一种原料药中DBU的检测方法技术

本发明专利技术具体涉及一种原料药中DBU的检测方法，包括以下内容：1)取DBU制备得到对照品溶液；2)取原料药样品制备得到供试品溶液；3)采用高效液相色谱法进行检测。本发明专利技术采用高效液相色谱法检测该方法检测灵敏度高，检测限为0.02μg/ml(S/N约5.1)，定量限为0.04μg/ml(S/N约13.1)，可用于低浓度的DBU的检测。同时，该方法的线性范围广，在定量限～限度浓度的200％范围内(0.04μg/ml‑0.4μg/ml)DBU的峰面积和浓度呈现良好的线性关系，相关系数R为0.9999。

A Method for the Detection of DBU in Raw Material Drugs

【技术实现步骤摘要】
一种原料药中DBU的检测方法
本专利技术涉及检测方法领域，特别是涉及一种原料药中DBU的检测方法。
技术介绍
DBU，中文名：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯，化学式：C9H16N2，一种多功能的碱性试剂或催化剂，易溶于水、乙醇，具有很强的碱性，在异构、酯化、缩合、消除等反应中得到广泛的应用，且反应的条件温和、副反应少，反应选择性专一、产物转化率高，在化药领域有广泛的应用。基于DBU的广泛应用，在DBU参与反应获得的原料药的纯度检测中，需要对DBU的残留量进行控制。例如枸橼酸托法替布原料工艺中即使用强碱DBU，因而必须对其残留做研究，以保证用药的安全性。然而，对于原料药中的DBU残留量检测这一研究少有文献报道。
技术实现思路
目前对于易挥发性有机溶剂杂质，常用GC常规手段来进行检测，但是我们发现在使用GC方法时，枸橼酸托法替布原料药中的酸根易与强碱DBU成盐，使得DBU在GC进样口出无法气化，导致在GC方法中的DBU回收率不达标或完全不能回收，使得GC方法难以采用。原料药中DBU的限度要求在0.1％，含量低，检测准确性要求高，且鉴于DBU在紫外检测器低波段下有紫外吸收，因此我们开发了便捷的HPLC方法进行DBU的残留分析。为实现本专利技术目的，采用的技术方案为：一种原料药中DBU的检测方法，包括以下内容：1)取DBU制备得到对照品溶液；2)取原料药样品制备得到供试品溶液；3)采用高效液相色谱法进行检测。本专利技术一实施例中，1)或2)中制备过程采用稀释剂稀释制得相应的对照品溶液和供试品溶液，其中供试品不能直接在乙腈水溶液中溶解，故样品配制过程为：加一定量的乙腈后，逐渐滴加水至样品完全溶解，再以水定容。在实际实验过程中发现乙腈浓度大容易出现溶剂效应，实验过程中选用20％乙腈水(v/v)稀释时即出现明显的溶剂效应，基于无溶剂效应，且满足样品能完全溶解的要求，本专利技术选用8-12％乙腈水(v/v)，优选10％乙腈水(v/v)。上述体积百分比的含义为，如10％乙腈水(v/v)指的是100份乙腈水由10体积份乙腈、90体积份水组成。本专利技术一实施例中，3)中，色谱条件包括以下内容：所述色谱柱采用十八烷基键合硅胶为填料；色谱柱优选为亲水型的高强度硅胶基质颗粒色谱柱；色谱柱优选为WatersXselectHSST3色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A为缓冲液，流动相B为有机溶剂；进行梯度洗脱，洗脱程序中起始和结束流动相A和B的体积比为91-93：7-9。本专利技术一实施例中，3)中，检测波长为210-220nm；优选为215nm。本专利技术所述缓冲盐选用磷酸盐，采用磷酸盐作为缓冲盐具有基线好的优点；优选为磷酸二氢钾，浓度选自20mmol/L，在研究过程中发现随着缓冲液的pH值的下降呈酸性峰型逐渐变好，本专利技术选用的pH值为4-5；进一步的，考虑DBU峰型不佳，在缓冲液中添加扫尾剂，发现峰型差和拖尾现象得到改善。其中，所述扫尾剂为三乙胺，加入量为缓冲液体积的0.1％。特别的，加入三乙胺以后再调节pH值。申请人考察了甲醇和乙腈作为有机相，发现选用甲醇作为有机相时出现基线不平的问题，而选用乙腈作为有机相的峰型好。本专利技术一具体实施中，3)中，3min起始流动相A和B的体积比为91-93：7-9；5min起始流动相A和B的体积比为87-89:11-13。本专利技术一具体实施例中，所述洗脱程序为：或。本专利技术一实施例中，为了使DBU出峰时间延后，在基线较为平滑段出峰，流动相流速选自0.7-0.9ml/min。优选为0.8ml/min。本专利技术具体的采用以下计算公式计算DBU的含量：其中：A供：供试品中DBU峰面积；F：响应因子，DBU对照品浓度与主峰面积的比值C对/A对；V供：供试品溶液稀释体积，ml；m供：供试品称样量，mg。m供为供试品原料药游离态的重量。当供试品为药学意义上的盐型时，需要将直接称取的该盐型供试品重量折算为其对应的游离态的重量。