一种马兜铃酸A和马兜铃酸B标准品的制备方法技术

本发明专利技术涉及分离纯化技术领域，特别涉及一种马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品的制备方法。本发明专利技术以青木香为原料，采用醇提、乙酸乙酯萃取结合制备型高效液相色谱、反向聚合填料吸附手段分离纯化得到马兜铃酸A和马兜铃酸B。经检测，两种产品的HPLC纯度均在99％以上，可作为标准品用于含马兜铃酸A和马兜铃酸B的中药材及其制剂的质量监控。同时，马兜铃酸A标准品的收率为80％，马兜铃酸B标准品的收率为70％。本发明专利技术提供的制备方法制备的马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品纯度高、收率高，工艺简单，成本低，项目产值高，可应用于工业化生产。

A preparation method of aristolochic acid A and aristolochic acid B standard

The invention relates to the technical field of separation and purification, in particular to a preparation method of aristolochic acid A standard and aristolochic acid B standard. Aristolochic acid A and aristolochic acid B are separated and purified by alcohol extraction, ethyl acetate extraction, preparative high performance liquid chromatography and reverse polymeric packing adsorption. The purity of the two products by HPLC was over 99%. They can be used as standard for quality control of Chinese medicines containing aristolochic acid A and aristolochic acid B and their preparations. Meanwhile, the yield of aristolochic acid A was 80%, and that of aristolochic acid B was 70%. The standard products of aristolochic acid A and aristolochic acid B prepared by the preparation method provided by the invention have high purity, high yield, simple process, low cost and high output value, and can be applied to industrial production.

