用于治疗自身免疫疾病的抗体制造技术

提供了新型抗体。提供了结合人LAG‑3的结构域3的单克隆抗体或其结合片段，并具有以下(ii)至(v)中所述的性质中一种或多种，以及(i)至(vi)中所述的性质：(i)具有体外ADCC活性；(ii)以低岩藻糖形式减少体内LAG‑3阳性细胞的数量；(iii)以低岩藻糖形式抑制体内实验性自身免疫性脑脊髓炎；(iv)与人活化的T细胞结合；(v)在所述抗体或其结合片段存在下，人LAG‑3与人II型主要组织相容性复合体分子结合；和(vi)所述抗体或其结合片段的存在允许人LAG‑3发挥人T细胞抑制功能。

Antibodies for the treatment of autoimmune diseases

A new type of antibody was provided. Monoclonal antibodies or their binding fragments binding to domain 3 of human LAG 3 are provided and possess one or more of the properties described in (i i) to (v) and (i) to (v i) as follows: (i) ADCC activity in vitro; (i i) reduction of the number of LAG 3 positive cells in vivo in the form of low fucose; (i i) inhibition of experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo in the form of low fucose (iv) bind to human activated T cells; (v) in the presence of the antibody or its binding fragment, human LAG 3 binds to human type II major histocompatibility complex molecule; and (vi) the presence of the antibody or its binding fragment allows human LAG 3 to exert its inhibitory function on human T cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗自身免疫疾病的抗体
本专利技术涉及抗体，其结合片段，包含抗体或其结合片段的分子，多核苷酸，载体，细胞，用于产生抗体或其结合片段的方法，通过所述产生方法获得的抗体或结合片段，包含抗体或其结合片段的组合物，包含抗体或其结合片段的药物组合物，用于治疗或预防与LAG-3阳性细胞相关的疾病(例如自身免疫疾病)的药物组合物，抗体或其结合片段用于治疗或预防这些疾病的用途，以及治疗这些疾病的方法，所述方法包括施用抗体或其结合片段的步骤。
技术介绍
T淋巴细胞(T细胞)是在免疫反应中起重要作用的细胞，并且因此体内存在具有各种抗原特异性的T细胞，据称其为1000万至100亿个克隆，以处理多种抗原。当抗原侵入体内时，这些巨大的T细胞储库中，只有非常有限数量的抗原特异性克隆增殖并被激活，以通过细胞因子产生和细胞毒性活性等发挥身体防御作用。在自身免疫疾病中，各种病理状况被认为是由对某些自身抗原的异常免疫反应引发的。即使在这种情况下，其他大多数没有这种抗原特异性的克隆也没有增殖并激活，而是保持静止状态。因此，仅选择性去除活化的T细胞可以特异性地抑制免疫，而不影响大多数具有其他抗原特异性的T细胞，并且因此可以是对抗自身免疫疾病、移植物排斥、过敏性疾病等的有用的治疗或预防方法。同时，在主要激活负调节免疫系统的T细胞(如调节性T细胞)的情况下，去除这些细胞可以是针对恶性肿瘤、慢性感染等的有用的治疗或预防方法。LAG-3(CD223)是属于免疫球蛋白超家族的单次跨膜分子，并且已知选择性地在活化的T细胞中表达(非专利文献1)。据报道，在向大鼠同种异体心脏移植模型施用具有针对大鼠LAG-3分子的补体依赖性细胞毒性(CDC)活性的兔抗血清时，移植物中的LAG-3阳性细胞减少，从而使得产生移植物排斥的时期稍微延长(非专利文献2)。还报道，具有与狒狒的交叉反应并表现出抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)活性的抗人LAG-3嵌合抗体A9H12抑制狒狒的迟发型超敏反应，尽管其剂量反应尚不清楚(非专利文献3)，并且制备了其人源化抗体(专利文献2)。已知LAG-3与II型主要组织相容性复合体(或主要组织相容性基因复合物)(MHC)分子结合，从而向T细胞传递一些抑制信号以负调节T细胞功能(非专利文献1)。对于LAG-3与II型MHC分子的结合，LAG-3的四个细胞外免疫球蛋白样结构域之中的N-末端结构域1和2被认为是重要的(非专利文献4)，并且还报道了利用通过PD-1分子等抑制T细胞功能的其他信号，合作展示了这样的通过LAG-3的T细胞功能抑制(非专利文献5)。实际上，近年来已经积极地开发了通过抑制LAG-3的T细胞抑制功能来激活免疫细胞功能以攻击癌细胞的新型癌症治疗方法(非专利文献6和7)。因此，在对自身免疫疾病应用通过ADCC活性等耗尽LAG-3阳性细胞的LAG-3抗体情况下，认为不具有抑制LAG-3固有的T细胞抑制功能的活性的抗体是更理想的，因为没有由于免疫系统的异常激活而使自身免疫疾病更加恶化的风险。