The invention belongs to the field of biopharmaceutical technology, in particular to cyclic dipeptide compounds, their preparation methods and applications. The cyclic dipeptide compound is prepared from the solid plate fermentation product of marine actinomycetes. The marine actinomycete is Streptomyces grayi F8, which is stored in the China General Microbial Species Preservation and Management Center on November 17, 2017. The storage number is CGMCC No. 14923. The preparation method of the cyclic dipeptide compound described in the first article adopts the following steps: the acquisition of fermented crude substances; the Sephadex LH_20 column chromatography of crude substances; the preparation of cyclic compounds; the patent uses solid plate fermentation to ferment marine actinomycete F8 to obtain crude extracts, and the crude extracts obtained by solid plate fermentation are conducive to the separation and purification of the target products. The purity of four cyclopeptide compounds obtained by this method is higher than 95%. The compounds prepared by the invention further broaden the research field of bactericidal and antineoplastic drugs and have broad application prospects.
【技术实现步骤摘要】
环状二肽化合物及其制备方法和应用
本专利技术属于生物制药
，具体涉及环状二肽化合物及其制备方法和应用。
技术介绍
通常生物学中所指的环肽是指以氨基酸肽键形成的化合物，在植物化学中这一概念被扩大成以酰胺键形成的一类化合物，因此范围被扩大至包括有机胺类和大环生物碱类，根据成环与否分为环肽和直链肽。已报道的环肽类化合物具有多方面的生物活性，包括抗肿瘤、抗HIV、抗菌、抗疟、安眠、抑制血小板聚集、降压、抑制酪氨酸酶、抑制环氧化酶、抑制脂质过氧化酶、雌性激素样、免疫抑制等生物活性。放线菌是产生天然生物活性物质的重要微生物资源，其开发利用一直备受各国重视。迄今所发现的20000余种微生物来源的生物活性物质中，约有50%是由放线菌产生的，但是从放线菌中分离出环肽类化合物并不是很多。因此，放线菌资源的开发以及采用新方法对放线菌资源的深入挖掘一直是放线菌代谢产物研究的重要内容。海洋具有低温、低营养、高盐、无光照、缺氧等独特的物理、化学和生态环境，故海洋放线菌必然产生与陆地微生物不同的代谢途径和机体防御机制，这对发现新型药物先导化合物、研究药物作用新机理、新靶点等具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术提供了从海洋放线菌（streptomycesgriseorubens）F8分离的四种环肽类化合物以及上述环状二肽化合物的制备方法和应用。本专利技术通过下述技术方案予以实现。环状二肽化合物，从海洋放线菌的固体平板发酵产物中制备，化学结构式如下：优选地，所述海洋放线菌为灰略红链霉菌（streptomycesgriseorubens）F8，于2017年11月17日保藏于中国普通微...
【技术保护点】
1.环状二肽化合物，其特征在于，从海洋放线菌的固体平板发酵产物中制备，化学结构式如下：
【技术特征摘要】
1.环状二肽化合物，其特征在于，从海洋放线菌的固体平板发酵产物中制备，化学结构式如下：。2.根据权利要求1所述的环状二肽化合物，其特征在于，所述海洋放线菌为灰略红链霉菌（streptomycesgriseorubens）F8，于2017年11月17日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号：CGMCCNo.14923。3.一种权利要求1或2所述的环状二肽化合物的制备方法，其特征在于，采用以下步骤:（1）发酵粗体物的获得将海洋放线菌发酵，将YMG琼脂培养基浸泡，将浸泡液浓缩干得粗提物，将粗提物在乙酸乙酯中溶解得溶解液，将无法溶解的部分用水溶解然后乙酸乙酯萃取收集乙酸乙酯相，与之前的乙酸乙酯溶解物合并得到乙酸乙酯相，减压蒸干得到乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物再经等体积的甲醇跟石油醚萃取后收集甲醇相减压浓缩，得甲醇提取物；（2）粗体物的SephadexLH-20柱层析甲醇溶解步骤（1）制备的甲醇提取物，柱层析收集后经TLC检测，得到组份Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5、Fr6、Fr7、Fr8、Fr9、Fr10；（3）环状化合物的制备将步骤（2）制备的组份Fr4用甲醇溶解经过反向硅胶柱分离纯化，依次用超纯水、10%甲醇、20%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇进行梯度洗脱，经TLC检测，根据TLC检测结果，得到组份Fr4-1、Fr4-2、Fr4-3、Fr4-4、Fr4-5；将组分Fr4-2溶于甲醇中用制备液相进行分离纯化，采用13%乙腈恒梯度洗脱，得到化合物1保留时间6.5min；将组份Fr4-3溶于甲醇中用制备液相进行分离纯化，采用13%乙腈恒梯度洗脱，得到化合物2保留时间16.5min；将步骤（2）制备的组份Fr5用甲醇溶解经过反向硅胶柱分离纯化，依次用超纯水、10%甲醇、20%甲醇、30%甲醇、40%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、100%甲醇进行梯度洗脱，经TLC检测，根据TLC检测结果，得到组份Fr5-1、Fr5-2、Fr5-3、Fr5-4、Fr5-5；将组份Fr5-2用甲醇溶解，通过柱层析，经TLC检测，根据TLC检测结果，得到组分Fr5-2-a、Fr5-2-b、Fr5-2-c、Fr5-2-d、Fr5-2-e；将组分Fr5-2-d溶于甲醇中用制备液相进行分离纯化，采用20%乙腈恒梯度洗脱，得到化合物3保留时间3.5min；将组份Fr5-3溶于甲醇中用制备液相进行分离纯化，采用35%乙腈恒梯度洗脱，得到化合物4保留时间3.5min。4.根据权利要求3所述的环状二肽化合物的制备方法，其特征在于，具体的制备方法为：（1）发酵粗体物的获得用YMG琼脂培养基将海洋放线菌发酵，28-30℃倒置培养10-14天后，将琼脂培养基切块放入浸提液浸泡6-12h，将浸泡液浓缩至干得粗提物，将粗提物使用乙酸乙酯溶解得溶解液，将无法溶解的部分用水溶解然后用等体积的乙酸乙酯萃取收集乙酸乙酯相，并与之前的乙酸乙酯溶解物合并得到乙酸乙酯相，将乙酸乙酯相减压蒸干得到乙酸乙酯提取物，乙酸乙酯提取物再经等体积的甲醇跟石油醚萃取后收集甲醇相减压浓缩，得甲醇提取物；（2）粗体物的SephadexLH-20柱层析用甲醇溶解步骤（1）制备的甲醇提取物3.7g后，通过柱层析收集120管，TLC检测，根据TLC检测结果，合并1-25、26-31、32-36、37-45、46-54、55-61、...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨革，梁光杰，车程川，刘金锋，巩志金，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东,37
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