一种黄连木组织培养褐化的方法技术

本发明专利技术公开了一种防止黄连木组织培养褐化的方法，将遮光处理24～48h后的幼嫩茎段浸泡在0.5～1.0wt‰的冰醋酸，1.0～1.5wt‰的食盐，0.5～1.0wt‰的山梨酸钾与水混合制得溶液1h。本发明专利技术通过控制接种材料前处理，能够显著降低黄连木外植体的褐变率以及提高其成活率，操作简便，抑制褐化效果较好，为黄连木组织培养提供技术依托，为实现黄连木的快速繁育，为生产提供大量优质种苗。

A Method of Browning in Tissue Culture of Pistacia chinensis

The invention discloses a method for preventing tissue culture browning of Pistacia chinensis. The young stem segments after shading treatment for 24 to 48 hours are immersed in glacial acetic acid of 0.5 to 1.0 wt, salt of 1.0 to 1.5 wt, potassium sorbate of 0.5 to 1.0 wt, and water to prepare a solution for 1 hour. By controlling the pretreatment of inoculating materials, the invention can significantly reduce the browning rate of the explants of Coptis chinensis and improve its survival rate. The operation is simple and the effect of inhibiting browning is good. The invention provides technical support for tissue culture of Coptis chinensis, realizes rapid propagation of Coptis chinensis and provides a large number of high-quality seedlings for production.

【技术实现步骤摘要】
一种黄连木组织培养褐化的方法
本专利技术属农林领域的植物组织培养技术，具体涉及一种防止黄连木组织培养褐化的方法。
技术介绍
黄连木(PistaciachinensisBunge)，漆树科，雌雄异株。又名楷木、楷树、药树、药木、黄连茶等。黄连木是一种多年生木本油料植物，也是阿月浑子良好的砧木树种。籽播育苗是黄连木的主要育苗方法，但其种子属深休眠类型。此外，由于黄连木种子外被蜡质，直接播种发芽比较困难。在沙藏前必须对种子进行脱蜡处理。运用组织培养技术是建立黄连木无性快繁的重要手段。茎段是植物组培过程中常用的外植体之一，茎段组培具有繁殖速度快、变异系数较低等优点。而黄连木在组培快繁过程中外植体存在着易褐化死亡的问题，因此如何克服褐变成为其组培快繁成功与否的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种降低黄连木褐化的方法，包括如下步骤：(1)在剪取黄连木植株嫩茎前，将植株进行遮光处理24～48h；(2)将0.5～1.0wt‰的冰醋酸，1.0～1.5wt‰的食盐，0.5～1.0wt‰的山梨酸钾与水混合制得溶液，将步骤(1)材料在上述溶液中浸泡1h左右，自来水冲洗2～3遍；(3)将步骤(2)中材料在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次。将消毒后的茎段切成长度为1cm左右(带1个腋芽)的小段，接种到初代培养基中，初代培养基为WPM+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，PH6.0。(4)将步骤(3)中接种好的材料置于22℃～25℃，光照为2500lx～2700lx下培养20天。由于采用了上述技术方案，本专利技术与现有技术相比，虽然该技术采用的杀菌剂为常用杀菌剂，但本专利技术方法通过化学与物理方法相结合的方式抑制黄连木褐化，能够显著降低黄连木外植体的褐变率，提高其成活率，操作简便，抑制褐化效果较好，为黄连木组织培养提供技术依托。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详述：实施例1(1)在剪取黄连木植株嫩茎前，将植株进行遮光处理24h；(2)将0.5wt‰的冰醋酸，1.0wt‰的食盐，0.5wt‰的山梨酸钾与水混合制得溶液，将步骤(1)材料在上述溶液中浸泡1h左右，自来水冲洗2～3遍；(3)将步骤(2)中材料在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次。将消毒后的茎段切成长度为1cm左右(带1个腋芽)的小段，接种到初代培养基中，初代培养基为WPM+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，PH6.0。(4)将步骤(3)中接种好的材料置于22℃～25℃，光照为2500lx～2700lx下培养20天。本实施例黄连木褐化率56％，幼苗成活率为92％。实施例2(1)在剪取黄连木植株嫩茎前，将植株进行遮光处理36h；(2)将0.8wt‰的冰醋酸，1.3wt‰的食盐，0.8wt‰的山梨酸钾与水混合制得溶液，将步骤(1)材料在上述溶液中浸泡1h左右，自来水冲洗2～3遍；(3)将步骤(2)中材料在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次。将消毒后的茎段切成长度为1cm左右(带1个腋芽)的小段，接种到初代培养基中，初代培养基为WPM+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，PH6.0。(4)将步骤(3)中接种好的材料置于22℃～25℃，光照为2500lx～2700lx下培养20大。本实施例黄连木褐化率42％，幼苗成活率为95％。实施例3(1)在剪取黄连木植株嫩茎前，将植株进行遮光处理48h；(2)将1.0wt‰的冰醋酸，1.5wt‰的食盐，1.0wt‰的山梨酸钾与水混合制得溶液，将步骤(1)材料在上述溶液中浸泡1h左右，自来水冲洗2～3遍；(3)将步骤(2)中材料在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次。将消毒后的茎段切成长度为1cm左右(带1个腋芽)的小段，接种到初代培养基中，初代培养基为WPM+6-BA1.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，PH6.0。(4)将步骤(3)中接种好的材料置于22℃～25℃，光照为2500lx～2700lx下培养20天。本实施例黄连木褐化率33％，幼苗成活率为98％。实施例1～3采用的杀菌剂虽然为常规杀菌剂，但与常规方法相比，本专利技术方法通过化学与物理方法相结合的方式抑制黄连木褐化。实施例1～3的数据分析表明，该方法较常规方法能够显著降低黄连木外植体的褐变率，提高其成活率，组培苗生长健壮，该方法操作简便，成本低。实施例3的抑制褐化效果显著高于实施例1和实施例2，并且能够达到p＜0.05显著水平。尽管本专利技术的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本专利技术的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本专利技术并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种防止黄连木组织培养褐化的方法，其特征在于：第一步，黄连木嫩茎在冰醋酸、食盐山梨酸钾与水混合溶液中浸泡1h，然后在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次；第二步，将消毒后的茎段切成长度为1cm左右并带1个腋芽的小段，接种到初代培养基中培养。

【技术特征摘要】
1.一种防止黄连木组织培养褐化的方法，其特征在于：第一步，黄连木嫩茎在冰醋酸、食盐山梨酸钾与水混合溶液中浸泡1h，然后在超净工作台上用75％的酒精进行表面消毒30s，无菌水冲洗2～3次；然后用0.1％的氯化汞溶液处理10min，最后再用无菌水冲洗5～6次；第二步，将消毒后的茎段切成长度为1cm左右并带1个腋芽的小段，接种到初代培养基中培养。2.如权利要求1所述的防止黄连木组织培养褐化的方法，其特征在于，所述的嫩茎在剪取前植株进行24～48h遮光处理。3.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾立伟，赵灿，胡冬杰，朵庆同，乔星，梁宇，
申请(专利权)人：保定绿视野林业发展有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13