补体抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及多结构域多肽，其包含(i)第一含补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其是补体激活的经典和旁路途径的转化酶的转化酶衰变加速结构域，(ii)宿主细胞识别结构域，和(iii)具有辅因子活性的第二含CCP结构域。本发明专利技术进一步涉及编码所述多结构域多肽的多核苷酸，涉及包含所述多核苷酸的载体，和涉及包含所述多核苷酸和/或所述载体的宿主细胞。此外，本发明专利技术涉及多结构域多肽，多肽和载体，其用于医药和用于治疗和/或预防不适当的补体激活和/或具有不适当的补体激活作为症状的疾病。此外，本发明专利技术涉及与多结构域多肽，多肽和载体有关的方法和用途。

Complement Inhibitors and Their Applications

The present invention relates to a multi-domain polypeptide comprising (i) the first complement-containing control protein repeat (CCP) domain, which is the classical and bypass pathway of complement activation, the enzymatic decay acceleration domain, (ii) the host cell recognition domain, and (iii) the second complement-containing protein repeat domain with cofactor activity. The present invention further relates to polynucleotides encoding the polypeptide of the multi-domain, to carriers containing the polynucleotides, and to host cells containing the polynucleotides and/or the carriers. In addition, the present invention relates to multi-domain polypeptides, polypeptides and vectors for medicines and for the treatment and/or prevention of diseases characterized by inappropriate complement activation and/or inappropriate complement activation. In addition, the present invention relates to methods and applications related to multi-domain polypeptides, polypeptides and carriers.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】补体抑制剂及其用途本专利技术涉及多结构域多肽，其包含(i)第一含补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其是补体激活的经典和旁路途径的转化酶的转化酶衰变加速结构域，(ii)宿主细胞识别结构域，和(iii)具有辅因子活性的第二含CCP结构域。本专利技术进一步涉及编码所述多结构域多肽的多核苷酸，涉及包含所述多核苷酸的载体，和涉及包含所述多核苷酸和/或所述载体的宿主细胞。此外，本专利技术涉及多结构域多肽，多肽和载体，其用于医药和用于治疗和/或预防不适当的补体激活和/或具有不适当的补体激活作为症状的疾病。此外，本专利技术涉及与多结构域多肽，多肽和载体有关的方法和用途。免疫系统可分为两个分支：系统发育上较老的先天免疫和适应性免疫应答。适应性或获得性免疫系统的免疫应答通常比先天免疫应答更具特异性。适应性免疫系统的其他特征是免疫记忆的发展和通常观察到的抗原暴露和最大免疫应答之间的延迟。即使在原始生物中，先天免疫系统也是高度保守的。该分支的细胞效应子主要包括中性粒细胞，单核细胞和巨噬细胞，而可溶性先天免疫效应子主要由补体系统和急性期蛋白质或成孔肽等其他效应子组成(Parkin&Cohen(2001)TheLancet357：1777-89)。补体系统由血清中的热不稳定组分组成，其由PaulEhrlich描述为“补充”针对细菌的抗体应答。补体系统的其他功能是对微生物入侵者，免疫复合物，碎片，凋亡和坏死细胞的调理素作用，以通过吞噬细胞的摄取来支持它们的有效清除(Ricklin等.(2010)NatureImmunology11：785-797)。补体系统由三种激活途径组成：经典(CP)，凝集素(LP)和旁路途径(AP)。CP的激活通常通过补体组分C1q以抗体依赖性方式实现，所述补体组分C1q充当模式识别分子(PRM)。在一系列蛋白水解激活事件后，CPC3转化酶(C4bC2a)将补体组分C3(其是所有三种补体激活途径的核心)切割成C3a(其是过敏毒素)和C3b(调理素)。由于这种切割，发生构象变化并且先前的内部硫酯键到达C3b的蛋白质表面。这种活性的并且一旦暴露则短寿命的硫酯键可以共价结合到位于细胞表面上的分子的羟基和氨基，或者可以被水裂解(“猝灭”)。因此，如果C3转化酶没有下调，则可以发生许多C3b分子对细胞的调理素作用。大量C3b分子的产生促进C5转化酶对C5的激活。C5转化酶将C5切割成C5a(最有效的过敏毒素)和C5b，所述C5b募集补体因子C6-9以形成膜攻击复合物(MAC)，所述MAC组装细胞膜中的孔以裂解和杀死。凝集素途径(LP)与CP类似地组织。通过识别病原体相关分子模式(PAMP)或危险相关分子模式(DAMP)发生激活。在LP内，PAMP或DAMP可以通过若干种与Clq(CP的模式识别分子)同源的模式识别分子检测：甘露糖结合凝集素(MBL)和各种类型的胶原凝集素和纤维胶凝蛋白。在PAMP或DAMP之后，结合MBL经历构象变化，然后与MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MASP)缔合。MBL在结构和功能上与C1q同源。与CP类似，MASP2蛋白水解激活C2为C2a和C2b，激活C4为C4a和C4b。激活的组分可以构建LP的C3转化酶C4bC2a，这与CP相同并且将C3切割成C3a和C3b。与CP类似，在没有严格调节C3转化酶的情况下，更多C3b分子的产生促进C5通过C5转化酶而激活。C5的蛋白水解激活是末端和裂解补体途径的起始点，其中C5b启动MAC的形成。旁路途径通过低水平的自激活过程被激活。此过程称为C3的“空转(tick-over)”激活。C3分子具有固有的亚稳态构象。在任何时候，一小部分C3分子经历自发的构象变化(激活)，其暴露先前内部的硫酯结构域。硫酯可以用水猝灭或不加选择地(对于自身或外来的)附着在细胞表面上的亲核试剂上。这种“自激活的”C3被称为C3(H2O)并且在结构上类似于C3b分子。C3b或C3(H2O)暴露出隐藏在C3中的新蛋白质表面。这些新表面结合因子B(AP的另一个补体因子)。当因子B与C3b或C3(H2O)结合时，它可被蛋白酶因子D裂解成Ba和Bb。Bb保持与C3(H2O)(或C3b)结合并构成AP的C3转化酶C3bBb。与CP和LPC3转化酶类似，C3bBb可通过切割C3产生C3b和C3a分子。蛋白质Properdin是AP的正调节因子，通过稳定APC3转化酶的蛋白质-蛋白质相互作用而发挥重要作用。如果不调节，由旁路，经典或凝集素途径产生的任何C3b能够构建更多的APC3转化酶并进一步放大正反馈环中产生的C3b分子的数量。该步骤称为AP的“放大循环”。因此，三种激活途径在C3激活水平收敛，并且如果不调节，则在MAC形成中累积。经典和凝集素途径在通过感知病原体或内源性危险分子而被特异性激活之前是无效的。相反，AP始终处于低水平激活并且不加选择地产生C3b(或最初地，C3(H2O))分子。已知补体系统中超过十种不同的调节蛋白。一些调节物在启动CP和LP的水平上进行抑制，但是最严格控制的级联部分是作为激活信号的放大器的转化酶，以及构建平台以形成C3转化酶和炎性C5转化酶的C3b。还有一些调节物专门控制裂解MAC。调节蛋白可以分为衰变加速剂，其使C3转化酶不稳定并导致转化酶的更快衰变。另一组涉及降解C3b或/和C4b的蛋白质(如因子H和因子I)，以防止可溶性蛋白酶因子I的非特异性降解，C3b或C4b的失活需要存在与靶标结合并募集因子I(例如FH或CR1)的辅因子蛋白质。另一组调节物抑制MAC的形成。许多疾病，特别是遗传性疾病，与补体功能障碍有关，特别是补体的过度激活。因此，为了提供补体系统的人工调节物，开发了特异性结合补体蛋白C5并抑制末端激活的单克隆抗体依库珠单抗(eculizumab)(Hillmen等.(2006)，NEJM355(12)：1233)。在类似的开发中，开发了C5抑制蛋白rEV576(覆盖素(coversin))(Romay-Penabad等(2014)，Lupus23(12)：1324)。此外，获得称为“mini-FH”的蛋白质，其通过接头连接补体因子H的补体控制蛋白重复序列(CCP)1-4和19-20(WO2013/142362A1)；然而，后者仅抑制旁路途径。因此，本领域需要改进的补体抑制剂，以避免现有技术的缺点。该问题通过本文公开的手段和方法解决。因此，本专利技术涉及多结构域多肽，其包含(i)第一含补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其是补体激活的经典和旁路途径的转化酶的转化酶衰变加速结构域，(ii)宿主细胞识别结构域，和(iii)第二含CCP结构域。此外，本专利技术涉及多结构域多肽，其包含(i)第一含补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其包含与1型补体受体(CR1)的CCP1至3至少70％相同的氨基酸序列和/或包含与衰变加速因子(decayacceleratingfactor，DAF)的CCP1至4至少70％的氨基酸序列。(ii)宿主细胞识别结构域，其包含与补体因子H的CCP6至8或CCP19至20至少70％相同的氨基酸序列，和(iii)第二含CCP结构域，其包含与CR1的CCP8至10和/或CCP15至17至少70％相同的氨基酸序列。如以下所使用的，术语“具有”，“包含”本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.多结构域多肽，其包含(i)第一补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其是补体激活的经典和旁路途径的转化酶的转化酶衰变加速结构域，(ii)宿主细胞识别结构域，和(iii)第二含CCP结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.06.28 EP 16176739.71.多结构域多肽，其包含(i)第一补体控制蛋白重复(CCP)结构域，其是补体激活的经典和旁路途径的转化酶的转化酶衰变加速结构域，(ii)宿主细胞识别结构域，和(iii)第二含CCP结构域。2.权利要求1的多结构域多肽，其中所述第一含CCP结构域包含1型补体受体(CR1)优选人CR1的CCP1至3；和/或包含衰变加速因子(DAF)优选人DAF的CCP1至4。3.权利要求1或2的多结构域多肽，其中所述第一含CCP结构域包含SEQIDNO：1中所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：1至少70％相同的氨基酸序列，优选由其组成。4.权利要求1至3中任一项的多结构域多肽，其中所述第一含CCP结构域包含SEQIDNO：2中所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：2至少70％相同的氨基酸序列，优选由其组成。5.权利要求1至4中任一项的多结构域多肽，其中所述第二含CCP结构域包含CR1优选人CR1的CCP8至10和/或15至17。6.权利要求1至5中任一项的多结构域多肽，其中所述第二含CCP结构域包含SEQIDNO：3中所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：3至少70％相同的氨基酸序列，优选由其组成。7.权利要求1至6中任一项的多结构域多肽，其中所述宿主细胞识别结构域包含补体因子H优选人补体因子H的CCP6至8和/或19至20。8.权利要求1至7中任一项的多结构域多肽，其中所述宿主细胞识别结构域包含SEQIDNO：4中所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：4至少70％相同的氨基酸序列，优选由其组成。9.权利要求1至8中任一项的多结构域多肽，其中所述多结构域多肽以如下顺序包含所述结构域：N末端，第一含CCP结构域，宿主细胞识别结构域，第二含CCP结构域，C末端。10.权利要求1至9中任一项的多结构域多肽，其中所述多结构域多肽包含SEQIDNO：5或6中所示的氨基酸序列或与SEQIDNO：5或6至少70％相同的氨基酸序列，优选由其组成。11.权利要求1至10中任一项的多结构域多肽，其中所述第一含CCP结构域包含至少一个，优选至少两个，更优选至少三个对补体因子C3b和C4b具有结合活性的CCP。12.权利要求1至11中任一项的多结构域多肽，其中所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·施密特，胡贝特·施雷森迈尔，马库斯·安赖克尔，布丽塔·赫希斯曼，
申请(专利权)人：乌尔姆大学，
类型：发明
国别省市：德国,DE