食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术提供了食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法，所述检测试剂盒包括邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，包被有抗原的固相载体，抗试剂，酶标记物，显色液，终止液，浓缩洗涤液，复溶液和净化剂。检测方法包括样品前处理步骤和检测步骤。本发明专利技术可以直接检测食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯并且检测设备简单、检测灵敏度高、成本低、操作便捷、携带方便、可实现产业化生产。

Detection kit and method of dibutyl phthalate in edible oil and greasy food

The invention provides a detection kit and a detection method for dibutyl phthalate in edible oil and greasy food. The detection kit comprises a standard solution of dibutyl phthalate, a solid carrier coated with antigen, an anti-reagent, an enzyme marker, a chromogenic solution, a terminating solution, a concentrated detergent, a compound solution and a purifier. The detection method includes sample pretreatment and detection steps. The invention can directly detect dibutyl phthalate in edible oil and greasy food, and the detection equipment is simple, the detection sensitivity is high, the cost is low, the operation is convenient, the carrying is convenient, and the industrialized production can be realized.

【技术实现步骤摘要】
食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法
本专利技术属于检测试剂盒领域，尤其是涉及食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
食用油及含脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的分析方法有液相色谱法、气相色谱法、气质联用法等。这些方法虽然具有检测精度高、检测限低、重复性好的优点，但是也存在设备昂贵、操作复杂、不适合快速检测且依赖专业技术人员等问题，不利于基层质检部门作为大面积初筛、不利于现场快速检测和监督。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨在提出食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法，以解决上述问题。为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：一种食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，包括邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，固相载体，抗试剂，酶标记物，显色液，终止液，浓缩洗涤液，复溶液和净化剂；所述的抗试剂浓度为0.05mg/L-4mg/L；所述的酶标记物的浓度为0.2mg/L-2mg/L；所述的固相载体的抗原包被浓度为0.05mg/L-4mg/L；所述复溶液为体积比为15％－50％的甲醇水溶液、体积比为15％－50％的乙醇水溶液、质量体积比为0.05％-1％的吐温20、质量体积比为0.05％-1％的吐温80、质量体积比为0.05％-1％的聚氧乙烯月桂醚、质量体积比为0.05％-1％的曲拉通X-100中的一种或多种混合的水溶液；所述净化剂为C18填料、N-丙基乙二胺、弗罗里硅土、聚苯乙烯或尼龙6的一种或多种混合的粉末或细颗粒。优选的，所述的邻苯二甲酸二丁酯标准溶液的浓度分别为0mg/kg、0.03mg/kg、0.09mg/kg、0.27mg/kg、0.81mg/kg、2.43mg/kg。