靶向成纤维激活蛋白α的结合单元及其应用制造技术

本发明专利技术涉及特异性结合FAPα的结合单元，编码此类结合单元的多核苷酸，包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本发明专利技术还涉及用于生成该抗原结合单元的方法和使用本发明专利技术的FAPα特异性结合单元治疗疾病的方法。本发明专利技术的特异性结合FAPα的结合单元能够有效结合表达FAPα的肿瘤细胞，而包含所述结合单元的免疫效应细胞对表达FAP的肿瘤细胞表现出显著的杀伤能力。

Targeted binding unit of fibrinogenetic activator protein alpha and its application

The invention relates to a binding unit specifically binding to FAPalpha, a polynucleotide encoding such a binding unit, a carrier containing such polynucleotides and a host cell. The invention also relates to a method for generating the antigen binding unit and a method for treating diseases using the FAPalpha specific binding unit of the invention. The specific binding unit of the present invention can effectively bind tumour cells expressing FAP alpha, and the immune effector cells containing the binding unit exhibit remarkable killing ability to tumour cells expressing FAP.

【技术实现步骤摘要】
靶向成纤维激活蛋白α的结合单元及其应用
本专利技术涉及生物医药领域；具体地说，本专利技术涉及特异性结合FAPα的结合单元，编码此类结合单元的多核苷酸，包含此类多核苷酸的载体和宿主细胞。本专利技术还涉及用于生成该抗原结合单元的方法和在疾病的治疗中使用它的方法。
技术介绍
成纤维细胞激活蛋白α(Fibroblastactivationproteinα,FAPα)是特异性表达于肿瘤相关成纤维细胞(CAF)表面的一种抗原分子(NCBIReferenceSequence:NP_001278736.1)，属于丝氨酸蛋白酶家族，具有胶原酶和二肽基肽酶活性，在肿瘤宿主界面基质的降解和重建中发挥着重要的作用，参与肿瘤的生长、浸润和转移，FAPα选择性表达于90％以上的恶性上皮肿瘤(如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤黑色素瘤、肾癌、膀胱癌等)的基质，胚胎组织、愈合创面及生理性重建的器官中，而在正常成体组织中一般不表达。这些特点使FAPα成为多种肿瘤的成像、诊断以及治疗的抗原靶标。人FAPα最初是使用单克隆抗体(mAb)F19(记载于WO93/05804，ATCC编号HB8269)在培养的成纤维细胞中鉴定的。基于F19抗体的人源化开发了西罗珠单抗(Sibrotuzumab)/BIBH1，一项利用西罗珠单抗进行的I期研究证明了131I标记的抗体的特异性肿瘤积累(Scottetal.,ClinCancerRes9,1639-1647(2003))。然而，未偶联的西罗珠单抗在具有转移性结肠直肠癌的患者中的一项早期II期试验因抗体缺少抑制肿瘤发展的功效而停止(Hofheinzetal.,Inkologie26,44-48(2003))。因此，本领域仍然需要增强的治疗方法，包括靶向FAPα、具有改良功效的抗体来治疗癌症。
技术实现思路
本专利技术目的在于发现特异性结合FAPα的结合单元，包括但不限于抗体以及开发靶向FAPα的免疫效应细胞。在第一方面，本专利技术提供一种抗原结合单元，所述抗原结合单元包含轻链CDR区和重链CDR区，所述的重链CDR包含HCDR1，HCDR2，和HCDR3；所述的轻链CDR区包含LCDR1，LCDR2，和LCDR3；其中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列独立选自下组：SEQIDNO:1-3、7和8，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列独立选自下组：SEQIDNO:4-6、9和10。在具体的实施方式中，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列。在具体的实施方式中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3；B.SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:3。在具体的实施方式中，所述的LCDR1具有SEQIDNO:4或9所示的序列，所述的LCDR2具有SEQIDNO:5或10所示的序列，所述的LCDR3具有SEQIDNO:6所示的序列。在具体的实施方式中，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6；B.SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:6。在具体的实施方式中，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列，所述的LCDR1具有SEQIDNO:4或9所示的序列，所述的LCDR2具有SEQIDNO:5或10所示的序列，所述的LCDR3具有SEQIDNO:6所示的序列。在具体的实施方式中，所述的HCDR1含有SEQIDNO:1所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:2所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:4所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:5所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列；或者所述的HCDR1含有SEQIDNO:7所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:8所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:4所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:5所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列；或者所述的HCDR1含有SEQIDNO:1所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:2所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:9所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:10所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列。在具体的实施方式中，所述的抗原结合单元具有SEQIDNO:11或15所示的重链可变区，和SEQIDNO:13或17所示的轻链可变区。在优选的实施方式中，所述抗原结合单元是抗体，优选单克隆抗体或其活性片段。在第二方面，本专利技术提供第一方面所述的抗原结合单元的突变体，所述突变体与第一方面所述的抗原结合单元竞争结合FAPα。在具体的实施方式中，所述突变体与第一方面所述的抗原结合单元在轻链可变区序列上有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的相同性；或者，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元在在重链可变区序列上有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的相同性；优选地，所述突变体与第一方面所述的抗原结合单元在轻链CDR区，例如轻链CDR1或CDR2的序列上有70％以上；优选地，75％以上；更优选地，80％以上的相同性；或者，所述突变体与第一方面所述的抗原结合单元在重链CDR区，例如重链CDR1或CDR2的序列上有60％以上；优选地，70％以上；更优选地，80％以上的相同性。在具体的实施方式中，所述突变体与第一方面所述的抗原结合单元竞争结合FAPα上同一结合表位。在第三方面，本专利技术提供一种抗原结合单元，所述抗原结合单元包含轻链CDR区和重链CDR区，所述的重链CDR包含HCDR1，HCDR2和HCDR3；所述的轻链CDR区包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，其中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3独立选自与SEQIDNO:1-3、7、8中任一序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相似性的序列，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3独立选自与SEQIDNO:4-6、9、10中任一序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相似性的序列。在具体的实施方式中，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列。在具体的实施方式中，所述的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗原结合单元，所述抗原结合单元包含轻链CDR区和重链CDR区，所述的重链CDR包含HCDR1，HCDR2，和HCDR3；所述的轻链CDR区包含LCDR1，LCDR2，和LCDR3；其中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列独立选自下组：SEQ ID NO:1‑3、7和8，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列独立选自下组：SEQ ID NO:4‑6、9和10。

