一种用于增强T细胞免疫功能的组合物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于增强机体T细胞免疫功能的组合物，其包括脆弱拟杆菌。本发明专利技术还提供了一种用于预防和/或治疗肿瘤的组合物，其包含脆弱拟杆菌。

Composition for enhancing T cell immune function and its preparation method

The invention provides a composition for enhancing the immune function of body T cells, including Bacteroides fragilis. The present invention also provides a combination for the prevention and/or treatment of tumors, including Bacteroides fragilis.

【技术实现步骤摘要】
一种用于增强T细胞免疫功能的组合物及其制备方法
本专利技术属于生物医疗
，具体涉及一种用于增强T细胞免疫功能的组合物、一种用于制备预防和/或治疗肿瘤的组合物、以及所述组合物的制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤已成为威胁人类健康和生命的“第一杀手”，在人类死亡原因中，因患恶性肿瘤致死的病例已上升到首位。全世界每年大约有870万人患肿瘤，死亡约690万人，仅我国每年就有105万人死于晚期恶性肿瘤。目前治疗恶性肿瘤的方法十分有限。脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis，简称B.fragilis)是一种革兰染色阴性、杆状、两端钝圆而浓染，有荚膜、无芽胞、无动力的专性厌氧细菌，其分为产肠毒素型和非产肠毒素型。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌的一部分，主要存于结肠中，此外，呼吸道胃肠道及泌尿生殖道也可定植生长。众多研究表明，脆弱拟杆菌对防治急慢性肠炎、菌群失调、上呼吸道感染和神经官能症等具有较好疗效。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种增强机体T细胞免疫功能以及预防和/或治疗肿瘤的组合物。本专利技术的另一个目的是提供所述组合物的制备方法。为了实现以上目的，本专利技术提供了脆弱拟杆菌用于增强机体T细胞免疫功能的应用。本专利技术还提供了脆弱拟杆菌用于预防和/或治疗肿瘤的应用。本专利技术还提供了脆弱拟杆菌用于制备增强机体T细胞免疫功能的药物的应用。本专利技术还提供了脆弱拟杆菌用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物的应用。本专利技术还提供了一种用于增强机体T细胞免疫功能的组合物，其包括脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)。优选地，所述脆弱拟杆菌是灭活的、减毒的、低感染性或非感染性的，并且含有天然结构的细菌蛋白组分，能够有效降低T细胞表达耗竭分子从而增强T细胞免疫。所述脆弱拟杆菌是以下中的一种或多种：脆弱拟杆菌活菌体；经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌；脆弱拟杆菌裂解物；和/或脆弱拟杆菌液体培养上清液。优选地，所述脆弱拟杆菌是通过干热、湿热、过滤、有机溶剂、化学试剂、紫外或红外射线、发酵、冻干、基因重组、基因修饰或改造的方法中的任意一种或多种灭活的。所述组合物包括但不限于是药物组合物、食品、保健品或食品添加剂中的任意一种。本专利技术还提供了所述用于增强机体T细胞免疫功能的组合物的制备方法，其步骤如下：(1)收集活脆弱拟杆菌的培养物；(2)用15％甘油/生理盐水溶液洗涤所述脆弱拟杆菌；(3)将所述脆弱拟杆菌重悬于所述15％甘油/生理盐水溶液中；(4)通过70℃水浴加热30分钟所述脆弱拟杆菌，获得灭活菌体。所述的15％甘油/生理盐水溶液是指生理盐水中含有15％(体积百分比)的甘油。本专利技术还提供了一种用于预防和/或治疗肿瘤的组合物，其包含脆弱拟杆菌。所述肿瘤优选包括但不限于乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤、肺癌、胃癌、肝癌、胆管癌、神经胶质瘤、头、颈部鳞状细胞癌、子宫颈癌、肾细胞癌、甲状腺癌、急性髓性白血病、骨髓瘤、食管癌、淋巴瘤、皮肤癌中的一种或多种。优选地，所述脆弱拟杆菌是灭活的、减毒的、低感染性或非感染性的，并且含有天然结构的细菌蛋白组分。优选地，所述脆弱拟杆菌是通过干热、湿热、过滤、有机溶剂、化学试剂、紫外或红外射线、发酵、冻干、基因重组、基因修饰或改造的方法中的任意一种或多种灭活的。所述组合物包括但不限于是药物组合物、食品、保健品或食品添加剂中的任意一种。本专利技术还提供了用于增强机体T细胞免疫功能的方法，所述方法包括步骤：(1)提供包含灭活的或非感染性的脆弱拟杆菌的组合物；和(2)给患者施用有效量的所述组合物。本专利技术还提供了用于预防或治疗肿瘤的方法，所述方法包括给患者施用包含灭活的、低感染性的或非感染性的脆弱拟杆菌的组合物的步骤，由此减少T细胞中抑制分子Tim-3的表达并增强T细胞的免疫功能。本专利技术还提供了所述用于预防和/或治疗肿瘤的组合物的制备方法，其步骤如下：(1)收集活脆弱拟杆菌的培养物；(2)用15％甘油/生理盐水溶液洗涤所述脆弱拟杆菌；(3)将所述脆弱拟杆菌重悬于所述15％甘油/生理盐水溶液中；(4)通过70℃水浴加热30分钟所述脆弱拟杆菌，获得灭活菌体。实验结果表明，脆弱拟杆菌经功能增强，减少或控制肿瘤生长的效果对比生理盐水或不灭活肠道菌对照组，可以达到或超过40％，甚至40～90％。脆弱拟杆菌经功能增强，可以减少免疫细胞特别是T细胞功能抑制分子或又称T细胞耗竭分子包括T-cellimmunoglobulinandmucin-domaincontaining-3(T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3)(简称：Tim-3或Tim3)等但不仅限于Tim-3的表达，而且经功能增强的脆弱拟杆菌减少Tim-3等T细胞耗竭分子表达的效果对比生理盐水或不灭活肠道菌对照组可以达到或超过35～65％。脆弱拟杆菌经功能增强，可以同时减少CD4+T细胞与CD8+T细胞这两类最为重要的抗肿瘤免疫细胞表达T细胞耗竭分子包括Tim-3但不限于Tim-3从而同时增强CD4+T细胞与CD8+T细胞的抗肿瘤免疫功能。附图说明图1为检测脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌对小鼠黑色素瘤的治疗和/或预防作用实验流程示意图。图2为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌对小鼠体内肿瘤生长抑制作用的小鼠原位检测，虚线圆圈标识的为肿瘤的位置与大小。圆圈的直径越大，表示肿瘤的生长速度更快并且肿瘤体积越大。图中可以看出灭活脆弱拟杆菌处理的小鼠的肿瘤体积显著小于其它两组小鼠的肿瘤。图3为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌对小鼠体内肿瘤生长抑制作用的肿瘤检测照片。从图可以看出，相对比生理盐水或不灭活对照组，灭活脆弱拟杆菌处理的小鼠的肿瘤体积大幅度减小。图4为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌预防和/或治疗后小鼠体内肿瘤体积对比统计分析图。相对比生理盐水或不灭活对照组，灭活脆弱拟杆菌抑制肿瘤生长体积的效果达到或超过40～90％。*表示studentt-testp<0.05，**表示studentt-testp<0.01。p<0.05或p<0.01都具有统计学显著差异意义。每种处理组有12只小鼠。图5为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌预防和/或治疗黑色素瘤后CD4+T细胞中抑制分子Tim-3的表达情况的每种处理组各一只小鼠的流式细胞分析图。右上象限的数字显示的为Tim-3+CD4+T细胞(既表达Tim-3也表达CD4的T细胞)占脾脏总体CD4+T细胞的百分比情况。从流式细胞分析象限图可以看出，相对比生理盐水或不灭活对照组，灭活脆弱拟杆菌减少Tim-3分子表达的效果达到或超过38～65％。图6为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌预防和/或治疗黑色素瘤后CD4+T细胞中抑制分子Tim-3的表达情况的统计分析图。从统计图可以看出，相对比生理盐水或不灭活对照组，灭活脆弱拟杆菌显著减少CD4+T细胞中Tim-3分子的表达。统计分析图中**表示studentt-testp<0.01。p<0.01具有统计学显著差异意义。每种处理组有12只小鼠。图7为脆弱拟杆菌及灭活脆弱拟杆菌预防和/或治疗黑色素瘤后CD8+T细胞中抑制分子Tim-3的表达情况的流式细胞分析图。右上象限的数字显示的为Tim-3+CD8+T细胞(既表达Tim-3也表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于增强机体T细胞免疫功能的组合物，其特征在于包括脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)。