优选的，所述固相载体由微孔板组成，微孔板由邻苯二甲酸二丁酯完全抗原包被；所述邻苯二甲酸二丁酯完全抗原由邻苯二甲酸二丁酯半抗原与偶联蛋白偶联所得；所述偶联蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、鼠血清蛋白、多聚赖氨酸、兔血清蛋白、人血清蛋白或纤维蛋白原；所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原由4-硝基邻苯二甲酸酐与无水正丁醇、锌粉反应制得，分子结构式为：所述抗试剂由邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体构成；所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体为邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体或邻苯二甲酸二丁酯多克隆抗体，所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体为羊抗鼠抗体或羊抗兔抗体。优选的，所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，显色液为过氧化脲和四甲基联苯胺的混合液，终止液为8wt％－20wt％的盐酸或硫酸溶液，所述的过氧化脲的浓度为0.1wt％-0.3wt％，四甲基联苯胺的浓度为0.04wt％-0.06wt％；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色液为2mmol/L-6mmol/L对硝基苯磷酸二钠溶液，终止液为0.1mol/L－1mol/L的氢氧化钠溶液。优选的，所述浓缩洗涤液为0.05mol/L－0.2mol/L的磷酸盐缓冲液和重量体积比为0.5％－1％的吐温20的混合溶液，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.6－7.2。一种用所述试剂盒进行检测的检测方法，其特征在于：包括样品前处理步骤和检测步骤，所述的样品前处理步骤包括如下步骤：1)向样品中加入色谱纯甲醇，振荡离心后分离上清液和下层液；2)向1)中下层液中继续加入色谱纯甲醇，振荡离心后取上清液；3)将1)和2)中的上清液混匀后加入水，再加入净化剂，振荡离心取上清液；4)向3)中上清液加入色谱纯正己烷振荡离心后取上清液，用氮气吹干后加入复溶液溶解后待测；所述的检测步骤包括如下步骤：1)标记：将待测样品和标准品对应微孔按序编号，每个待测样品和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样品孔所在的位置；2)加标准样品和待测样品：将标准样品和待测样品加到相应的微孔中，每孔加入等量的抗试剂和酶标物混匀，用盖板膜盖板后37℃恒温培养箱中反应20-40min；3)洗板：揭开盖板膜，将孔内液体甩干，将浓缩洗涤液稀释10倍即为洗涤工作液，加入洗涤工作液250-350μL/孔，充分洗涤4-6次，每次间隔10-60s，用吸水纸拍干；4)加显色液：每孔加入显色液80-120μL，用盖板膜盖板后置37℃恒温培养箱反应10min；5)加终止液：加入终止液40-60μL/孔，轻轻振荡混匀；6)测试：设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值；以标准品百分吸光率为纵坐标，以邻苯二甲酸二丁酯标准品浓度(mg/kg)的半对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样品的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样品所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样品中邻苯二甲酸二丁酯实际量。优选的，所述的前处理步骤1)和前处理步骤2)中均为涡旋振荡3－10min、3000－5000rpm离心2－10min；所述的前处理步骤3)中振荡5－15min，3000－5000rpm离心3－10min；净化剂使用量0.2-1g，加水量为总体积的0％-50％；所述的前处理步骤4)中振荡2－10min，1000－3000rpm离心2－10min。优选的，所述的前处理步骤1)和前处理步骤2)中均为涡旋振荡5min、4000rpm离心8min；所述的步骤3)中振荡10min，4000rpm离心5min；净化剂使用量0.4g，加水量为总体积的33％；所述的前处理步骤4)中振荡5min，2000rpm离心5min。优选的，所述的检测步骤2)中用盖板膜盖板后37℃恒温培养箱中反应30min。优选的，所述的检测步骤3)中用洗涤工作液300μL/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s。优选的，所述的检测步骤4)中每孔加入显色液100μL。优选的，所述的检测步骤5)中加入终止液50μL/孔。优选的，所述的样品为食用油或含油脂食品。所述的试剂盒或用所述制备方法得到的试剂盒在食用油或含油脂食品中的应用。本专利技术所述试剂盒的工作原理：本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板上预包被的偶联抗原与样品中邻苯二甲酸二丁酯竞争加入的抗试剂，同时抗试剂与酶标物相结合，经显液剂显色，样品吸光值与其含有的邻苯二甲酸二丁酯成负相关。相对于现有技术，本专利技术所述的食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒和检测方法具有以下优势：(1)可以直接检测食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯。(2)检测设备简单，只需要小型振荡器、离心机、氮吹仪以及酶标仪即可完成定量检测，而现有的气相色谱等大型仪器方法不仅需要振荡器、离心机、氮吹仪，还需要价格昂贵、体积庞大、操作复杂的气相色谱仪、质谱仪等，另外这些方法还需要使用固相萃取柱，不仅成本高，而且操作复杂。(3)成本低，本试剂盒单个样品检测成本最高为150元，批量检测时成本可降至100元以下，而现有的气相色谱法等在不考虑仪器成本的条件下单个样品检测成本至少在300元以上，批量检测时成本不会下降。(4)检测结果准确，与气相色谱－质谱法吻和度在95％以上。(5)检测灵敏度高，食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测出限达0.09mg/kg，可满足现有监控标准。(6)本专利技术操作便捷，携带方便，可随时至现场进行检测。(7)可实现产业化生产，适用于食药监部门、企业、超市等对样品的大量快速筛查，具有更好的商业价值和使用价值。具体实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：包括邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，包被有抗原的固相载体，抗试剂，酶标记物，显色液，终止液，浓缩洗涤液，复溶液和净化剂；所述的抗试剂浓度为0.05mg/L‑4mg/L；所述的酶标记物的浓度为0.2mg/L‑2mg/L；所述的固相载体的抗原包被浓度为0.05mg/L‑4mg/L；所述复溶液为体积比为15％－50％的甲醇水溶液、体积比为15％－50％的乙醇水溶液、质量体积比为0.05％‑1％的吐温20、质量体积比为0.05％‑1％的吐温80、质量体积比为0.05％‑1％的聚氧乙烯月桂醚、质量体积比为0.05％‑1％的曲拉通X‑100中的一种或多种混合的水溶液；所述净化剂为C18填料、N‑丙基乙二胺、弗罗里硅土、聚苯乙烯或尼龙6的一种或多种混合的粉末或细颗粒。

【技术特征摘要】
1.食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：包括邻苯二甲酸二丁酯标准溶液，包被有抗原的固相载体，抗试剂，酶标记物，显色液，终止液，浓缩洗涤液，复溶液和净化剂；所述的抗试剂浓度为0.05mg/L-4mg/L；所述的酶标记物的浓度为0.2mg/L-2mg/L；所述的固相载体的抗原包被浓度为0.05mg/L-4mg/L；所述复溶液为体积比为15％－50％的甲醇水溶液、体积比为15％－50％的乙醇水溶液、质量体积比为0.05％-1％的吐温20、质量体积比为0.05％-1％的吐温80、质量体积比为0.05％-1％的聚氧乙烯月桂醚、质量体积比为0.05％-1％的曲拉通X-100中的一种或多种混合的水溶液；所述净化剂为C18填料、N-丙基乙二胺、弗罗里硅土、聚苯乙烯或尼龙6的一种或多种混合的粉末或细颗粒。2.根据权利要求1所述的食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：所述的邻苯二甲酸二丁酯标准溶液的浓度分别为0mg/kg、0.03mg/kg、0.09mg/kg、0.27mg/kg、0.81mg/kg、2.43mg/kg。3.根据权利要求1所述的食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：所述固相载体由微孔板组成，微孔板由邻苯二甲酸二丁酯完全抗原包被；所述邻苯二甲酸二丁酯完全抗原由邻苯二甲酸二丁酯半抗原与偶联蛋白偶联所得；所述偶联蛋白为牛血清白蛋白、鸡卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白、鼠血清蛋白、多聚赖氨酸、兔血清蛋白、人血清蛋白或纤维蛋白原；所述邻苯二甲酸二丁酯半抗原由4-硝基邻苯二甲酸酐与无水正丁醇、锌粉反应制得，分子结构式为：所述抗试剂由邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体构成；所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体为邻苯二甲酸二丁酯单克隆抗体或邻苯二甲酸二丁酯多克隆抗体，所述邻苯二甲酸二丁酯特异性抗体为羊抗鼠抗体或羊抗兔抗体。4.根据权利要求1所述的食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酯酶；当标记酶为辣根过氧化物酶时，显色液为过氧化脲和四甲基联苯胺的混合液，终止液为8wt％－20wt％的盐酸或硫酸溶液，所述的过氧化脲的浓度为0.1wt％-0.3wt％，四甲基联苯胺的浓度为0.04wt％-0.06wt％；当标记酶为碱性磷酸酯酶时，显色液为2mmol/L-6mmol/L对硝基苯磷酸二钠溶液，终止液为0.1mol/L－1mol/L的氢氧化钠溶液。5.根据权利要求1所述的食用油及含油脂食品中邻苯二甲酸二丁酯的检测试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为0.05mol/L－0.2mol/L的磷酸盐缓冲液和重量体积比为0.5％－1％的吐温20的混合溶液，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.6－7.2。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓乾民，张翊，孙清，王莉，
申请(专利权)人：北京普赞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11