一种器官保存液制造技术

本发明专利技术提供一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的方法以及所用的保存液，适用于多种器官保存。离体肝脏在本发明专利技术所述器官保存液保存以及机械灌注过程中能够存活超过24h，肝脏微循环结构完整，未见明显损伤，胆汁分泌功能良好，肝脏合成与代谢功能良好，大大延长肝脏体外保存的时间，并提升后期肝移植患者术后生存率。

An Organ Preservation Solution

The invention provides a method for maintaining the survival and/or function of vascular endothelial cells during in vitro preservation and a preservation solution used, which is suitable for the preservation of various organs. The isolated liver can survive for more than 24 hours during the preservation of the organ preservation solution and mechanical perfusion. The microcirculation structure of the liver is intact, no obvious damage is observed, the bile secretion function is good, the liver synthesis and metabolism function is good, the preservation time of the liver in vitro is prolonged greatly, and the survival rate of the patients after liver transplantation is improved.

【技术实现步骤摘要】
一种器官保存液
本专利技术提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的液体，特别是提供了一种器官保存液，适用于多种器官的体外保存。属于医疗设备领域。
技术介绍
目前器官移植是终末期器官病变、癌症以及急性器官衰竭的一种不可替代的治疗手段，然而在中国乃至世界范围内，多种器官供体极度紧缺。而在通常的器官移植过程中，器官的保存效果直接影响手术的成败和病人的术后存活。而对于器官保存影响最大的则是与器官直接接触的保存液。自1987年UniversityofWisconsinsolution(UW液)问世以来，领域内研究者对于器官保存液进行了不懈的研究和改进。目前器官保存液的金标准是UW液。UW液由于含有羟乙基淀粉，导致液体高粘性，延长了灌注时间，导致器官微循环结构损伤，无法很好地应用到目前广泛使用的器官机械灌注。UW液是细胞内保存液，具有很高的钾离子含量(125mM)，而高浓度的钾离子会导致血管收缩，影响保存液的效果以及机械灌注的效果，并且在使用过程中，UW液必须被血液一次性冲走替代，才能避免高浓度钾离子流入病人体内，造成对生理尤其是心脏的影响，且由于UW液昂贵的成本，应用受到限制。目前多种器官移植供体保存与运输中使用的器官保存液，大多局限于在UW液的基础上进行改进，其中无血保存液携氧能力低，成本高，而含血细胞成分器官保存液在操作复杂、易凝血或溶血等缺陷，且易引入未知病毒。进行器官移植时，需要将供体器官分离并且经过体外保存，才能后续移植到受体体内。现有的技术中器官体外保存液均存在携氧能力低或者使用血液制品存在各种风险的问题，无法兼具高含氧量和低风险的特点。例如，公开号为CN101199273A的专利所公开的多器官储存保护液具有能够降低缺血-再灌注损伤的作用，但是无法提供有效的氧气供给，无法长时间保存器官。公开号为CN104996396A的专利使用全血作为保存液主体，存在凝血、溶血等风险，且可能带入未知血液病毒感染，对于受体病患风险很大。公开号为CN101199273A的专利公开了一种新型多器官储存保护液，用褪黑素、维生素C和水溶性维生素E组成的抗氧化系统，用以降低器官储存过程中自由基生成导致的氧化损伤；用甘露醇维持溶液渗透压与降低溶液粘滞度；使用低浓度葡萄糖以适应器官最低代谢要求，但是仍然无法做到供应器官移植供体足够氧气消耗。专利US20090239206A1公布了一种NewET-Kyotosolution器官保存液，将联丁酰基-cAMP作为添加剂，但仍然无法做到提供足够的氧气供给。而公开号为CN104996396A的专利公开了一种离体肝脏灌注保存液，使用全血作为肝脏供给，操作复杂易感染，且易引起溶血、凝血等不利情况，肝脏保存风险高，并且肝脏保存后出现了轻微肿胀的情况。公开号为CN103893205A公开了一种包含利多卡因和腺苷的心脏停搏液及其制备方法，使用利多卡因和腺苷是发挥其促使心脏停搏作用。器官低温保存实质上是模拟动物冬眠时的生理状态。冬眠机制下，冬眠哺乳动物在极低的环境温度下生存数月，没有食物或水，但是能够从冬眠中醒来后，没有明显的器官损伤。而人类在正常的生理条件下则不具备这一能力，要达到类似“冬眠”状态，需要冬眠保护剂的存在，目前，冬眠合剂作为冬眠保护剂已经在临床抢救危重病人时得到广泛应用。一项对来自正常体温大鼠和活跃及冬眠黄鼠的肝脏在特制的保护液溶液中对低温保藏的耐受力研究显示，在48h的冷藏保存后，大鼠的肝脏细胞明显被破坏，表现为肝脏酶的释放和胆汁分泌量减少；相反，来自冬眠黄鼠的肝脏在96h的冷藏后表现出很小的损伤(CareyHV,AndrewsMT,MartinSL.Mammalianhibernation:cellularandmolecularresponsestodepressedmetabolismandtemperature[J].PhysiologicalReviews,2003,83(4):1153-1181.)。研究表明，与非冬眠动物相比，冬眠动物能抵抗缺血/再灌注对组织和器官的损伤(FrerichsKU，HallenbeckJM.Hibernationingroundsquirrelsinducesstateandspecies-specifictolerancetohypoxiaandaglycemia:aninvitrostudyinhippocampalslices[J].JournalofCerebralBloodFlow&MetabolismOfficialJournaloftheInternationalSocietyofCerebralBloodFlow&Metabolism.1998,18(2):168)；另有研究表明，应用能够通过使用类鸦片样化合物DADLE[D-Ala2,D-Leu5]-enkephalin(DADLE)([D-Ala2,D-Leu5]-脑啡肽)的一种合成阿片样物质将动物器官在实验室中保存46小时，所述保存方法为多器官共同保存并与连接的静脉相连(EDRatigan，DBMckay.Exploringprinciplesofhibernationfororganpreservation[J].TransplantationReviews.2015,30(1):13-19)。随着器官捐献成为器官移植供体的主要来源，器官捐献案例随时随地可能出现，器官保存的时间以小时计算，而且终末期病患时刻会受到生命的威胁，宝贵的器官移植供体每年都会因保存时间过长或保存质量低导致被丢弃。所以有必要研制更加优越的器官保存液，提高器官捐献的利用率。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的液体，特别是提供了一种器官保存液，维持器官移植供体体外保存过程中的存活与功能，适用于多种器官的体外保存。本专利技术技术方案是：提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的方法，其包括使所述细胞与保存液接触的步骤，其特征在于所述的保存液含有如下组分：(a)能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；(b)能量底物；(c)清除代谢产物的清除剂；(d)胶体渗透压维持剂和/或胶体渗透压调节剂；(e)氧气。优选地，上述所述的方法，其中所述的保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。上述所述的方法，其用于器官的保存；优选地，其中所述的器官为肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道等。还提供了一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的保存液，含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂和去离子水，其特征在于所述保存液还含有如下组分：(a)能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；(b)能量底物；(c)清除代谢产物的清除剂；(d)胶体渗透压维持剂和/或胶体渗透压调节剂；(e)氧气。优选地，上述所述的保存液，其特征在于所述保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。上述所述的方法或者所述的保存液，其中：所述的基本盐类，是保持细胞膜内、外盐的平衡的物质，其包括但不限于氯化钠、氯化钾、硫酸镁等中的一种或者两种以上；优选地，所述的基本盐类为氯化钠、氯化钾和硫酸镁。基本盐类本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的方法，包括使所述细胞与保存液接触的步骤，其特征在于所述的保存液含有如下组分：(a)能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；(b)能量底物；(c)清除代谢产物的清除剂；(d)胶体渗透压维持剂和/或胶体渗透压调节剂；(e)氧气。

