高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方法及用途技术

本申请提供一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs‑cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中该试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，该试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，该磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠。该试剂盒还可包括H2O2溶液和碱溶液。本申请还提供了该试剂盒的制备方法和用途。本申请的试剂盒能对cTnI抗原的多个表位进行识别，大大提高了心肌肌钙蛋白I化学发光免疫检测试剂盒的分析灵敏度和精密度。

Chemiluminescence Immunoassay Kit for High Sensitivity Cardiac Troponin I Magnetic Particles, Preparation Method and Application

This application provides a high-sensitivity cardiac troponin I (hs_cTnI) magnetic particle chemiluminescence immunoassay kit, including reagent R1, reagent R2, magnetic particle working fluid and cTnI antigen calibration product. The reagent R1 contains biotin-labeled anti-cTnI polyclonal antibody, and the reagent R2 contains two acridine ester-labeled anti-cTnI monoclonal antibodies for different cTnI antigen epitopes. The working fluid contains streptavidin beads. The kit can also include a solution of hydrogen peroxide and an alkali solution. The application also provides the preparation method and application of the kit. The application kit can identify multiple epitopes of cTnI antigen, and greatly improve the sensitivity and precision of cardiac troponin I chemiluminescence immunoassay kit.

【技术实现步骤摘要】
高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒、制备方法及用途
本专利技术涉及医疗检测
，特别是磁微粒化学发光免疫检测
，具体涉及一种高敏心肌肌钙蛋白I磁微粒化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法和用途。
技术介绍
肌钙蛋白(troponin,Tn)复合物由肌钙蛋白I、肌钙蛋白T、肌钙蛋白C组成，能调节肌肉收缩。心肌肌钙蛋白I(cardiactroponinI,cTnI)是存在于心肌细胞中的一种肌钙蛋白I异构体，具有高度的心肌特异性，可用于鉴别心肌损伤和骨骼肌损伤相关的临床情形。急性心肌梗死(AcuteMyocardialInfarction,AMI)是目前威胁人类生命的主要疾病之一。当心肌梗死或缺血而使心肌细胞受损时，cTnI迅速透过心肌细胞膜进入血液。因此，在发病初期，快速、灵敏且准确地测定人血中的cTnI及其变化趋势，对于急性心肌梗死的诊断和治疗有着重要的临床意义。cTnI作为心肌损伤的首选标志物，目前临床检测常用的方法是化学发光免疫分析法，且目前主要采用磁微粒化学发光法，而发光方式则有酶促化学发光和直接化学发光两种。按照分析灵敏度和精密度的不同，cTnI化学发光免疫分析又可分为传统cTnI化学发光免疫分析和高敏cTnI(hs-cTnI)化学发光免疫分析。传统cTnI化学发光免疫分析的灵敏度为0.04-0.20ng/mL，而高敏化学发光免疫分析的灵敏度高达2.5pg/mL。传统cTnI化学发光免疫分析由于分析灵敏度的限制，在心肌梗死发病后4-6小时之内不能检测出cTnI浓度的变化，作出诊断则通常需要7小时。而高敏cTnI化学发光免疫分析在3-4小时之内即可作出诊断，未来更是可能研发出可在病人心肌梗死发病后1小时内作出诊断的高敏cTnI化学发光免疫分析仪器和试剂，将极大地促进急性心肌梗死的早诊断早治疗，为挽救病人的生命赢得宝贵的时间，降低心肌梗死对病人心脏的永久性损伤。目前，国产仪器和试剂已经占领了传统cTnI化学发光免疫分析领域相当的份额，而在高敏cTnI化学发光免疫分析领域仍然被国外厂家如罗氏、雅培、西门子、贝克曼所垄断，这是因为目前国产cTnI化学发光免疫分析试剂在分析灵敏度和精密度方面与高敏cTnI化学发光免疫分析的要求还有相当的距离。因此，开发研制出国产的分析灵敏度高和精密度高的高敏cTnI化学发光免疫分析试剂极为必要。
技术实现思路
本专利技术旨在提供分析灵敏度高和精密度高的高敏cTnI化学发光免疫分析试剂盒，实现高敏cTnI化学发光免疫分析试剂的进口替代。因此，在一个方面，本专利技术提供一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中该试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；该试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；该磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，该链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。该生物素标记的抗cTnI多克隆抗体作为捕获抗体，该两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体作为标记抗体。在本专利技术的具体实施方案中，试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体和捕获抗体稀释液，生物素标记的抗cTnI多克隆抗体在试剂R1中的浓度为0.4-2μg/mL，捕获抗体稀释液包含10-150mMNa2HPO4、10-150mMKH2PO4、50-200mMNaCl、50-200mMKCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH6.50-8.50。在本专利技术的具体实施方案中，试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体和标记抗体稀释液，两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体在试剂R2中的浓度为0.1-5μg/mL，标记抗体稀释液包含10-150mM2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH6.10-8.20。在本专利技术的具体实施方案中，磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠和磁珠稀释液，链霉亲和素磁珠在磁微粒工作液中的浓度为0.5-1mg/mL，磁珠稀释液包含20-100mMNa2HPO4、20-100mMKH2PO4、50-180mMNaCl、50-180mMKCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.05％-0.1％(v/v)ProClin300、0.05％-0.1％(v/v)Tween-20、1％(v/v)PEG、0.05-0.5％(w/v)酪蛋白，pH7.0-8.50。在本专利技术的优选实施方案中，该试剂盒还包括cTnI抗原校准品。具体地，该cTnI抗原校准品为通过将cTnI抗原加入到含有10-100mMTris-HCl,10-200mMNaCl,10-200mMKCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH6.5-8.5的稀释液中制得的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.08ng/mL、0.1ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL的一系列cTnI抗原溶液。该cTnI抗原校准品用于制作校准曲线，以便对待测样本中的cTnI抗原进行定量检测。在本专利技术的优选实施方案中，该试剂盒还包含H2O2溶液。H2O2溶液的浓度优选为0.1％-1％。H2O2溶液用于在使用该试剂盒的试剂R1、试剂R2和磁微粒工作液与待测样本中的cTnI抗原形成“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物后，加入到磁珠复合物中，并在加入碱溶液使磁珠复合物处于碱性环境后，与磁珠复合物中的吖啶酯发生反应而发光，由此实现待测样本中的cTnI抗原的定量检测。当然，H2O2溶液也可以由本专利技术试剂盒的使用者另外现成配制，因此，H2O2溶液不是本专利技术试剂盒的必需组分，但从方便使用的角度，优选在本专利技术试剂盒中包含H2O2溶液。在本专利技术的优选实施方案中，该试剂盒还包含碱溶液。碱溶液优选为NaOH溶液或者KOH溶液。碱溶液的浓度优选为0.1M-1M。碱溶液用于在使用该试剂盒的试剂R1、试剂R2和磁微粒工作液与待测样本中的cTnI抗原形成“链霉亲和素磁珠-生物素标记的抗cTnI多克隆抗体-待测cTnI抗原-吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体”磁珠复合物并向该磁珠复合物加入H2O2后，加入体系中使该磁珠复合物处于碱性环境，以使H2O2与磁珠复合物中的吖啶酯发生反应而发光，由此实现待测样本中的cTnI抗原的定量检测。当然，碱溶液也可以由本专利技术试剂盒的使用者另外现成配制，因此，碱溶液不是本专利技术试剂盒的必需组分，但从方便使用的角度，优选在本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs‑cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中所述试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；所述试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；所述磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。

