止血调经组合物的指纹图谱构建方法、定量检测方法及质量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种止血调经组合物的指纹图谱构建方法、定量检测方法及质量检测方法，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述指纹图谱构建方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成供试品溶液，采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到具有共有特征峰的所述止血调经组合物的指纹图谱。本发明专利技术为止血调经组合物的质量研究提供了试验依据，为止血调经组合物提供了综合的质量评价方法，为该组合物的质量内部管控和提升提供了很好的依据，同时也对确保其临床疗效具有极其重要的意义。

Fingerprint construction method, quantitative detection method and quality detection method of hemostatic and meridian regulating compositions

The invention relates to a fingerprint construction method, a quantitative detection method and a quality detection method of a hemostatic regulating meridian composition, which is composed of Astragalus membranaceus, donkey glue, Codonopsis pilosula, Paeonia lactiflora, Angelica sinensis, agrimony grass, alizarin, bergamot and intermittent. The fingerprint construction method comprises the following steps: the hemostatic regulating meridian composition is made into a sample solution, which is high in quality. The sample solution was detected by high performance liquid chromatography and the fingerprint of the hemostatic meridian regulating composition with common characteristic peaks was obtained. The invention provides an experimental basis for the quality study of the hemostatic and meridian regulating composition, provides a comprehensive quality evaluation method for the hemostatic and meridian regulating composition, provides a good basis for the internal quality control and improvement of the composition, and also has an extremely important significance for ensuring its clinical efficacy.

【技术实现步骤摘要】
止血调经组合物的指纹图谱构建方法、定量检测方法及质量检测方法
本专利技术涉及药物检测领域，特别是涉及一种止血调经组合物的指纹图谱构建方法、定量检测方法及质量检测方法。
技术介绍
止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断等9味中药组成，方中揉合了当归补血汤、阿胶养血膏等方剂，具有益气养血、止血调经功能，用于上环所致经期延长气血两虚证者，症见经血过期不净、月经色淡、神疲乏力、头晕眼花、少腹坠胀、色淡、苔薄白、脉细弱，具体产品包括止血调经颗粒等。目前止血调经组合物的企业质量标准方法中仅采用薄层色谱法(TLC)对成品中的没食子酸、芍药苷两个成分或当归、佛手两位药材进行定性鉴别，或者采用高效液相色谱法(HPLC)对黄芪甲苷进行定量测定。但止血调经颗粒全方成分复杂，由9味中药组成，仅以两三个成分的检测结果无法全面表征处方的物质基础，难以全面控制止血调经组合物的内在质量。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种能够更全面地表征止血调经组合物的内在质量的止血调经组合物的指纹图谱构建方法。一种止血调经组合物的指纹图谱构建方法，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述指纹图谱构建方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成供试品溶液，采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到具有共有特征峰的所述止血调经组合物的指纹图谱；其中，所述高效液相色谱检测的条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，检测波长为210nm～270nm，以水和乙腈为流动相，按照如下梯度洗脱程序进行梯度洗脱：在0～5min，所述流动相中水的体积百分比为95％，乙腈的体积百分比为5％；在5～40min，所述流动相中水的体积百分比从95％降低至65％，乙腈的体积百分比从5％升高至35％；在40～60min，所述流动相中水的体积百分比从65％降低至5％，乙腈的体积百分比从35％升高至95％。指纹图谱是当今国内外公认的能较好反映中药内在质量和鉴别真伪的方法，通过建立药用植物指纹图谱，可以较全面的反映中药所含内在化学成分的种类和数量。本专利技术建立了止血调经组合物的指纹图谱，采用指纹图谱软件共标定出11个共有峰，相似度均大于0.95，说明所建立的指纹图谱具有较好的稳定性和可控性，能为止血调经组合物的质量评价提供依据。此外，对全方与药材指纹图谱的相关峰进行指认，可确认共有峰的药材归属，所有峰都得到了峰来源归属。指纹图谱经过和对照品的图谱比对，其中三个峰的物质成分得到确认，4号为芍药苷，5号为毛蕊异黄酮葡萄糖苷以及10号峰为芒柄花苷。在进一步的方法学试验验证中，证明该方法同时适合于对该复方中芍药苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定。综上所述，本专利技术为止血调经组合物的质量研究提供了试验依据，为止血调经组合物提供了综合的质量评价方法，为该组合物的质量内部管控和提升提供了很好的依据，同时也对确保其临床疗效具有极其重要的意义。在其中一个实施例中，所述检测波长为254nm。在其中一个实施例中，将所述止血调经组合物制成供试品溶液的步骤包括：将所述止血调经组合物粉碎，然后与溶剂混合，超声提取后取上清液过滤，收集滤液得到所述供试品溶液。在其中一个实施例中，所述止血调经组合物与所述溶剂的质量体积比为(2～3)g:(18～22)mL。在其中一个实施例中，所述C18键合硅胶色谱柱的长度为200mm～300mm，内径为3mm～5mm，固定相的粒径为4μm～6μm。在其中一个实施例中，所述C18键合硅胶色谱柱为ThermoAcclaim120C18液相色谱柱。在其中一个实施例中，所述流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述C18键合硅胶色谱柱的柱温为25℃～35℃。本专利技术还提供了一种止血调经组合物的指纹图谱，根据上述指纹图谱构建方法得到。本专利技术还提供了一种止血调经组合物中活性成分的定量检测方法，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述活性成分为芍药苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷中的任意一种，所述定量检测方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成待测品溶液，采用高效液相色谱检测所述待测品溶液，得到所述待测品溶液的色谱图，根据所述色谱图中与所述活性成分对应的峰的峰面积计算所述活性成分的含量；其中，所述高效液相色谱检测的条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，检测波长为210nm～270nm，以水和乙腈为流动相，按照如下梯度洗脱程序进行梯度洗脱：在0～5min，所述流动相中水的体积百分比为95％，乙腈的体积百分比为5％；在5～40min，所述流动相中水的体积百分比从95％降低至65％，乙腈的体积百分比从5％升高至35％；在40～60min，所述流动相中水的体积百分比从65％降低至5％，乙腈的体积百分比从35％升高至95％。本专利技术还提供了一种止血调经组合物的质量检测方法，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述质量检测方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成待测品溶液，采用高效液相色谱检测所述待测品溶液，得到所述待测品溶液的色谱图，将所述色谱图与上述指纹图谱构建方法得到的指纹图谱比较，计算相似度，根据所述相似度对所述止血调经组合物的质量进行评价；其中，所述高效液相色谱检测的条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，检测波长为210nm～270nm，以水和乙腈为流动相，按照如下梯度洗脱程序进行梯度洗脱：在0～5min，所述流动相中水的体积百分比为95％，乙腈的体积百分比为5％；在5～40min，所述流动相中水的体积百分比从95％降低至65％，乙腈的体积百分比从5％升高至35％；在40～60min，所述流动相中水的体积百分比从65％降低至5％，乙腈的体积百分比从35％升高至95％。附图说明图1为止血调经颗粒全波长扫描2D图谱；图2为止血调经颗粒全波长扫描3D图谱；图3为10批止血调经颗粒的HPLC指纹图谱；图4为止血调经颗粒的指纹图谱和对照品溶液的图谱；图5为止血调经颗粒的指纹图谱和原药材的图谱；图6为芍药苷的标准曲线图；图7为毛蕊异黄酮葡萄糖苷的标准曲线图；图8为芒柄花苷的标准曲线图；图9为实施例2～5的图谱；图10为实施例6～8的图谱；图11为对比例1的图谱；图12为对比例2的图谱。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述，并给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。本专利技术一实施例的止血调经组合物的指纹图谱构建方法，包括以下步骤：将止血调经组合物制成供试品溶液，采用高效液相色谱检测上述供试品溶液，得到具有共有特征峰的所述止血调经组合物的指纹图谱。其中，上述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，高效液相色谱检测的条本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种止血调经组合物的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述指纹图谱构建方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成供试品溶液，采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到具有共有特征峰的所述止血调经组合物的指纹图谱；其中，所述高效液相色谱检测的条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，检测波长为210nm～270nm，以水和乙腈为流动相，按照如下梯度洗脱程序进行梯度洗脱：在0～5min，所述流动相中水的体积百分比为95％，乙腈的体积百分比为5％；在5～40min，所述流动相中水的体积百分比从95％降低至65％，乙腈的体积百分比从5％升高至35％；在40～60min，所述流动相中水的体积百分比从65％降低至5％，乙腈的体积百分比从35％升高至95％。

