一种脂肪组织运输液及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种脂肪组织运输液及制备方法，每份运输液包括：DMEM培养液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。制备方法：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40ml PBS缓冲液中充分溶解；用0.22μm滤器过滤，将其加入160ml DMEM培养液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500ml DMEM培养液中。本发明专利技术所述的运输液中加入了抗生素，可针对性的防止脂肪组织在运输过程中被微生物感染，具有更好的抗菌效果。

A kind of adipose tissue transport solution and its preparation method

The invention relates to an adipose tissue transport solution and a preparation method. Each transport solution includes DMEM culture medium: 50ml; a mixed solution of antibiotics and PBS buffer solution: 1ml; and the concentration of antibiotics in the mixed solution is 4.7-5.3mg/ml. The preparation method: Step 1: Preparing the mixed solution of antibiotics and PBS buffer solution; For each mixed solution, weigh 0.94g-1.06g antibiotics and add 40ml PBS buffer solution to dissolve sufficiently; Fill it with 0.22um filter and add it to 160ml DMEM culture medium to form a mixed solution of 4.7-5.3mg/ml; Step 2, take 10ml of the mixed solution and add it to 500ml DMEM culture medium. The antibiotic is added to the transportation liquid of the invention, which can prevent the adipose tissue from being infected by microorganisms in the transportation process, and has better antimicrobial effect.

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪组织运输液及制备方法
本专利技术涉及细胞运输液技术，具体涉及一种脂肪组织运输液及制备方法。
技术介绍
脂肪组织主要由脂肪细胞组成。脂肪细胞质内充满脂肪滴，胞质位于细胞边缘成一薄层，核亦被挤到细胞的边缘，压成扁形。脂肪组织中的脂肪细胞在现代医学中具有举足轻重的作用。主要的，脂肪组织中包含有脂肪间充质干细胞(Adipose-DerivedStemCells，ADSC)，这是来源于脂肪组织的多能干细胞，具有自我更新和多向分化能力.并能分泌多种生物活性因子，在组织损伤、修复方面蕴含着广阔的应用前景。近年来，ADSC在抗皮肤老化方面的作用也被证实，其具有广阔的临床应用前景。保存和运输脂肪组织的最大障碍在于，脂肪细胞在体外以后，为了后续培养以及应用，其组织在制备培养的全过程中都需要处于无菌状态。而且，在保持脂肪组织在处于无菌状态的同时，还要保证组织的细胞活性。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术公开了一种脂肪组织运输液及制备方法。本专利技术所采用的技术方案如下：一种脂肪组织运输液，每份运输液包括：DMEM培养液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。优选的：每份运输液包括：PBS缓冲液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。优选的：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。更优选的：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。更优选的：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。氨基糖苷类抗生素：氨基糖苷类抗生素(Aminoglycosides)是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而成的苷类抗生素，其对于细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合成，妨碍初始复合物的合成，诱导细菌合成错误蛋白以及阻抑已合成蛋白的释放，从而导致细菌死亡。庆大霉素的硫酸盐制剂为硫酸庆大霉素，硫酸庆大霉素该品为氨基糖甙类广谱抗生素，对多种革兰阴性菌及阳性菌都具有抑菌和杀菌作用。对绿脓杆菌、产气杆菌、肺炎杆菌、沙门氏菌属、大肠杆菌及变形杆菌等革兰阴性菌和金葡菌等作用较强。根据如上所述的脂肪组织运输液的制备方法，包括：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40mlPBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.7～5.3mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500mlDMEM培养液中，得到运输液；步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。根据如上所述的脂肪组织运输液的制备方法，包括：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.98g～1.02gg抗生素，加入40mlPBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，形成4.9～5.1mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500mlDMEM培养液中，得到运输液；步骤3、对步骤2所得到的运输液进行分装，每瓶50ml；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。本专利技术的有益效果如下：(1)本专利技术所述的运输液中加入了抗生素，可针对性的防止脂肪组织在运输过程中被微生物感染，具有更好的抗菌效果。(2)本专利技术使用DMED培养液为基础，加入了各种抗生素，通过控制各个成分的含量，可以在运输过程中对脂肪组织起到很好的保护作用，维持脂肪组织的形态结构和生物活性，延长脂肪组织的保存时间，为后续的脂肪间充质干细胞的制备做好保障。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。以下实施例中所使用的脂肪组织取自选取2017年9月～2018年1月某医院实施外科手术的正常体重患者。年龄20～40岁，身体健康，无其他急慢性疾病。对患者充分告知情况并取得允许后术中开腹时切取皮下脂肪组织。实施例1～3均是制作了一份运输液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)或者多份运输液。实施例1～3的运输液组份见表1。表1上述实施例1～3中的脐带组织运输液的制备方法，具体包括以下步骤：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.94g和1.06g的硫酸庆大霉素，加入40mlPBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlPBS缓冲液，在三次实施例中依次形成5mg/ml、4.7mg/ml和5.3mg/ml的混合溶液；步骤2、量取10ml所述混合溶液，加入到500mlDMEM培养液中，得到运输液；步骤3、对步骤2所得到的运输液用125ml储液瓶分装，每个储液瓶装有50ml的运输液；之后拧紧储液瓶瓶盖，用封口膜进行封口，再装入自封袋，最后装入真空封口袋中，进行真空封口；步骤4、将分装、封口后的运输液放置于-20℃的环境下保存。将脂肪组织保存于上述脂肪组织运输液中的方法是：步骤A、将置于-20℃的温度下保存的运输液解冻至4℃。步骤B、将手术中取出的脂肪组织，离体后立刻置于4℃的脂肪运输液中保存。步骤C、对装有脂肪组织的运输液降温保存于4℃环境的冷链运输箱中模拟运输过程。步骤D、将步骤C处理后的脂肪组织取出、培养，观察脂肪组织的培养情况。根据以上保存方法，设置一对照例如下：对照例1：制备对照例1的样品：步骤A、取四组，每组100份运输液，之后将置于-20℃的温度下保存的运输液解冻至4℃。步骤B、将手术中取出的脂肪组织，离体后立刻置于4℃的脂肪运输液中保存。步骤C、将保存的脂肪组织，分为四组；每组包括100份。之后将其中三组溶液分别置于步骤A中得到的4℃的运输液中，另外一组置于DMED培养液中。步骤D、对装有脂肪组织的运输液4℃冷链运输箱中模拟运输过程，保存5个小时。步骤E、将步骤D处理后的脂肪组织取出、培养，观察脂肪组织细胞的培养情况，计数活细胞比例。对照例1的结果见表2：表2DMEM培养液实施例1运输液实施例2运输液实施例3运输液运输总数100100100100成活总数50979293成活率50％97％92％93％如表2所示，脂肪组织在运输液中保存之后，其结果均比在DMEM培养液中保存的存活率高。其中实施例1中的条件为最优的配置方法。实施例4～6均是制作了一份运输液，也可以根据比例制作不到一份(如半份、四分之一份等)或者多份运输液。实施例4～6的运输液组份见表3。表3上述实施例4～6中的脐带组织运输液的制备方法，具体包括以下步骤：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，按照实施例的顺序，在三次实施例中分别称取1g、0.98g和1.02g的链霉素，加入40mlDMEM培养液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过滤，再将其加入160mlDMEM培养液，在三次实施例中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂肪组织运输液，其特征在于，每份运输液包括：DMEM培养液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。

【技术特征摘要】
1.一种脂肪组织运输液，其特征在于，每份运输液包括：DMEM培养液：50ml；抗生素与PBS缓冲液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.7～5.3mg/ml。2.根据权利要求1所述的脂肪组织运输液，其特征在于：每份运输液包括：PBS缓冲液：50ml；抗生素与DMEM培养液的混合溶液：1ml；所述混合溶液中抗生素的浓度为4.9～5.1mg/ml。3.根据权利要求1或者2所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述抗生素为氨基糖苷类抗生素。4.根据权利要求3所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为链霉素、庆大霉素或者卡那霉素。5.如权利要求4所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述氨基糖苷类抗生素为庆大霉素。6.如权利要求5所述的脂肪组织运输液，其特征在于：所述庆大霉素为庆大霉素的硫酸盐制剂。7.根据权利要求1所述的脂肪组织运输液的制备方法，其特征在于包括：步骤1、制备抗生素与PBS缓冲液的混合溶液；对于每份混合溶液，称取0.94g～1.06g抗生素，加入40mlPBS缓冲液中充分溶解；之后用0.22μm滤器过...

【专利技术属性】
技术研发人员：焦阳，王铁，朱迪·德瓦库玛，杨丽华，李靖，
申请(专利权)人：江苏瑞思坦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32