在上述具有CDC活性的抗大鼠LAG-3兔抗血清和表现出ADCC活性的抗人LAG-3嵌合抗体A9H12(IMP731：专利文献1和2)中，LAG-3阳性细胞未完全耗尽(非专利文献2和3)，因此假定由于尚未耗尽的剩余T细胞的异常反应而产生副反应以及对自身免疫疾病抑制的负面影响的可能性。引用列表专利文献专利文献1：US2011/0070238A1专利文献2：WO2014/140180[非专利文献]非专利文献1：Triebel,F.,LAG-3:aregulatorofT-cellandDCresponsesanditsuseintherapeuticvaccination.,TrendsImmunol.,Dec.2003;Vol.24(No.12):p.619-22非专利文献2：Haudebourg,T.等人，DepletionofLAG-3positivecellsincardiacallograftrevealstheirroleinrejectionandtolerance.,Transplantation,Dec.2007;Vol.84(No.11):p.1500-06非专利文献3：Poirier,N.等人，Antibody-mediateddepletionoflymphocyte-activationgene-3(LAG-3(+))-activatedTlymphocytespreventsdelayed-typehypersensitivityinnon-humanprimates,Clin.Exp.Immunol.,May2011;Vol.164(No.2):p.265-74非专利文献4：Huard,B.等人，CharacterizationofthemajorhistocompatibilitycomplexclassIIbindingsiteonLAG-3protein,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,May27,1997;Vol.94(No.11):p.5744-49非专利文献5：Okazaki,T.等人，PD-1andLAG-3inhibitoryco-receptorsactsynergisticallytopreventautoimmunityinmice,J.Exp.Med.,Feb.7,2011;Vol.208(No.2):p.395-407非专利文献6：Nguyen,L.T.和Ohashi,P.S.,ClinicalblockadeofPD1andLAG3--potentialmechanismsofaction,Nat.Rev.Immunol.,Jan.2015;Vol.15(No.1):p.45-56非专利文献7：Turnis,M.E.等人，Inhibitoryreceptorsastargetsforcancerimmunotherapy,Eur.J.Immunol.Jul.2015;Vol.45(No.7):p.1892-905非专利文献8：Huard,B.等人，TcellmajorhistocompatibilitycomplexclassIImoleculesdown-regulateCD4+TcellcloneresponsesfollowingLAG-3binding,Eur.J.Immunol.,May1996;Vol.26(No.5):p.1180-06非专利文献9：Macon-Lemaitre,L和Triebel,F,Thenegativeregulatoryfunctionofthelymphocyte-activationgene-3co-receptor(CD223)onhumanTcells,Immunology,Jun.2005;Vol.115(No.2):p.170-08非专利文献10：Li,M.等人，ReconstitutionofhumanFcgammaRIIIcelltypespecificityintransgenicmice,J.Exp.Med.,May1,1996;Vol.183(No.3):p.1259-63非专利文献11：Mill本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单克隆抗体或其结合片段，其结合人LAG‑3的结构域3并具有以下(ii)‑(v)中所述的性质的一种或多种，以及(i)和(vi)中所述的性质：(i) 具有体外ADCC活性；(ii) 以低岩藻糖形式减少体内LAG‑3阳性细胞的数量；(iii) 以低岩藻糖形式抑制体内实验性自身免疫性脑脊髓炎；(iv) 与人活化的T细胞结合；(v) 在所述抗体或其结合片段的存在下，人LAG‑3与II型人主要组织相容性复合体分子结合；和(vi) 所述抗体或其结合片段的存在允许人LAG‑3发挥人T细胞抑制功能。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.09.08 JP 2016-1754911.单克隆抗体或其结合片段，其结合人LAG-3的结构域3并具有以下(ii)-(v)中所述的性质的一种或多种，以及(i)和(vi)中所述的性质：(i)具有体外ADCC活性；(ii)以低岩藻糖形式减少体内LAG-3阳性细胞的数量；(iii)以低岩藻糖形式抑制体内实验性自身免疫性脑脊髓炎；(iv)与人活化的T细胞结合；(v)在所述抗体或其结合片段的存在下，人LAG-3与II型人主要组织相容性复合体分子结合；和(vi)所述抗体或其结合片段的存在允许人LAG-3发挥人T细胞抑制功能。2.根据权利要求1的抗体或其结合片段，其具有(ii)和/或(iii)中所述的性质。3.