一株解淀粉芽胞杆菌、其微生态制剂及其制备方法技术

一株解淀粉芽胞杆菌、其微生态制剂及其制备方法，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO:M 2018266，分类命名为：解淀粉芽胞杆菌BaY002。由该菌株通过相应方法制成的适用水产养殖的微生态制剂进行饲料添加、水体泼洒或腹腔注射等给药途径，对草鱼的保护率分别达到70%～80%、60%～70%和85%～90%，本发明专利技术微生态制剂的稳定性好，被鱼体吸收后，对草鱼、鲫鱼等淡水鱼类的抗嗜水气单胞菌感染防治效果尤其显著。

A strain of Bacillus amylolytica, its microecological preparation and its preparation method

A strain of Bacillus amyloliquefaciens, its microecological preparation and its preparation method are deposited in the typical culture preservation center of China. The preservation number of the strain is CCTCC NO:M 2018266. It is classified as BaY002. The microecological preparation prepared by the strain by the corresponding method can be used for feedstuff addition, water spraying or intraperitoneal injection. The protection rate of grass carp can reach 70%-80%, 60%-70% and 85%-90% respectively. The microecological preparation of the invention has good stability. After being absorbed by the fish, it can prevent and control the infection of Aeromonas hydrophila in freshwater fish such as grass carp and crucian carp. Especially significant.

