miR-1246和/或TERF2IP在诊治胶质瘤中的应用制造技术

本发明专利技术提供miR‑1246和/或TERF2IP在诊治胶质瘤中的应用。本发明专利技术首次公开了microRNA‑1246(miR‑1246)是胶质瘤衍生的外泌体(GDEs)中表达最丰富的microRNA，在缺氧胶质瘤衍生的外泌体(H‑GDEs)中显着上调。此外，miR‑1246还富集了术前胶质母细胞瘤(GBM)患者脑脊液(CSF)分离的外泌体，肿瘤切除后GBM患者脑脊液中外泌体miR‑1246显着减少。MicroRNA‑1246被证明具有最强的诱导M2巨噬细胞极化的能力。此外，研究发现H‑GDEs诱导的M2巨噬细胞极化是由miR‑1246/TERF2IP/STAT3和miR‑1246/TERF2IP/NF‑κB途径所介导。

Application of microRNA-1246 and/or TERF2IP in the diagnosis and treatment of glioma

The invention provides the application of microRNA1246 and/or TERF2IP in the diagnosis and treatment of glioma. The present invention discloses for the first time that microRNA 1246 (microRNA 1246) is the most abundant microRNA expressed in glioma-derived exosomes (GDEs), which is significantly up-regulated in hypoxic glioma-derived exosomes (H GDEs). In addition, microRNA 1246 also enriched the exosomes separated from cerebrospinal fluid (CSF) of patients with glioblastoma (GBM) before operation, and the exosome microRNA 1246 in cerebrospinal fluid of patients with GBM decreased significantly after tumor resection. MicroRNA 1246 has been shown to have the strongest ability to induce polarization of M2 macrophages. In addition, the polarization of M2 macrophages induced by H_GDEs was mediated by the pathways of microRNA1246/TERF2IP/STAT3 and microRNA1246/TERF2IP/NF_kappa B.