【技术特征摘要】
1.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的方法，包括使所述细胞与保存液接触的步骤，其特征在于所述的保存液含有如下组分：(a)能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；(b)能量底物；(c)清除代谢产物的清除剂；(d)胶体渗透压维持剂和/或胶体渗透压调节剂；(e)氧气。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于用于器官的保存；优选地，其中所述的器官为肝脏、心脏、肾脏、胰腺、肺或肠道等。4.一种维持血管内皮细胞体外保存过程中存活和/或功能的保存液，含有细胞所需基本盐类、pH缓冲剂和去离子水，其特征在于所述保存液还含有如下组分：(a)能够使所述细胞进入类似冬眠状态的冬眠保护剂；(b)能量底物；(c)清除代谢产物的清除剂；(d)胶体渗透压维持剂和/或胶体渗透压调节剂；(e)氧气。5.根据权利要求4所述的保存液，其特征在于所述保存液还任选地含有选自抗生素、抗炎药物、免疫抑制剂中的一种或两种以上。6.根据权利要求1-3所述的方法或者根据权利要求4-5所述的保存液，其中：所述的基本盐类选自氯化钠、氯化钾或硫酸镁中的一种或者两种以上；所述pH缓冲剂选自HEPES盐、磷酸盐、碳酸盐、磷酸氢盐、碳酸氢盐、组氨酸中的一种或者两种以上；所述的冬眠保护剂选自抑制细胞代谢类药物、细胞信息通路的抑制剂、神经递质拮抗剂，钠、钾或钙离子通道阻滞剂中的一种或者两种以上；优选地，所述的冬眠保护剂选自水合氯醛、利多卡因、阿托品、普鲁卡因、硝本地平、苯妥英钠、盐酸胺碘酮、东莨菪碱、山莨菪碱中的一种或者两种；所述能量底物选自三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、磷酸腺苷、乙酰辅酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：许莉莉，许健健，沈何放，戴焰，赵丽娟，卞从文，黄德峰，
申请(专利权)人：合肥华琪生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34