用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法技术

本发明专利技术公开了一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，包括荧光标准卡本体和荧光检测单元，荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。所述荧光标准卡与使用质控品、参考品或标准品相比，具有发光性质稳定、不易随时间衰减，线宽精度高、荧光物质空间分布均匀，荧光物质的量和荧光强度呈线性以及制备一致性好的特点。还公开了一种测试方法，建立了一种荧光标准卡评估设备的方法和参数，该方法评估内容完整、易于操作，是一套系统的测量评估方案，有利于对荧光免疫分析仪进行校准和质控，提高了荧光免疫分析仪的检测准确性，以及各方法的溯源方案，能够可靠保证荧光标准卡在制作和使用过程中本身的属性严谨受控。

【技术实现步骤摘要】
用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法
本专利技术属于荧光免疫分析
，具体地说涉及一种用于荧光分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法。
技术介绍
荧光免疫分析技术是标记免疫技术中发展最早的一种，是将抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合起来的一种方法。其原理为：将不影响抗原、抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上，与其相应的抗原(或抗体)结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。荧光免疫检测技术具有专一性强、灵敏度高、实用性好等优点，可被用于检测含量很低的生物活性化合物，如蛋白质(酶、接受体、抗体)、激素、药物及微生物等。目前，行业内通常采用荧光免疫分析仪进行荧光免疫分析检测，仪器由于自身因素和外界环境的干扰，有时检测结果会存在一定偏差，为提升仪器检测数据的精确度，在使用仪器前，需要对仪器进行校准和质控。对设备性能参数的校准和评估方法一般包括以下几种：(1)使用纳米晶等荧光材料配制为溶液，将溶液印刷或喷涂或通过凝胶等方法固化在基材上制作成为标准卡，使用该标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数；(2)使用LED灯或灯条制作成标准卡，使用该标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数；(3)使用荧光矿物质或荧光矿物质混合物制作标准卡，使用标准卡对设备进行测量以评估设备的性能参数。上述方法存在如下技术问题：(1)纳米晶材料溶液在制备不良情况下，往往会随时间发生明显的衰减，导致标准卡的信号发生变化，无法作为稳定的标准品对设备进行可靠评估，同时，溶液进行细线打印时，线宽精度难以保证，如果溶液在基材上发生层析或扩散，标准卡的一致性更加难以保证，而通过凝胶法进行固化，往往达不到良好的分散性，制作的标准卡个体差异大，无法作为标准的判断物。(2)LED灯本身具有发光强度和颜色的差异，用LED灯或灯条制作的标准卡一致性较差，另外，LED灯或灯条本身是发光源而非受激发光，难以对设备中光学模块的激光光源性能进行评估。现有的方案一般通过设计单一的T线，通过T线的荧光信号强度和溶液浓度的关系进行线性拟合，但对于荧光分析仪的设计原理而言，由于最终输出的信号一般是经过放大的信号，且信号放大的倍数往往是动态的，如要进行线性拟合，则需要将倍数进行归一化，操作不便，同时，对于单一的T线，在制作过程中，低浓度和高浓度的溶液制作出来的T线，往往随时间的衰减程度不一致，很难保证长期使用后，维持稳定的线性关系。而且目前现有方法只对荧光标准卡的制作方式和结构进行说明，没有将荧光标准卡结合设备的特性，形成合理而系统的测量评估方案以及溯源方案。
技术实现思路
为此，本专利技术正是要解决上述技术问题，从而提出一种发光物质稳定、结构合理、可稳定保存和固化发光物质、能定量判断设备重复性、稳定性、准确性和线性相关性且可进行溯源的用于荧光分析仪校准和质控的荧光标准卡及测试方法。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：本专利技术提供一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元，所述荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。作为优选，所述荧光标准卡本体的观测窗口处开设置有沟槽或容置腔，所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于所述沟槽或容置腔内；或者所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于毛细管或微流控芯片的流道中，所述毛细管或所述微流控芯片设置于所述观测窗口处。作为优选，所述荧光标准卡本体内设置有载片，所述载片表面制作有荧光检测部，所述荧光检测部制作有荧光油墨货荧光墨水层，所述荧光检测部设置于荧光标准卡本体的观测窗口处。作为优选，所述载片表面还设置有遮光片，所述遮光片对应于所述荧光检测部的位置为镂空位。本专利技术还有一种利用所述的荧光标准卡的测试方法，根据荧光检测单元中荧光物质的浓度或荧光检测单元的面积将荧光标准卡设定为1-9级梯度，浓度可以从0～100％，例如0％、1％、5％、10％、20％、30％、50％、60％、90％，所对应的信号值可以从0-100000000，例如卡1～卡9信号值可以为：10、100、500、1000、5000、10000、50000、100000、500000，采用具有不同浓度或面积梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试，所述校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。作为优选，所述重复性测试包括：将具有1-9级浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的检测口连续测量十次，按照以下公式计算每个荧光标准卡测量结果的变异系数，根据所述变异系数判定荧光免疫分析仪的重复性：其中，s为样品测试值的标准差；为样品测试值的平均值。作为优选，所述稳定性测试包括：取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中连续测量3次，4、8h后分别再测量3次，分别取每3次测量的平均值作为测量值，初始3次测量的平均值作为基准值，按照以下公式计算稳定性系数：其中，为第4h、第8h时3次测量的平均值；为初3次始测量的平均值；所述准确性测试包括：取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中各连续测量3次，分别取每3次测量的平均值作为每次的测量值，以荧光标准卡的标称值为真值，按照以下公式计算测量的准确度系数：其中，xi为每次的测量值，n为测量次数，X为真值。作为优选，所述线性相关性测试包括：取T/C值为不同梯度的荧光标准卡，所述荧光标准卡的标称值的梯度的数量级不小于2，梯度数量不小于5，将所述荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪连续测量3次，计算每三次测量的平均值，并按照以下公式计算线性关系系数：其中，Xi为荧光标准卡的标称值；Yi为标准卡测量3次的测量值的平均值。作为优选，校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤，所述荧光标准卡中荧光物质为荧光溶液或光固化荧光材料，根据线性测试浓度配比的要求，将所述荧光溶液或光固化荧光材料稀释为1-9级浓度梯度，将不同浓度梯度的荧光溶液或光固化荧光材料分别注入荧光标准卡的卡槽或容置腔中，得到不同浓度梯度的荧光标准卡；或采用同一浓度的荧光物质，分别注入面积为1-9级的卡槽或容置腔内，得到面积不同的检测条带，通过上述溯源步骤进行溯源。作为优选，校准测试之前还包括荧光标准卡溯源的步骤，所述荧光标准卡中荧光物质为荧光油墨或荧光墨水，将荧光油墨或荧光墨水制备于载片表面，根据荧光油墨或荧光墨水中荧光物质的浓度制备为1-9级荧光色块，用标准光源照射所述荧光色块并测量所述色块的的亮度，取3次测量得到的平均值作为色块的亮度测量值，当荧光色块的亮度测量值与色块定义的标称值间相对偏差小于1％，则安装于荧光标准卡本体；或采用同一荧光物质浓度，制备1-9级面积的荧光色块，通过上述溯源步骤进行溯源。本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：(1)本专利技术所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元，所述荧光检测单元由荧光溶液、荧光溶液与光固化胶黏剂混合物或荧光油墨制得。荧光标准卡中的荧光物质与常规荧光材料相比，发光性质稳定，不易随时间衰减，线宽精度高，标准卡的一致性好。能够在理论和实际中，将标准卡的荧光物质和设备检测到的荧光强度形成线性关系，可评估分析仪的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，其特征在于，所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元，所述荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。