【技术特征摘要】
1.一种止血调经组合物的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述止血调经组合物由黄芪、阿胶、党参、白芍、当归、仙鹤草、茜草、佛手和续断组成，所述指纹图谱构建方法包括以下步骤：将所述止血调经组合物制成供试品溶液，采用高效液相色谱检测所述供试品溶液，得到具有共有特征峰的所述止血调经组合物的指纹图谱；其中，所述高效液相色谱检测的条件为：采用C18键合硅胶色谱柱，检测波长为210nm～270nm，以水和乙腈为流动相，按照如下梯度洗脱程序进行梯度洗脱：在0～5min，所述流动相中水的体积百分比为95％，乙腈的体积百分比为5％；在5～40min，所述流动相中水的体积百分比从95％降低至65％，乙腈的体积百分比从5％升高至35％；在40～60min，所述流动相中水的体积百分比从65％降低至5％，乙腈的体积百分比从35％升高至95％。2.根据权利要求1所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述检测波长为254nm。3.根据权利要求1所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，将所述止血调经组合物制成供试品溶液的步骤包括：将所述止血调经组合物粉碎，然后与溶剂混合，超声提取后取上清液过滤，收集滤液得到所述供试品溶液。4.根据权利要求3所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述止血调经组合物与所述溶剂的质量体积比为(2～3)g:(18～22)mL。5.根据权利要求1所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述C18键合硅胶色谱柱的长度为200mm～300mm，内径为3mm～5mm，固定相的粒径为4μm～6μm。6.根据权利要求5所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述C18键合硅胶色谱柱为ThermoAcclaim120C18液相色谱柱。7.根据权利要求1～6任一项所述的指纹图谱构建方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8mL/min～1.2mL/min，所述C18键合硅胶色谱柱的柱温为25℃～35℃。8.一种止血调经组合物的指纹图谱，其特征在于，根据权利要求1～6任一项所述的指纹...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈秧，易小兰，文迎艺，屈金艳，高尚，
申请(专利权)人：湖南安邦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43