一种中药组合物的检测方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种中药组合物的检测方法，该中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4‑9份、炒酸枣仁4‑9份、炙淫羊藿4‑9份、熟地黄5‑12份、麸炒白术3‑8份、制远志3‑8份、石菖蒲4‑9份、当归5‑12份、炙甘草1‑5份，所述检测方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198‑208nm；检测人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定，此外，还利用HPLC法测定组合物中有效成分β‑细辛醚淫羊藿苷的含量、鉴定当归，利用TLC法对处方中的熟地黄、炙甘草实现定性鉴别，本发明专利技术所述方法准确度、灵敏度高，检测范围广，实现了对药品质量的有效控制，可作为所述中药组合物和制剂的质量监控方法。

A Method for the Detection of Traditional Chinese Medicine Compositions and Its Application

The invention provides a method for the determination of Chinese medicine compositions, which comprises the following components: ginseng 4 9, fried jujube seed 4 9, fried Epimedium 4 9, cooked Rehmannia 5 12, bran fried Atractylodes macrocephala 3 8, Polygala 3 8, calamus 4 9, Angelica 5, roasted licorice 1 5, and the detection method is octadecyl silane bonded. Silica gel as filler; pure water as mobile phase A, acetonitrile as mobile phase B, gradient elution, detection wavelength: 198 208 nm; detection of ginsenoside Rg1, ginsenoside Re content determination, in addition, the use of HPLC method to determine the content of effective ingredients in the composition of beta asarone icariin, identification of Angelica sinensis, TLC method to achieve qualitative identification of cooked Rehmannia glutinosa, roasted liquorice in the prescription, The method has high accuracy, high sensitivity and wide detection range, realizes effective control of drug quality, and can be used as a quality control method for the Chinese medicine compositions and preparations.