【技术实现步骤摘要】
一种马兜铃酸A和马兜铃酸B标准品的制备方法
本专利技术涉及分离纯化
，尤其涉及一种马兜铃酸A和马兜铃酸B的标准品的制备方法。
技术介绍
马兜铃酸(Aristolochicacids，简称AAs)也被称为马兜铃总酸、增噬力酸或木通甲素，是一类硝基菲羧酸，包括马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃酸C和马兜铃酸D，具有抗癌和抗感染等活性，可用于支气管炎、扁桃体炎、肾炎、前列腺炎等感染性疾病。马兜铃酸天然存在于诸如马兜铃属(Aristolochia)及细辛属(Asarum)等马兜铃科植物中，据有关研究，马兜铃属植物有350多种，在我国传统中草药中，有数十种植物类药材含有马兜铃酸类及马兜铃内酰胺类成分，其中被《中药药典》收录或以往曾由卫生部、国家药品与食品药品监督管理局等批准药用的药材包括马兜铃、关木通、广防己、青木香、天仙藤、寻骨风、朱砂连等，细辛属植物主要有北细辛和华细辛等。目前，马兜铃酸类物质主要用于上述药材以及含有上述药材的中药制剂的质量监控。然而，现有的马兜铃酸A和马兜铃酸B标准品价格及其昂贵，而且纯度也不够，一般在95％左右，直接影响了中药材中马兜铃酸质量控制的全面、系统研究。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种马兜铃酸A和马兜铃酸B的标准品的制备方法。为了实现本专利技术的目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供一种马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品的制备方法，包括如下步骤：取青木香粉碎、醇提，乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，经制备型高效液相色谱纯化，分别得到含马兜铃酸A、马兜铃酸B的纯品溶液；分别取所述纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥后，得到马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品；所述制备型高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05-0.2％的酸溶液为流动相B，梯度洗脱。青木香，为马兜铃科植物马兜铃AristolochiadebilisSieb.etZucc.的干燥根，其主要成分为马兜铃酮、马兜铃酸、尿囊素、青木香酸、木兰花碱等。青木香作为一种中药药材，辛苦，寒，入肺、胃经。《唐本草》：主积聚。诸毒热肿、蛇毒，水摩为泥封之，日三、四；疗疔肿大效。《草木便方》：发表，除风。主治风湿瘫痪，腰脚疼痛，跌打损伤；胸腹胀痛，痧症，肠炎下痢，高血压，疝气，蛇咬毒，痈肿，疔疮，皮肤瘙痒或湿烂等。本专利技术以青木香为原料，采用醇提、乙酸乙酯萃取结合制备型高效液相色谱、反向聚合填料吸附手段分离纯化得到马兜铃酸A和马兜铃酸B。经检测，两种产品HPLC的纯度均在99％以上，可作为标准品用于含马兜铃酸A和马兜铃酸B的中药材及其制剂的质量监控。经计算，马兜铃酸A标准品的收率为80％，马兜铃酸B标准品的收率为70％。本专利技术提供的制备方法制备的马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品纯度高、收率高，工艺简单，成本低，项目产值高，可应用于工业化生产。在一些实施方案中，所述醇提为用体积分数为50％-100％的甲醇或体积分数为50％-100％的乙醇进行提取，所述醇提的方法为回流提取、超声提取或渗漉提取；所述醇提的次数为3-6次，每次提取的时间为1-2小时。在一些实施方案中，乙酸乙酯萃取的次数为3-6次，每次萃取的时间为20～30min。在一些实施方案中，在所述醇提之后、所述乙酸乙酯萃取之前还包括减压浓缩的步骤，所述减压浓缩的温度为50-70℃。本专利技术收集乙酸乙酯层后还包括对乙酸乙酯层进行浓缩至浸膏的步骤。然后采用制备型高效液相色谱对浓缩后的浸膏进行纯化，分别得到含马兜铃酸A、马兜铃酸B的纯品溶液。其中，制备型高效液相色谱中：酸溶液为甲酸、乙酸或磷酸的水溶液。等度洗脱程序为0～35min，乙腈体积百分数为50～70％。检测波长为260nm或315nm。流动相的流速为1.0mL/min。在一些具体实施方案中，等度洗脱程序为0～35min，乙腈体积百分数为60％。高效液相色谱采用的色谱柱为AgilentC18，尺寸为100cm×(10-15)cm，10-50μm；所述色谱柱的柱温为25℃。得到含马兜铃酸A、马兜铃酸B的纯品溶液后，分别将含马兜铃酸A、马兜铃酸B的纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥，得马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品。在一些具体实施方案中，取含马兜铃酸A的纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥，得马兜铃酸A标准品。在另一些具体实施方案中，取含马兜铃酸B的纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥，得马兜铃酸B标准品。在一些实施方案中，所述纯品溶液减压浓缩的温度为50-70℃。在一些实施方案中，所述反向聚合填料包括大孔树脂AB-8、大孔树脂D-101、聚酰胺或NM系列色谱填料。本专利技术提供的制备马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品的制备方法包括如下步骤：取青木香粉碎、醇提，乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，经制备型高效液相色谱纯化，分别得到含马兜铃酸A、马兜铃酸B的纯品溶液；分别取所述纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥后，得到马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品；所述制备型高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05-0.2％的酸溶液为流动相B，等度洗脱。本专利技术制备得到的产品经核磁共振鉴定为马兜铃酸A和马兜铃酸B，HPLC纯度均在99％以上，因此可作为标准品用于含马兜铃酸A和马兜铃酸B的中药材及其制剂的质量监控。同时，经计算马兜铃酸A标准品的收率为80％，马兜铃酸B标准品的收率为70％。该方法制备的马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品纯度高、收率高，工艺简单，成本低，项目产值高，可应用于工业化生产。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示本专利技术实施例1中乙酸乙酯层浓缩浸膏在线制备检测图谱；图2示本专利技术实施例1制备的马兜铃酸A的核磁共振图谱；图3示本专利技术实施例1制备的马兜铃酸B的核磁共振图谱；图4示本专利技术实施例1制备的马兜铃酸A的HPLC图谱；图5示本专利技术实施例1制备的马兜铃酸B的HPLC图谱。具体实施方式本专利技术公开了一种马兜铃酸A和马兜铃酸B的标准品的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。对所公开的实施例的说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本专利技术。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本专利技术的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本专利技术将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：实施例1本专利技术制备方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取青木香粉碎、醇提，乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，经制备型高效液相色谱纯化，得到含马兜铃酸A的纯品溶液和含马兜铃酸B的纯品溶液；分别取所述纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90‑95％醇解析，解析液浓缩、干燥后，得到马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品；所述制备型高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05‑0.2％的酸溶液为流动相B，等度洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：取青木香粉碎、醇提，乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯层，经制备型高效液相色谱纯化，得到含马兜铃酸A的纯品溶液和含马兜铃酸B的纯品溶液；分别取所述纯品溶液依次进行减压浓缩，上反向聚合填料吸附，90-95％醇解析，解析液浓缩、干燥后，得到马兜铃酸A标准品和马兜铃酸B标准品；所述制备型高效液相色谱的色谱条件为：以乙腈为流动相A，以体积分数为0.05-0.2％的酸溶液为流动相B，等度洗脱。2.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，所述酸溶液为甲酸或磷酸的水溶液。3.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，所述等度洗脱程序为0～35min，乙腈体积为50～70％。4.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，所述制备型高效液相色谱的检测波长为260nm或315nm。5.根据权利要1所述的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：董维珍，常建红，寇俊闯，
申请(专利权)人：成都瑞芬思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51