【技术特征摘要】
1.一种用于增强机体T细胞免疫功能的组合物，其特征在于包括脆弱拟杆菌(Bacteroidesfragilis)。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述脆弱拟杆菌是以下中的一种或多种：脆弱拟杆菌活菌体；经过灭活、基因重组、改造或修饰、减毒、化学处理、物理处理或灭活的脆弱拟杆菌；脆弱拟杆菌裂解物；和/或脆弱拟杆菌液体培养上清液。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述脆弱拟杆菌是通过干热、湿热、过滤、有机溶剂、化学试剂、紫外或红外射线、发酵、冻干、基因重组、基因修饰或改造的方法中的任意一种或多种灭活的。4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物是药物组合物、食品、保健品或食品添加剂中的任意一种。5.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于步骤如下：(1)收集活脆弱拟杆菌的培养物；(2)用15％甘油/生理盐水溶液洗涤所述脆弱拟杆菌；(3)将所述脆弱拟杆菌重悬于所述15％甘油/生理盐水溶液中；(4)通过70℃水浴加热30分钟所述脆弱拟杆菌，获得灭活菌体。6.一种用于预防和/或治疗肿瘤的组合物，其特征在于包括脆弱拟杆菌。7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述脆弱拟杆菌是以下中的一种或多种：脆弱拟杆菌活菌体；经过灭活、...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾谷城，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44