【技术实现步骤摘要】
miR-1246和/或TERF2IP在诊治胶质瘤中的应用
本专利技术属于生物医药和分子生物学
，具体涉及miR-1246和/或TERF2IP在诊治胶质瘤中的应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。胶质瘤是中枢神经系统中最常见和最具侵袭性的原发性肿瘤，占恶性脑肿瘤的80％以上。尽管对胶质瘤的分子认识和外科技术，放疗和化疗的进展有所增加，但胶质瘤(特别是胶质母细胞瘤(GBM)，WHOIV级胶质瘤)患者的预后仍然很差，初次诊断后中位生存时间不到15个月。恶性神经胶质瘤对标准疗法和免疫疗法的顽固性被认为是由其独特的免疫抑制肿瘤微环境引起的，其由许多不同因子和多种类型的细胞组成，包括肿瘤细胞，成纤维细胞和各种免疫细胞。缺氧是神经胶质瘤微环境的公认特征。此外，作为位于神经胶质瘤微环境中和周围的原代免疫细胞，巨噬细胞优先积聚在缺氧区域，在那里它们极化成特定的细胞类型。已经鉴定出两种极化的巨噬细胞表型，包括经典活化的巨噬细胞(M1型)和活化的巨噬细胞(M2型)。已经提出IL-6，TNF-α，IL-12等作为M1型巨噬细胞的标志物，其被认为抑制肿瘤进展。CD163，CD206，IL-10和IL-1RA用于鉴定可促进肿瘤进展的M2型巨噬细胞。作为胶质瘤中最丰富的浸润性免疫细胞，肿瘤相关巨噬细胞(TAM)更可能成为免疫抑制性肿瘤微环境中的M2型巨噬细胞。此外，缺氧可以促进TAMM2极化。外来体是由大多数细胞分泌的内吞起源的小膜囊泡(大小为30nm～150nm)。外泌体含有功能性mRNA，microRNA，长非编码RNA(lncRNAs)等，通过提供其内容在细胞间通讯中发挥重要作用。据报道，肿瘤外泌体通过转移遗传物质来抑制免疫细胞的功能。且专利技术人发现，缺氧可以改变外泌体的释放和内容，并通过调节细胞间通讯来影响受体细胞功能。
技术实现思路
针对上述现有技术的不足，本专利技术提供miR-1246和/或TERF2IP在诊治胶质瘤M2巨噬细胞极化中的应用。经研究发现，microRNA-1246(miR-1246)是胶质瘤衍生的外泌体(GDEs)中表达最丰富的microRNA，在缺氧胶质瘤衍生的外泌体(H-GDEs)中显着上调。此外，miR-1246还富集了术前胶质母细胞瘤(GBM)患者脑脊液(CSF)分离的外泌体，肿瘤切除后GBM患者脑脊液中外泌体miR-1246显着减少。MicroRNA-1246被证明具有最强的诱导M2巨噬细胞极化的能力。此外，研究发现H-GDEs诱导的M2巨噬细胞极化是由miR-1246/端粒重复结合因子2相互作用蛋白(TERF2IP)/STAT3和miR-1246/TERF2IP/NF-κB途径所介导。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术的第一个方面，提供miR-1246和/或TERF2IP在制备胶质瘤分子标志物中的应用。进一步的，miR-1246和/或TERF2IP在制备胶质瘤分子标志物中的应用，所述标志物用于检测、诊断或预测胶质瘤的进展。所述胶质瘤的进展包括胶质瘤的增殖、迁移、侵袭和/或胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化；更进一步的，所述胶质瘤的进展包括胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化；其中，所述miR-1246和TERF2IP为人源；本专利技术的第二个方面，提供一种用于检测、诊断或预测胶质瘤的进展的组合物，其包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-1246；或基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-1246调控的靶基因的表达情况或TERF2IP的表达情况的物质。其中，所述miR-1246调控的靶基因的表达情况包括TERF2IP的表达情况；优选采用液相杂交、Northern杂交、microRNA芯片、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-1246；采用酶联免疫吸附测定、胶体金检测、蛋白质芯片检测胶质瘤样品中miR-1246调控的靶基因的表达情况或TERF2IP表达情况；其中，所述miR-1246调控的靶基因的表达情况包括TERF2IP的表达情况；更进一步的，本专利技术提供一种试剂盒，所述试剂盒包括用于检测、诊断或预测胶质瘤的进展的组合物。本专利技术的第三个方面，提供能够抑制miR-1246表达和/或活性降低的物质和/或促进TERF2IP蛋白表达和/或活性提高的物质在如下(a)-(d)至少一种中的应用：(a)抑制胶质瘤细胞的增殖，或制备用于抑制胶质瘤细胞增殖的产品；(b)抑制胶质瘤细胞的迁移，或者制备用于抑制胶质瘤细胞迁移的产品；(c)抑制胶质瘤细胞的侵袭，或者制备用于抑制胶质瘤细胞侵袭的产品；(d)抑制胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化，或制备抑制胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化的产品。本专利技术的第四个方面，提供一种用于预防或治疗胶质瘤的药物组合物，其包含抑制miR-1246表达和/或活性降低的物质和/或促进TERF2IP蛋白表达和/或活性提高的物质；所述抑制miR-1246表达和/或活性降低的物质，包括采用基于RNA的microRNA功能性获得技术和/或基因特异性miRMimics技术下调miR-1246表达和/或抑制其活性；优选为miR-1246拮抗剂或下调miR-1246表达的启动子；其中，所述miR-1246拮抗剂为根据miR-1246人工合成的单链RNA；所述促进TERF2IP蛋白表达和/或活性提高的物质，包括TERF2IP蛋白激活剂。在本专利技术中，“治疗或预防”指的是能够抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和/或胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化。本专利技术的药物组合物还包括药物可接受的载体，并且该药物组合物可以为各种口服或非口服剂型。对此，本专利技术的药物组合物可以与稀释剂或赋形剂如填充剂、增稠剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、表面活性剂等组合配制。预期口服给药的固体制剂可以为片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊等形式。本专利技术有益效果：本专利技术首次公开了microRNA-1246(miR-1246)是胶质瘤衍生的外泌体(GDEs)中表达最丰富的microRNA，在缺氧胶质瘤衍生的外泌体(H-GDEs)中显着上调。此外，miR-1246还富集了术前胶质母细胞瘤(GBM)患者脑脊液(CSF)分离的外泌体，肿瘤切除后GBM患者脑脊液中外泌体miR-1246显着减少。MicroRNA-1246被证明具有最强的诱导M2巨噬细胞极化的能力。此外，研究发现H-GDEs诱导的M2巨噬细胞极化是由miR-1246/TERF2IP/STAT3和miR-1246/TERF2IP/NF-κB途径所介导。表明miR-1246和/或TERF2IP可作为诊治胶质瘤的分子标志物。附图说明图1为常氧和缺氧神经胶质瘤外泌体的特征和巨噬细胞对神经胶质瘤外泌体的吞噬作用系列图；其中，图1A为通过密度梯度离心从胶质瘤细胞系U87MG，U251，A172和P3的含氧量正常和缺氧培养物上清液中分离的外来体的代表性电子显微照片，显示它们的典型形态和大小；比例尺，100nm；图1B为通过密度梯度离心从胶质瘤细胞系U87MG，U251，A172和P3的含氧量正常和缺氧培养物上清液中分离的外来体的qNano结果，显示它们本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR‑1246和/或TERF2IP在制备胶质瘤分子标志物中的应用。

【技术特征摘要】
1.miR-1246和/或TERF2IP在制备胶质瘤分子标志物中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述标志物用于检测、诊断或预测胶质瘤的进展。3.如权利要求2所述应用，其特征在于，所述胶质瘤的进展包括胶质瘤的增殖、迁移、侵袭和/或胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化；优选的，所述胶质瘤的进展包括胶质瘤肿瘤相关巨噬细胞M2极化；优选的，所述miR-1246和TERF2IP为人源。4.一种用于检测、诊断或预测胶质瘤的进展的组合物，其特征在于，包含基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测胶质瘤样品中miR-1246；或基于免疫检测方法检测胶质瘤样品中miR-1246调控的靶基因的表达情况或TERF2IP的表达情况的物质。5.如权利要求4所述的组合物，其特征在于，采用液相杂交、Northern杂交、microRNA芯片、核酶保护分析技术、原位杂交检测胶质瘤样品中miR-1246；采用酶联免疫吸附测定、胶体金检测、蛋白质芯片检测胶质瘤样品中miR-1246调控的靶基因的表达情况或TERF2IP表达情况；其中，所述miR-1246调控的靶基因的表达情况包括TERF2IP的表达情况。6.一种试剂盒，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，薛皓，王劭博，钱明禹，张平，赵荣荣，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：山东,37