【技术特征摘要】
1.一种抗原结合单元，所述抗原结合单元包含轻链CDR区和重链CDR区，所述的重链CDR包含HCDR1，HCDR2，和HCDR3；所述的轻链CDR区包含LCDR1，LCDR2，和LCDR3；其中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列独立选自下组：SEQIDNO:1-3、7和8，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列独立选自下组：SEQIDNO:4-6、9和10。2.如权利要求1所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列。3.如权利要求2所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3；B.SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:3。4.如权利要求1所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的LCDR1具有SEQIDNO:4或9所示的序列，所述的LCDR2具有SEQIDNO:5或10所示的序列，所述的LCDR3具有SEQIDNO:6所示的序列。5.如权利要求4所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6；B.SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:6。6.如权利要求1所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列，所述的LCDR1具有SEQIDNO:4或9所示的序列，所述的LCDR2具有SEQIDNO:5或10所示的序列，所述的LCDR3具有SEQIDNO:6所示的序列。7.如权利要求6所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1含有SEQIDNO:1所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:2所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:4所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:5所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列；或者所述的HCDR1含有SEQIDNO:7所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:8所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:4所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:5所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列；或者所述的HCDR1含有SEQIDNO:1所示的序列、所述的HCDR2含有SEQIDNO:2所示的序列、所述的HCDR3含有SEQIDNO:3所示的序列、所述的LCDR1含有SEQIDNO:9所示的序列、所述的LCDR2含有SEQIDNO:10所示的序列、所述的LCDR3含有SEQIDNO:6所示的序列。8.如权利要求1-7任一所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的抗原结合单元具有SEQIDNO:11或15所示的重链可变区，和SEQIDNO:13或17所示的轻链可变区。9.权利要求1-8任一所述的抗原结合单元的突变体，与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元竞争结合FAPα。10.如权利要求9所述的突变体，其特征在于，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元在轻链可变区序列上有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的相同性；或者，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元在在重链可变区序列上有90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的相同性；优选地，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元在轻链CDR区，例如轻链CDR1或CDR2的序列上有70％以上；优选地，75％以上；更优选地，80％以上的相同性；或者，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元在重链CDR区，例如重链CDR1或CDR2的序列上有60％以上；优选地，70％以上；更优选地，80％以上的相同性。11.如权利要求9所述的突变体，其特征在于，所述突变体与权利要求1-8任一所述的抗原结合单元竞争结合FAPα上同一结合表位。12.一种抗原结合单元，所述抗原结合单元包含轻链CDR区和重链CDR区，所述的重链CDR包含HCDR1，HCDR2和HCDR3；所述的轻链CDR区包含LCDR1，LCDR2和LCDR3，其中，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3独立选自与SEQIDNO:1-3、7、8中任一序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相似性的序列，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3独立选自与SEQIDNO:4-6、9、10中任一序列至少80％、优选至少85％、更优选至少90％、更优选至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相似性的序列。13.如权利要求12所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1具有SEQIDNO:1或7所示的序列，所述的HCDR2具有SEQIDNO:2或8所示的序列，所述的HCDR3具有SEQIDNO:3所示的序列。14.如权利要求13所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3；B.SEQIDNO:7、SEQIDNO:8、SEQIDNO:3。15.如权利要求12所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的LCDR1具有SEQIDNO:4或9所示的序列，所述的LCDR2具有SEQIDNO:5或10所示的序列，所述的LCDR3具有SEQIDNO:6所示的序列。16.如权利要求15所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的LCDR1，LCDR2和LCDR3的序列选自以下任一组：A.SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6；B.SEQIDNO:9、SEQIDNO:10、SEQIDNO:6。17.如权利要求12所述的抗原结合单元，其特征在于，所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗海，王鹏，
申请(专利权)人：科济生物医药上海有限公司，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31