间充质干细胞外泌体的载药基质。进一步地，高分子稳定剂包括海藻酸钠(SA)、透明质酸钠、壳聚糖和羟丙基甲基纤维素(HPMC)中一种或者几种。高分子稳定剂用于调节制剂的胶凝温度和药物释放特性，使载入的MSCs外泌体持续释放，减少给药频率，防止药液的泄露，提高生物利用度。进一步地，温度敏感性生物凝胶制剂，以质量计，包括以下比例的各组分：间充质干细胞(MSCs)外泌体20-30份、、泊洛沙姆407(P407)20-28份、泊洛沙姆188(P188)5-10份、用于调节胶凝温度和药物释放特性的高分子稳定剂0.9-2.4份、水32-54份和保湿剂0.5-1份。进一步地，保湿剂包括丙二醇、甘油山梨醇、透明质酸和生育酚中的一种或者几种。进一步地，温度敏感性生物凝胶制剂还包括磷酸盐缓冲液。进一步地，以质量计，上述温度敏感性生物凝胶制剂包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体20-30份、泊洛沙姆40720-28份、泊洛沙姆1885-10份、海藻酸钠或羟丙基甲基纤维素0.3-1份、聚乙二醇0.1-0.4份、壳聚糖0.5-1份和纯水32-54份。采用泊洛沙姆407和泊洛沙姆188作为载药基质，通过针对MSCs外泌体设置特定比例的泊洛沙姆407和泊洛沙姆188的配伍，使本专利技术的MSCs外泌体温度敏感型原位凝胶制剂常温下为液态便于储存和临床使用。当本专利技术中MSCs外泌体温度敏感型原位凝胶剂中添加了聚乙二醇和羟丙基甲基纤维素时，二者可以调节凝胶溶蚀特性和药物释放特性，其中聚乙二醇除了本身有一定的生物粘附性外，二者还可与泊洛沙姆作用后生成聚乙二醇-羟丙基甲基纤维素-泊洛沙姆，可聚集形成强有力的三维空间网络结构，提高凝胶在体内的粘度和生物粘附性，有效延长药物在体内的滞留时间。进一步地，温度敏感性生物凝胶制剂的相变温度为30-35℃。本专利技术的温度敏感性生物凝胶制剂的相变温度接近人体温度，应用后在用药部位发生胶凝转相(由溶胶状态转变为凝胶状)，能够充分阻隔创面，预防感染。进一步地，上述温度敏感性生物凝胶制剂利用高分子材料聚合物在生理条件下发生分散状态或构象的可逆变化，完成由溶胶状态向半固体凝胶状态的相转变。即能以溶液状态给药，在用药部位立即发生相转变，由液态转化形成非化学交联半固体凝胶。另一方面，本专利技术还要求保护上述温度敏感性生物凝胶制剂在制备治疗宫腔粘连制剂中的应用。进一步地，温度敏感性生物凝胶制剂通过原位凝胶灌注给药。进一步地，上述温度敏感性生物凝胶制剂是通过宫口以无创注射方式填充于子宫腔，属于原位凝胶灌注给药系统，以达到药物持续释放，减小给药频率，防止药液的泄露的目的。借由上述方案，本专利技术至少具有以下优点：本专利技术将MSCs外泌体制备成温度敏感性生物凝胶剂。本专利技术的温度敏感性生物凝胶制剂具有良好的生物相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种温度敏感性生物凝胶制剂，其特征在于，以质量计，包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体20‑30份、泊洛沙姆407 20‑28份、泊洛沙姆188 5‑10份、用于调节胶凝温度和药物释放特性的高分子稳定剂0.9‑2.4份和水32‑54份。

【技术特征摘要】
1.一种温度敏感性生物凝胶制剂，其特征在于，以质量计，包括以下比例的各组分：间充质干细胞外泌体20-30份、泊洛沙姆40720-28份、泊洛沙姆1885-10份、用于调节胶凝温度和药物释放特性的高分子稳定剂0.9-2.4份和水32-54份。2.根据权利要求1所述的温度敏感性生物凝胶制剂，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体来源于脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、外周血间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞中的一种。3.根据权利要求1所述的温度敏感性生物凝胶制剂，其特征在于：还包括具有生物相容性的可降解高分子聚合物，所述具有生物相容性的可降解高分子聚合物包括聚磷酸酯、聚丙烯、聚乳酸、聚己内酯和聚乙二醇中的一种或者几种。4.根据权利要求1所述的温度敏感性生物凝胶制剂，其特征在于：所述高分子稳定剂包括海藻酸钠、透明质酸钠、壳聚糖和羟丙基甲基纤维素中一种或...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖联明，黄静，廉云飞，于峰祥，
申请(专利权)人：江苏拓弘生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32