【技术实现步骤摘要】
一株解淀粉芽胞杆菌、其微生态制剂及其制备方法
本专利技术涉及微生态制剂领域，具体涉及一株解淀粉芽胞杆菌、其微生态制剂及其制备方法。
技术介绍
由于传统抗生素在长期的使用中导致了细菌的耐药性、对水产品农药残留和农业生态环境破坏等一系列问题，国家对水产养殖中抗生素使用的限制越来越大，对有效防治水产病害的新药物的研制面临着巨大的挑战。而水产微生态制剂以其安全有效、绿色无残留、不易产生耐药性等优点，逐渐开发成用于养殖水域中微生态的调控、净化水质、调整或维持水产动物肠道内微生态平衡以及提高鱼体免疫力、抗病力等产品，以利实施大规模水产生态健康养殖。随着人们的安全意识越来越强，对抗生素使用的警惕性越来越高，水产微生态制剂将成为今后水产养殖病害防治的主要选择之一。水产微生态制剂常用有益微生物的种类有芽胞杆菌、乳酸菌、光合细菌、酵母菌、硝化细菌、反硝化细菌和蛭弧菌。近年来，芽胞杆菌水产微生态制剂在水产中使用最成功、效益最好，以芽胞杆菌作为鱼类病原菌拮抗菌开发出防治疾病和增进健康养殖作用的水产微生态制剂具有广阔的发展前景。芽胞杆菌（Bacillus）属于革兰阳性菌，菌体呈直杆菌，成对或链状排列。芽胞杆菌分布广，存在于土壤、水域、空气以及动物肠道等处，在营养充足时呈对数生长，环境恶劣时停止生长转而产生芽胞。芽胞（内生芽胞）对高温、干燥、高盐以及化学物质有强大的抵抗性，因此芽胞杆菌十分利于生产、加工、运输及储藏。芽胞杆菌能分泌丰富的胞外酶系，可直接作用于硝酸盐和亚硝酸盐，对亚硝酸盐、氨氮的去除效果明显，从而起到净化水质的作用。仝慧芳等人在《江西水产科技》（2016年第3期第37～38页）发表的“枯草芽孢杆菌在水产养殖中的应用及研究现状”文章介绍了芽胞杆菌分泌的胞外酶系能有效的降解水体的有机物，如浮游生物的残物、水生生物的排泄物和残饵，使这些物质矿化成为藻类生长所需的营养盐类。Kozasa等人在《JournaloftheTokyoSocietyofVeterinary&ZootechnicalScience》（1978年第17卷第1期第55～70页）发表的“TaxonomicstudiesonBacilluscereusT-7112,3:Interrelationspi(7)-phagesusceptibilityandbiotype.”文章提及从土壤中分离的芽胞杆菌作用经爱德华氏菌感染的鳗鲡（Anguillaanguilla），能够降低其死亡率。张庆等在《上海海洋大学学报》（1999年第1期第43～47页）发表的“复合微生物对养殖水体生态因子的影响”文章提到向罗非鱼养殖水体中添加以芽胞杆菌为主的微生物复合菌剂，证明了其能改善水质养殖条件的能力，并促进罗非鱼的生长。解淀粉芽胞杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）作为重要的生防菌和植物益生菌已有研究与应用，在水产养殖领域的应用研究也有报道。CN103275907B公开了一种解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）H6，该解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为：CCTCCNO：M2013249，并说明了该菌株在畜禽养殖饲喂中有很好的防治腹泻和促进生长效果的应用，对能否用于水产养殖未提及。CN107937301A公开了一种解淀粉芽孢杆菌及其在水产养殖中的应用，该解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)NC58，保藏编号为CGMCCNO:14009，虽然提及了在水产养殖中的应用，但对菌株的生理生化性质未提及，其稳定性并无法进行推断。CN103773711B公开了一种解淀粉芽胞杆菌及微生物菌剂和它们的应用，该解淀粉芽胞杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）的保藏编号为CCTCCNO.M2013501。利用该解淀粉芽胞杆菌制备的微生物菌剂应用于盐碱地改良、增加植物耐旱性、防治小麦纹枯病和黄瓜枯萎病，对能否用于水产养殖未提及。CN103865839B公开了一种应用于水产养殖的由花域芽胞杆菌制成的制剂，该制剂用于海参、虾、鲍鱼或鱼养殖中的预防疾病、提高饲料转化率或净化养殖水质。对能否用于淡水鱼类疾病的防治效果未提及。现有微生态制剂在运输、使用和保存过程中易失活，稳定性差，从而降低其生物活性作用；有些菌株进入消化道后，不能有效抵抗盐酸、胆汁酸等的作用，从而无法长时间定植肠道发挥功能；微生态制剂预防效果好于治疗效果，但作用慢，需长时间连续使用，费用相应增加。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一株新的解淀粉芽胞杆菌，使用该解淀粉芽胞杆菌制备的微生态制剂，稳定性好，被鱼体吸收后，能够迅速抑制鱼类病原菌的生长，对草鱼、鲫鱼等淡水鱼类的抗嗜水气单胞菌感染防治效果尤其显著。本专利技术进一步要解决的技术问题是，提供一种适用于水产养殖进行鱼类疾病防治的微生态制剂及其制备方法。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是，一株解淀粉芽胞杆菌，从健康草鱼肠道中分离得到，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCCNO:M2018266，分类命名为：解淀粉芽胞杆菌BaY002；拉丁文学名：BacillusamyloliquefaciensBaY002。本专利技术进一步解决其技术问题采用的技术方案是，一种适用于水产养殖的微生态制剂，由菌种保藏号为CCTCCNO:M2018266的解淀粉芽胞杆菌发酵制成，其中所含抑菌活性物质，经超高效液相色谱分离纯化、质谱鉴定，其相对分子量为1045.29。本专利技术所述解淀粉芽胞杆菌BaY002发酵制成的微生态制剂中的抑菌活性物质能够抑制鱼类病原菌的生长，同时，该微生态制剂中的抑菌活性物质的理化性质对蛋白酶不敏感，稳定性好。进一步，所述解淀粉芽胞杆菌BaY002微生态制剂为液体制剂或固体制剂。进一步，所述水产养殖的动物为淡水鱼类。进一步，所述淡水鱼类为草鱼、鲫鱼或鲤鱼。本专利技术更进一步解决其技术问题采用的技术方案是，一种适用于水产养殖的微生态制剂的制备方法，包括以下步骤：（1）接种活化：将解淀粉芽胞杆菌BaY002保藏斜面菌种转接到活化斜面培养基上活化培养过夜，得到活化好的种子液；所述活化斜面培养基为LB摇瓶种子培养基，所述LB摇瓶种子培养基的配方：蛋白胨5～10g/L；酵母粉1～5g/L；氯化钠5～10g/L；活化培养的条件：发酵温度30～40℃，装液量为容器体积的10～30％，摇床转速100～150rpm；（2）第一次扩大培养：将步骤（1）所述活化好的种子液按1-1.5%的接种量接种到培养基装液量为70-75%的50L发酵罐中进行第一次扩大培养，所述第一次扩大培养的发酵培养基配方：葡萄糖15～20g/L、豆粕粉30～40g/L、玉米粉35～50g/L、蛋白胨10～20g/L、MgSO4·7H2O0.1～0.5g/L、FeSO4·7H2O0.01～0.015g/L、KH2PO41～5g/L、NaCl1～5g/L；第一次扩大培养的培养条件：整个培养过程在线监控，溶氧浓度35%～55%，温度30～40℃，培养12～15h，实时在线补加消泡剂，OD600为3.0～5.0；（3）第二次扩大培养：将步骤（2）所述第一次扩大培养所得种子液按8-10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCC NO: M 2018266，分类命名为：解淀粉芽胞杆菌BaY002；拉丁文学名

【技术特征摘要】
1.一株解淀粉芽胞杆菌，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌种保藏号为CCTCCNO:M2018266，分类命名为：解淀粉芽胞杆菌BaY002；拉丁文学名BacillusamyloliquefaciensBaY002。2.一种适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，由权利要求1所述菌种保藏号为CCTCCNO:M2018266的解淀粉芽胞杆菌BaY002发酵制成，所述微生态制剂中的抑菌活性物质的相对分子量为1045.29。3.根据权利要求2所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述微生态制剂为液体制剂或固体制剂。4.根据权利要求2或3所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述水产养殖的动物为淡水鱼类。5.根据权利要求4所述适用于水产养殖的微生态制剂，其特征在于，所述淡水鱼为草鱼、鲫鱼或鲤鱼。6.一种如权利要求2或3所述适用于水产养殖的微生态制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）接种活化：将解淀粉芽胞杆菌BaY002保藏斜面菌种转接到活化斜面培养基上活化培养过夜，得到活化好的种子液；所述活化斜面培养基为LB摇瓶种子培养基，所述LB摇瓶种子培养基的配方：蛋白胨5～10g/L；酵母粉1～5g/L；氯化钠5～10g/L；活化培养的条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏立秋，邹升，丁学知，龚亮，胡胜标，孙运军，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43