【技术特征摘要】
1.一种用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，其特征在于，所述荧光标准卡包括荧光标准卡本体和荧光检测单元，所述荧光检测单元由荧光溶液、光固化荧光材料、荧光油墨或荧光墨水制得。2.根据权利要求1所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，其特征在于，所述荧光标准卡本体的观测窗口处开设置有沟槽或容置腔，所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于所述沟槽或容置腔内；或者所述荧光溶液、光固化荧光材料容置于毛细管或微流控芯片的流道中，所述毛细管或所述微流控芯片设置于所述观测窗口处。3.根据权利要求1所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，其特征在于，所述荧光标准卡本体内设置有载片，所述载片表面制作有荧光检测部，所述荧光检测部制作有荧光油墨或荧光墨水层，所述荧光检测部设置于荧光标准卡本体的观测窗口处。4.根据权利要求3所述的用于荧光免疫分析仪校准和质控的荧光标准卡，其特征在于，所述载片表面还设置有遮光片，所述遮光片对应于所述荧光检测部的位置为镂空位。5.一种利用如权利要求1-4任一项所述的荧光标准卡的测试方法，其特征在于，根据荧光检测单元中荧光物质的浓度或荧光检测单元的面积将荧光标准卡设定为1-9级梯度，采用具有不同浓度或面积梯度的荧光标准卡对荧光免疫分析仪进行校准测试，所述校准测试包括重复性测试、稳定性测试、准确性测试和线性相关测试。6.根据权利要求5所述的测试方法，其特征在于，所述重复性测试包括：将具有1-9级浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的检测口连续测量十次，按照以下公式计算每个荧光标准卡测量结果的变异系数，根据所述变异系数判定荧光免疫分析仪的重复性：其中，s为样品测试值的标准差；为样品测试值的平均值。7.根据权利要求6所述的测试方法，其特征在于，所述稳定性测试包括：取第1、5、9浓度或面积梯度的荧光标准卡分别插入荧光免疫分析仪的卡槽中连续测量3次，4、8h后分别再测量3次，分别取每3次测量的平均值作为测量值，初...

【专利技术属性】
技术研发人员：招睿雄，蒋庭彦，杜沛深，王炯，李浩勃，张二盈，章国建，
申请(专利权)人：深圳市金准生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44