【技术实现步骤摘要】
一种中药组合物的检测方法及其应用
本专利技术涉及中药制剂领域，具体涉及一种中药组合物的检测方法及其应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)，又称为老年性痴呆，是一种进行性发展且不可逆的神经系统退行性疾病。该病主要以记忆障碍、智力衰退、执行功能障碍以及人格和行为改变为临床表现，且起病缓慢或隐匿，发病率高，多见于70岁以上老人，我国约有800万AD患者，年龄＞65岁人群患病率为5％，年龄＞80岁人群高达40％。阿尔茨海默病的病因复杂，总体上是遗传因素、环境因素和生活习惯等多因素作用的结果。痴呆的主要临床症状为记忆力渐近性衰退、认知功能下降，有研究表明，AD的主要病理特征为β淀粉样蛋白异常沉积而形成的老年斑和tau蛋白过度磷酸化导致神经元纤维缠结。痴呆患者早期记忆减退，判断能力下降，对事物认知存在障碍，而到了晚期，患者失去生活自理能力，完全依赖照护者，严重记忆力丧失，有强握、摸索和吸吮等原始反射，最终昏迷，一般死于感染等并发症，这严重影响患者的生活质量，并给家庭带来沉重的经济压力及相应的护理负担。痴呆的具体发病机制目前仍未完全阐明，存在多种假说，包括炎症学说、Aβ毒性学说、tau蛋白异常修饰学说、氧化应激学说、胆碱能损伤学说等，现临床上最为广泛的AD治疗药物是针对胆碱能损伤学说而使用的乙酰胆碱酯酶抑制剂，主要包括他克林衍生物、卡巴拉汀、石杉碱甲等，但治疗范围及效果有限。对于老年痴呆的治疗仍是缺乏有效的预防与治疗手段，因此，低毒、有效且对应多靶点治疗的药物开发一直是老年痴呆症研究的重点方向。近些年来，随着中医药基础理论不断地深入研究及各种实验病理模型的药效学研究，结合临床医师多年的临床实践，证实其临床疗效良好、治疗对应靶点多、治疗范围广，更弥补了化学药疗效不佳、治疗靶点少且存在一定副作用的不足。鉴于中药是一个由多种成分构成的复杂体系，且其成分受多个因素影响，如品种、产地、采收、炮制加工等，但中药中多样性、复杂性的成分是其疗效良好、作用广泛、副作用较小的物质基础，该物质基础长期处于一种模糊、难以全面评价的状态；经多味药味的配伍煎煮后，复方的质量更是无法用明确、有效、合理的指标进行评价，然而中药复方治疗效果与其质量有着直接关系，中药复方质量不良会直接导致治疗效果的不佳，这需要对中药复方进行质量控制以保证疗效的稳定性、可控性。中药质量的控制需要能对全部药效成分进行监控，建立的质量控制体系才能保证用药的有效性、可控性、安全性。因此，建立中医药基础理论特色的现代质量管控体系，解决中药分析的难题，改进现有质量控制方法是当今研究的热点。
技术实现思路
因此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种中药组合物的检测方法及其应用，克服了因中药药味繁多、成分复杂且相互干扰以致不能全面的、清晰地对所述中药组合物的质量进行检测监控的缺陷，提高了所述中药组合物质量的稳定性、一致性和可控性。本专利技术提供了一种中药组合物的检测方法，所述中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4-9份、炒酸枣仁4-9份、炙淫羊藿4-9份、熟地黄5-12份、麸炒白术3-8份、制远志3-8份、石菖蒲4-9份、当归5-12份、炙甘草1-5份；所述中药组合物的检测方法包括如下人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定步骤：A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定供试品溶液的制备：取所述中药组合物，依次经碱液提取、饱和正丁醇萃取、有机酸中和、蒸干和有机试剂溶解，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198-208nm；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。进一步地，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述梯度洗脱程序具体为：0-35min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％；35-60min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％→76％：24％；60-61min，流动相A：流动相B的体积比为76％：24％→5％：95％；61-65min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％；65-66min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％→82％：18％；66-75min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％。优选地，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述碱液为NaOH溶液、KOH溶液、Ca(OH)2溶液、氨水、碳酸钠溶液和碳酸钾溶液中的一种或几种的混合溶液；所述碱液的质量浓度为3-20％；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿和石油醚中的一种；所述有机酸为甲酸、乙酸和丙酸中的一种，所述有机酸的浓度为0.3％-0.5％。进一步地，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述供试品溶液制备的具体步骤为：取所述中药组合物0.5-2g，研细，称定重量，加入3-8wt％NaOH水溶液8-12ml，70-90℃下水浴加热5-10min，加入40-60ml饱和正丁醇，振荡，超声，冷却，离心，取上清液加入0.3-0.5vt％乙酸水溶液1-3ml，70-90℃下水浴蒸干，冷却，残渣加入5-20vt％甲醇溶液溶解，稀释定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。优选地，还包括如下述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴定、淫羊藿苷的含量测定、熟地黄鉴别和甘草鉴别中的至少一种：B、β-细辛醚的含量测定和当归的鉴定供试品溶液的制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取β-细辛醚对照品、藁本内酯对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05-0.2vt％磷酸或0.1-0.3vt％甲酸为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，检测波长：230-350nm。C、淫羊藿苷的含量测定供试品制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，加入有机溶剂提取制成对照品溶液；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05-0.2vt％磷酸溶液或水为流动相B；检测波长250-300nm；测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算；D、熟地黄的鉴别供试品溶液制备：称取所述中药组合物，加入纯水溶解，用正丁醇萃取，静置，弃去正丁醇液，向水层加入无水乙醇，振荡，静置，弃去乙醇液，向沉淀加入甲醇，超声处理，滤过，蒸干滤液，冷却至室温，残渣加甲醇溶液使溶解，即得；对照品溶液的制备：另取水苏糖对照品适量，加有机溶剂制成对照品的溶液；鉴别：照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液和对照品溶液，以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸为展开剂展开，喷以硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰；E、炙甘草的鉴别供试品溶液的制备：取所述中药组合物，先加入醇溶液提取，然后加入水和饱和正丁醇萃取，分取正丁醇液，蒸干正丁醇得残渣，加醇溶液溶解残渣，得供试品溶液；对照品溶液的制备：另取甘草酸铵对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；鉴别：照薄层色谱法试验，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4‑9份、炒酸枣仁4‑9份、炙淫羊藿4‑9份、熟地黄5‑12份、麸炒白术3‑8份、制远志3‑8份、石菖蒲4‑9份、当归5‑12份、炙甘草1‑5份；所述中药组合物的检测方法包括如下人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定步骤：A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定供试品溶液的制备：取所述中药组合物，依次经碱液提取、饱和正丁醇萃取、有机酸中和、蒸干和有机试剂溶解，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198‑208nm；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。

【技术特征摘要】
1.一种中药组合物的检测方法，其特征在于，所述中药组合物包括如下重量份的原料药组成：人参4-9份、炒酸枣仁4-9份、炙淫羊藿4-9份、熟地黄5-12份、麸炒白术3-8份、制远志3-8份、石菖蒲4-9份、当归5-12份、炙甘草1-5份；所述中药组合物的检测方法包括如下人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定步骤：A、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定供试品溶液的制备：取所述中药组合物，依次经碱液提取、饱和正丁醇萃取、有机酸中和、蒸干和有机试剂溶解，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以纯水为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱，检测波长：198-208nm；测定法：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算。2.根据权利要求1所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述梯度洗脱程序具体为：0-35min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％；35-60min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％→76％：24％；60-61min，流动相A：流动相B的体积比为76％：24％→5％：95％；61-65min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％；65-66min，流动相A：流动相B的体积比为5％：95％→82％：18％；66-75min，流动相A：流动相B的体积比为82％：18％。3.根据权利要求1或2所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述碱液为NaOH溶液、KOH溶液、Ca(OH)2溶液、氨水、碳酸钠溶液和碳酸钾溶液中的一种或几种的混合溶液；所述碱液的质量浓度为3-20％；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、正丁醇、氯仿和石油醚中的一种；所述有机酸为甲酸、乙酸和丙酸中的一种，所述有机酸的体积浓度为0.3％-0.5％。4.根据权利要求1-3中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，在所述人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量测定中，所述供试品溶液制备的具体步骤为：取所述中药组合物0.5-2g，研细，称定重量，加入正丁醇饱和的3-8wt％NaOH水溶液8-12ml，60-90℃下水浴加热5-10min，加入40-60ml饱和正丁醇，振荡，超声，冷却，离心，取上清液加入0.3-0.5vt％乙酸水溶液1-3ml，70-90℃下水浴蒸干，冷却，残渣加入5-20vt％甲醇溶液溶解，稀释定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。5.根据权利要求1-4中任一所述的中药组合物的检测方法，其特征在于，还包括如下述β-细辛醚的含量测定和当归的鉴别、淫羊藿苷的含量测定、熟地黄鉴别和甘草鉴别中的至少一种：B、β-细辛醚的含量测定和当归的鉴别供试品溶液的制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取β-细辛醚对照品、藁本内酯对照品，加入有机溶剂制成对照品溶液；色谱条件：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05-0.2vt％磷酸或0.1-0.3vt％甲酸为流动相A，以甲醇为流动相B，梯度洗脱，检测波长：230-350nm。C、淫羊藿苷的含量测定供试品制备：取所述中药组合物，加入有机溶剂提取，得供试品溶液；对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，加入有机溶剂提取制成对照品溶液；色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.05-0.2vt％磷酸溶液或水为流动相B；检测波长250-300nm；测定法：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定并计算；D、熟地黄的鉴别供...

【专利技术属性】
技术研发人员：李萍，肖婷婷，杨华，张蓓，高雯，候譞，
申请(专利权)人：北京中研同仁堂医药研发有限公司，中国药科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11