例如在对于枸橼酸托法替布原料药进行检测并计算DBU含量时：枸橼酸托法替布的相对分子质量为504.5，托法替布的游离碱相对分子质量为312.377，故需要以换算因子1.615进行折算，也即当直接称取的枸橼酸托法替布重量为1.615mg时，实际折算后m供应为1mg。本专利技术一实施例中，所述色谱柱耐用柱温小于等于45℃；优选为35℃。研究发现DBU易溶于水且极性大，因此本专利技术选用的色谱柱为耐受纯水相的色谱柱；具体的本专利技术优选为WatersXSelectHSST3，3.5μm，4.6×150mm。本专利技术中DBU含量的计算，考虑到DBU购买方便、易得，且此方法只需控制供试品中DBU含量，本专利技术使用外标法进行计算。本专利技术所提供的检测方法针对DBU的特性开发，在本专利技术的技术构思下，本领域技术人员可针对特定的原料药做方法的适应性细化调整，以普遍适用于多种原料药中DBU的检测。根据本专利技术的技术构思精神，本专利技术的检测方法尤其适用于含有或可能含有酸根的原料药中DBU的检测，例如枸橼酸托法替布原料药。本专利技术有益效果：一、本专利技术采用高效液相色谱法检测该方法检测灵敏度高，检测限为0.02μg/ml(S/N约5.1)，定量限为0.04μg/ml(S/N约13.1)，可用于低浓度的DBU的检测。同时，该方法的线性范围广，在定量限～限度浓度的200％范围内(0.04-0.4μg/ml)DBU的峰面积和浓度呈现良好的线性关系，相关系数R为0.9999。二、本专利技术方法的准确度良好，50％、100％和150％三个水平加标供试品溶液中DBU的加标回收率均在90.0％-110.0％之间，结果可靠；且溶液稳定性好，连续12小时进样对照品溶液和加标供试品溶液，DBU的峰面积RSD分别为0.7％和为1.2％。该方法可实现本品中DBU的准确定量。附图说明图1pH7.0下典型色谱图；图2pH6.0下典型色谱图；图3pH5.0下典型色谱图；图4pH4.0下典型色谱图；图5有机溶剂筛选叠图；图6稀释剂筛选叠图；图7专属性叠图；图8检测限和定量限叠图；图9DBU线性图；图10是本专利技术应用例中DBU对照品溶液的高效液相色谱图；图11是本专利技术应用例中供试品溶液的高效液相色谱图。具体实施方式本专利技术具体实施方式中使用的原料药为自制药，设备均为已知产品，通过购买市售产品获得，详细如下：1、仪器设备：2、试剂与样品：本申请实验过程如下：1、限度的制定DBU(全名：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯)无基因毒性警示结构，且其NOAEL值较高，为120mg/kg/day,拟按照一般杂质控制，限度定为0.10％作为后续方法开发的参考基础。2、分析方法的开发与建立2.1色谱柱的筛选方法开始初期，考虑到DBU易溶于水且极性大的特点，选择了可耐受100％水相的WatersXselectHSST3(3.5μm，4.6×150mm)色谱柱来进行分析方法开发。2.2流动相pH的筛选方法开发初期，考虑到DBU峰响应的问题，暂时将DBU的浓度定为2μg/ml，进行了方法开发。表1流动相pH值筛选结果考虑到DBU峰型不佳，拟在缓冲盐中添加扫尾剂三乙胺，观察峰型是否改善。同时，为了使DBU延后出峰(在相对平缓段出峰)，将流速降低为0.8ml/min。表2流动相ApH值筛选结果2.3洗脱梯度的筛本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种原料药中DBU的检测方法，其特征在于，包括以下内容：1)取DBU制备得到对照品溶液；2)取样品制备得到供试品溶液；3)采用高效液相色谱法进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种原料药中DBU的检测方法，其特征在于，包括以下内容：1)取DBU制备得到对照品溶液；2)取样品制备得到供试品溶液；3)采用高效液相色谱法进行检测。2.根据权利要求1所述原料药中DBU的检测方法，其特征在于：1)或2)中制备过程使用稀释剂进行调配，所述稀释剂为8-12％v/v乙腈水；优选的，2)中，制备供试品溶液时先加乙腈后，逐滴加水至样品完全溶解，再以水定容。3.根据权利要求1所述原料药中DBU的检测方法，其特征在于，色谱条件包括以下内容：色谱柱采用十八烷基键合硅胶为填料；色谱柱优选为亲水型的高强度硅胶基质颗粒色谱柱；色谱柱优选为WatersXselectHSST3色谱柱；流动相包括流动相A和流动相B，其中流动相A为含扫尾剂的缓冲盐溶液，流动相B为有机溶剂；进行梯度洗脱，洗脱程序中起始流动相A和B的体积比为91-93：7-9。4.根据权利要求3所述原料药中DBU的检测方法，其特征在于：3)中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，陈礼莉，张永红，苏忠海，
申请(专利权)人：成都倍特药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51