根据权利要求1或2的抗体或其结合片段，其具有(ii)-(v)中所述的全部性质。4.根据权利要求1-3中任一项的抗体或其结合片段，其为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。5.根据权利要求1-4中任一项的抗体或其结合片段，其包含：轻链和重链，所述轻链包含具有SEQIDNO:50或图65所示的氨基酸序列的CDRL1，具有SEQIDNO:51或图66所示的氨基酸序列的CDRL2，和具有SEQIDNO:52或图67所示的氨基酸序列的CDRL3，和所述重链包含具有SEQIDNO:47或图62所示的氨基酸序列的CDRH1，具有SEQIDNO:48或图63所示的氨基酸序列的CDRH1，和具有SEQIDNO:49或图64所示的氨基酸序列的CDRH3。6.根据权利要求4或5的抗体或其结合片段，其为人源化抗体。7.根据权利要求6的抗体或其结合片段，其包含：重链和轻链，所述重链包含源自SEQIDNO:28或图43所示的氨基酸序列的氨基酸序列，其中对应于68位的氨基酸为Gly或者被Ala取代，并且对应于103位的氨基酸是Asn或被Asp取代，所述轻链包含源自SEQIDNO:32或47所示的氨基酸序列的氨基酸序列，其中对应于21位的氨基酸为Asp或被Asn取代，对应于31位的氨基酸为Leu或被Met取代，对应于33位的氨基酸为Ala或被Ile取代，对应于41位的氨基酸为Ile或被Met取代，对应于58位的氨基酸是Gln或被Lys取代，对应于63位的氨基酸是Ala或被Ser取代，对应于80位的氨基酸为Ser或被Asp取代，对应于85位的氨基酸为Ser或被Gly取代，对应于87位的氨基酸为Ser或被Tyr取代，对应于98位的氨基酸为Leu或取代的对于Val，对应于103位的氨基酸是Phe或被Ala取代，对应于105位的氨基酸是Thr或被Phe取代，对应于124位的氨基酸是Val或被Leu取代，并且对应126位的氨基酸为Ile或被Leu取代。8.根据权利要求6或7的抗体或其结合片段，其包含：轻链可变区氨基酸序列和重链可变区氨基酸序列，所述轻链可变区氨基酸序列包含选自SEQIDNO:32、34、36、38和40的氨基酸序列的氨基酸21至氨基酸129；所述重链可变区氨基酸序列包含选自SEQIDNO:28和30的氨基酸序列的氨基酸20至氨基酸140。9.根据权利要求6-8中任一项的抗体或其结合片段，其包含：轻链可变区氨基酸序列和重链可变区氨基酸序列，所述轻链可变区氨基酸序列包含选自SEQIDNO:32、34、36、38和40的氨基酸序列的氨基酸21至氨基酸234；所述重链可变区氨基酸序列包含选自SEQIDNO:28和30的氨基酸序列的氨基酸20至氨基酸470。10.根据权利要求6-9中任一项的抗体或其结合片段，其选自下述[i]-[x]：[i]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:30(图45)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:34(图49)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[ii]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:28(图43)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:32(图47)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[iii]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:30(图45)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:36(图51)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[iv]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:28(图43)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:34(图49)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[v]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:28(图43)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:36(图51)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[vi]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:28(图43)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:38(图53)的氨基酸位置21至234组成的氨基酸序列；[vii]抗体或其结合片段，其包含重链和轻链，所述重链具有由SEQIDNO:28(图43)的氨基酸位置20至470组成的氨基酸序列；所述轻链具有由SEQIDNO:40(图55)...

【专利技术属性】
技术研发人员：六笠隆太，中村健介，村松澄江，槙田直之，
申请(专利权)人：第一三共株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP