本发明专利技术提供了一株新分离的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106，该菌具有显著的益生性，能显著抑制大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella sp.)、嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila))等病原菌的生长繁殖，具有良好的抑菌性。
A Rhodopseudomonas palustris HEW-GJ106 strain and its application
The invention provides a newly isolated Rhodopseudomonas palustris HEW GJ106, which has remarkable probiotics and can significantly inhibit the growth and reproduction of pathogenic bacteria such as Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Salmonella sp., Aeromonas hydrophila, etc., and has good performance. Bacteriostatic.
【技术实现步骤摘要】
一株沼泽红假单胞菌HEW-GJ106及其应用
本专利技术涉及光合细菌，特别涉及一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106及其应用。
技术介绍
饲料中添加抗生素能够抵抗疾病，促进动物的生长，加快集约化畜牧业的发展。但是随着人们对绿色、安全和环保理念的不断加强和对健康程度的不断重视，抗生素添加剂在给人们带来巨大经济利益的同时其负面效应也逐渐凸显，最典型的特征就是抗生素引起的耐药性、内源性感染、二重感染以及药物残留，这些对养殖业、饲料工业和动物带来严重威胁，进而通过食物链危及人类健康。因此，限制乃至禁止饲料行业和养殖业使用抗生素的呼声越来越高，研究和开发新的抗生素替代品刻不容缓。近年来，益生菌因其安全、无毒、无残留、不诱发耐药性且对动物生长具有显著作用而被作为抗生素替代品的首要选择。乳酸杆菌是益生菌中的主要菌种，它是动物消化道栖生微生物，在防治胃肠道感染、调节免疫功能和调节肠道的微生物菌群中具有较好作用，是一种很有前途的益生菌生产菌种。目前，光合细菌类产品的开发利用已成为我国饲料行业发展的一个新趋势，但也存在一些需要解决的问题。沼泽红假单胞菌是一种广泛存在于自然界中的光合细菌，不仅能够净化水质，还含有丰富的营养，可以作为水产动物的饵料添加剂，同事能够提高水产动物的生长性能、提高动物免疫力等，引起国内外学者的关注，但沼泽红假单胞菌一般生长周期长，7天以上，且在培养过程中容易老化，需要经常更新菌种，另外，发酵培养基的配方比较复杂，需要碳源、氮源、磷源、维生素、微量元素等营养成分，实际配置过程繁琐，难以有效的推广应用，满足不了养殖业生产上的需求。现有的很多沼泽红假单胞菌对养殖池塘的有机物的将借力不强，会导致其使用量加倍，增加养殖成本，制约沼泽红假单胞菌的生产。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的提供一株繁殖速度快、既能提高动物生产性能又能改善水质的益生性更强的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106，以克服现有沼泽红假单胞菌的缺陷。为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106是从河北某水产养殖场的养殖水底泥中分离的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106。本专利技术提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106，已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCCNO.17021，分类命名为沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)。本专利技术还提供了上述沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的培养方法，包括以下步骤：1)将-20℃冷冻保存的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下于光合细菌培养基上划线，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d(优选为30℃，光照强度为3500LX，培养4d)，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取单菌落于种子培养基中，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d(优选为30℃，光照强度为3500LX，培养4d)，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到4.2×108-1.0×1010CFU/mL；2)取步骤1)得到的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于二级发酵培养基，进行二级发酵培养；3)将步骤2)得到的二级发酵培养液接种于三级发酵培养基，进行三级发酵培养，得HEW-GJ106菌株发酵液。进一步地，其中所述光合细菌培养基按重量百分比计由下述组分组成：碳酸氢钠0.1-2％；七水硫酸镁0.01-0.1％；硫酸铵0.04-1％；磷酸氢二钾0.01-0.2％；氯化钠0.01-0.3％；乙酸钠0.05-2％；酵母粉0.05-1％；琼脂0.8-2％；余量为水，pH6.0-8.0。优选为：碳酸氢钠0.5％；七水硫酸镁0.05％；硫酸铵0.1％；磷酸氢二钾0.05％；氯化钠0.02％；乙酸钠0.5％；酵母粉0.15％；琼脂1.5％；余量为水，pH7.0±0.2。进一步地，其中所述种子培养基按重量百分比计由下述组分组成：胰蛋白胨0.05-1.0％；酵母提取物0.05-1.0％；乙酸钠0.05-1.0％；丙酸钠0.1-1.0％；七水硫酸镁0.01-0.5％；无水氯化钙0.01-0.1％；氯化铵0.02-0.2％；磷酸氢二钾0.05-0.5％；氯化镁0.01-0.2％；碳酸氢钠0.1-1.0％；氯化钠0.05-0.5％；余量为水，pH7.0±0.2；优选为：胰蛋白胨0.5％；酵母提取物0.15％；乙酸钠0.6％；丙酸钠0.4％；七水硫酸镁0.03％；无水氯化钙0.04％；氯化铵0.06％；磷酸氢二钾0.05％；氯化镁0.03％；碳酸氢钠0.5％；氯化钠0.08％；余量为水，pH7.0±0.2。进一步地，其中所述二级和三级发酵培养基按重量百分比计均由下述组分组成：蛋白胨0.02-1.0％；酵母膏0.02-1.0％；乙酸钠0.02-1.0％；硫酸铵0.01-0.5％；氯化钙0.01-0.1％；磷酸氢二钾0.01-0.2％；氯化镁0.01-01％；氯化铵0.01-0.2％；余量为水，pH7.0±0.2；优选为：蛋白胨0.2％；酵母膏0.2％；乙酸钠0.8％；硫酸铵0.05％；氯化钙0.02％；磷酸氢二钾0.06％；氯化镁0.06％；氯化铵0.04％；余量为水；pH7.0±0.2。进一步地，其中所述二级发酵和三级发酵的条件均为：发酵温度25-37℃，装液量40-80％，pH值5.5-8.5，光照强度1500-5000LX，发酵时间72-120h；优选为：发酵温度为30℃，装液量75％，pH值7.2，光照强度4000LX，发酵时间90h。本专利技术提供的沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106具有以下微生物学特征：沼泽红假单胞菌HEW-GJ106是革兰氏阴性菌，在光合细菌培养基上生长迅速，30℃光照培养4d形成的菌落较小，呈红色、圆形、边缘整齐且表面光滑、湿润、直径0.1mm-1.0mm，菌落形态如图1，显微镜下菌体呈杆状，稍有弯曲，厌氧或微氧环境下生长良好，经革兰氏染色后菌株形态如图2；沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的生长温度：4℃-45℃；最适pH值为4-10；光照强度：1000-5000LX。沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的最适生长温度：25℃-35℃；最适pH值为5.5-8.5；最适光照强度：2500-4000LX。本专利技术沼泽红假单胞菌HEW-GJ106具有显著的益生性，可有效抑制大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、沙门氏菌(Salmonellasp.)嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)的生长繁殖，可有效维持动物肠道菌群平衡，改善肠道性能，提高动物生产性能。本专利技术沼泽红假本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)HEW‑GJ106，已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.17021。
【技术特征摘要】
1.一株沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)HEW-GJ106，已于2018年12月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.17021。2.权利要求1所述的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将-20℃冷冻保存的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106解冻后，在无菌条件下于光合细菌培养基上划线，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106单菌落，挑取单菌落于种子培养基中，20-40℃，光照强度为1500-5000LX，培养3-6d，获得沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液，活性达到4.2×108-1.0×1010CFU/mL；2)取步骤1)得到的沼泽红假单胞菌HEW-GJ106种子液接种于二级发酵培养基，进行二级发酵培养；3)将步骤2)得到的二级发酵培养液接种于三级发酵培养基，进行三级发酵培养，得HEW-GJ106菌株发酵液。3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述光合细菌培养基按重量百分比计由下述组分组成：碳酸氢钠0.1-2％；七水硫酸镁0.01-0.1％；硫酸铵0.04-1％；磷酸氢二钾0.01-0.2％；氯化钠0.01-0.3％；乙酸钠0.05-2％；酵母粉0.05-1％，琼脂0.8-2％；余量为水，pH6.0-8.0。4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述种子培养基按重量百分比计由下述组分组成：胰蛋白胨0.05-1....
【专利技术属性】
技术研发人员：李雪平，李成，印遇龙，
申请(专利权)人：北京好实沃生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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