【技术特征摘要】
1.一种高敏心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)磁微粒化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2、磁微粒工作液和cTnI抗原校准品，其中所述试剂R1包含生物素标记的抗cTnI多克隆抗体，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体溶于捕获抗体稀释液中；所述试剂R2包含两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体的质量比为1:1，溶于标记抗体稀释液中；所述磁微粒工作液包含链霉亲和素磁珠，所述链霉亲和素磁珠溶于磁珠稀释液中。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的抗cTnI多克隆抗体在所述试剂R1中的浓度为0.4-2μg/mL，所述捕获抗体稀释液包含10-150mMNa2HPO4、10-150mMKH2PO4、50-200mMNaCl、50-200mMKCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH6.50-8.50。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述两株针对不同cTnI抗原表位的吖啶酯标记的抗cTnI单克隆抗体在所述试剂R2中的浓度为0.1-5μg/mL，所述标记抗体稀释液包含10-150mM2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.01-0.2％(v/v)ProClin300、0.05％-0.2％(v/v)Tween-20，pH6.10-8.20。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠在所述磁微粒工作液中的浓度为0.5-1mg/mL，所述磁珠稀释液包含20-100mMNa2HPO4、20-100mMKH2PO4、50-180mMNaCl、50-180mMKCl、1-10mg/mL牛血清白蛋白(BSA)、0.05％-0.1％(v/v)ProClin300、0.05％-0.1％(v/v)Tween-20、1％(v/v)PEG、0.05-0.5％(w/v)酪蛋白，pH7.0-8.50。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述cTnI抗原校准品为通过将cTnI抗原加入到含有10-100mMTris-HCl,10-200mMNaCl,10-200mMKCl,5-50％小牛血清(v/v),0.1-1％ProClin300(v/v),pH6.5-8.5的稀释液中制得的浓度分别为0ng/mL、0.005ng/mL、0.01...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈小茹，肖桥斌，吴向东，周博，
申请(专利权)人：深圳上泰生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44