一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法。该方法是用含有磷酸根离子的缓冲液稀释氢氧化铝佐剂，进行氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的检测。本发明专利技术在检测氢氧化铝佐剂中的细菌内毒素含量时，磷酸根离子可以破坏氢氧化铝佐剂的胶体结构，从而降低氢氧化铝佐剂对细菌内毒素标准品和鲎试剂中蛋白的吸附作用，达到可以正常检测氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的目的。本发明专利技术操作简单，构思巧妙，准确度高，可降低氧化铝佐剂对细菌内毒素检测的干扰作用，能准确测定氢氧化铝佐剂中细菌内毒素的含量，提高检测精度，具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法
本专利技术属于细菌内毒素检测
，更具体地，涉及一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法。
技术介绍
细菌内毒素(Endotoxin)，是G-菌细胞壁个层上的特有结构，其主要化学成分为脂多糖，内毒素为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。氢氧化铝佐剂含有胶体，是阴离子抗原的良好吸附剂，在应用氢氧化铝佐剂时，需要对其质量进行严格控制，氢氧化铝佐剂内控质量标准13项中有规定：内毒素含量每毫克铝<5IU。在对氢氧化铝佐剂中的细菌内毒素含量进行测定时，运用较多的方法是鲎试剂法。鲎试剂是由海洋生物鲎的血液变形细胞溶解物制成的无菌冷冻干燥品，含有能被微量细菌内毒素激活的凝固酶原，凝固蛋白原。因此，采用该方法进行细菌内毒素检测之前，须进行干扰实验，排除供试品对鲎试剂实验的干扰，确保测定的细菌内毒素含量的准确性。在检测氢氧化铝佐剂中的细菌内毒素含量时，需要用到细菌内毒素标准品和鲎试剂，而氢氧化铝佐剂会对细菌内毒素标准品和鲎试剂中的蛋白质产生吸附作用，从而对鲎实验产生强烈干扰。因此，氢氧化铝佐剂本身会对检测其含有的细菌内毒素产生强烈的干扰作用，无法满足细菌内毒素检查法的无干扰要求。目前，在检测氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量时，用水稀释氢氧化铝佐剂，在氢氧化铝佐剂中补充Mg2+和Ca2+，调节pH值等方法都无法去除氢氧化铝佐剂本身对细菌内毒素检测的干扰作用。因此，亟需一种可以解决氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服在检测氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量时，氢氧化铝佐剂本身对细菌内毒素含量的检测中存在的干扰问题，提供一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法，该方法能够减少或消除氢氧化铝佐剂本身对细菌内毒素检测的干扰作用，提高检测结果的精确度。本专利技术的另一目的是提供磷酸根离子在减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测中的应用。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：本专利技术涉及磷酸根离子在减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测中的应用。实验发现，磷酸根离子对铝原子的连接比氢氧根离子更强，可以破坏氢氧化铝佐剂的胶体结构，从而降低氢氧化铝佐剂在细菌内毒素检测时，对细菌内毒素标准品和鲎试剂中蛋白的吸附作用，进而降低氢氧化铝佐剂本身对细菌内毒素检测的干扰，达到提高检测精度的目的。所述应用的方法为：用含有磷酸根离子的缓冲液稀释氢氧化铝佐剂，将稀释后的氢氧化铝佐剂与细菌内毒素工作标准品混匀，进行氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的检测。优选地，所述磷酸根离子选自磷酸盐缓冲液(PBS)。所述磷酸盐缓冲液为本领域常用的磷酸盐缓冲液，对其阳离子没有限定。例如阳离子为Na+、K+等均可。优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为大于或等于10mM。更优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10～50mM。更进一步优选地，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM。优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.5～8.0。当磷酸盐缓冲液的pH过大或过小时，会影响鲎试剂的活性，干扰鲎试剂与内毒素的反应。更优选地，所述磷酸盐缓冲液的pH为7.0。优选地，所述稀释后的氢氧化铝佐剂与细菌内毒素工作标准品的体积比为8～10：1。更优选地，所述稀释后的氢氧化铝佐剂与细菌内毒素工作标准品的体积比为9：1。优选地，所述氢氧化铝佐剂的稀释倍数为大于或等于50倍。当用1×PBS将氢氧化铝佐剂稀释至大于或等于50倍时，PBS不含有内毒素，对鲎实验无影响，且能良好的破坏氢氧化铝佐剂中的胶体结构，从而消除氢氧化铝佐剂对细菌内毒素检测的干扰。更优选地，所述氢氧化铝佐剂的稀释倍数为50～400倍。更进一步优选地，所述氢氧化铝佐剂的稀释倍数为50倍。优选地，所述进行细菌内毒素检测之前，需要先进行以下处理：将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，漩涡混匀。优选地，所述漩涡混匀的时间为10～20min。更优选地，所述漩涡混匀的时间为15min。另外，本专利技术还提供了减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法，用含有磷酸根离子的缓冲液稀释氢氧化铝佐剂，将稀释后的氢氧化铝佐剂与细菌内毒素工作标准品混匀，进行氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的检测。作为一种较佳的实施方案，上述检测氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的方法，包括以下步骤：S1.用1×PBS对氢氧化铝佐剂进行梯度稀释；S2.用细菌内毒素检查用水溶解细菌内毒素工作标准品，漩涡混匀15min，制成标准曲线；S3.将步骤S1梯度稀释后的氢氧化铝佐剂和步骤S2细菌内毒素工作标准品以9：1的体积比混合均匀，得到混合溶液；S4.取动态显色法鲎试剂，开启后依动态显色法鲎试剂使用说明，加入细菌内毒素检查用水复溶；S5.将步骤S3得到的混合溶液与步骤S4复溶后的鲎试剂等体积混合，放入细菌内毒素反应板中，然后放入酶标仪中反应，进行细菌内毒素检测。1×PBS是指浓度为10mM的PBS。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测的方法，该方法利用磷酸根离子可以破坏氢氧化铝佐剂的胶体结构，从而降低氢氧化铝佐剂对细菌内毒素标准品和鲎试剂中蛋白吸附的原理，进行氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的检测。该方法能够减少或消除氢氧化铝佐剂本身对细菌内毒素检测的干扰作用，达到正常检测氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的目的。另外，本专利技术构思巧妙，操作简单，准确度高，解决了氢氧化铝佐剂本身在细菌内毒素检测中存在的干扰问题，满足了细菌内毒素检查法的无干扰要求，能准确测定氢氧化铝佐剂中细菌内毒素的含量，符合氢氧化铝佐剂内控质量标准，进而对氢氧化铝佐剂的质量进行严格控制，具有广泛的应用前景。附图说明图1是不同浓度PBS对细菌内毒素检测的影响。图2是不同浓度PBS对氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量检测的影响。图3是不同稀释倍数的氢氧化铝佐剂对细菌内毒素含量检测的干扰结果。图4是1×PBS将氢氧化铝佐剂稀释至5倍时的细菌内毒素反应曲线。图5是1×PBS将氢氧化铝佐剂稀释至25倍时的细菌内毒素反应曲线。图6是用1×PBS将氢氧化铝佐剂稀释至50倍、100倍、200倍和400倍时的细菌内毒素反应曲线。图7是硫酸镁缓冲液和Tris缓冲液稀释氢氧化铝佐剂对细菌内毒素含量检测的干扰结果。具体实施方式以下结合具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。本专利技术以下实施例中，10×PBS是指浓度为100mM的PBS稀释；5×PBS是指浓度为50mM的PBS稀释；1×PBS是指浓度为10mM的PBS；0.5×PBS是指浓度为5mM的PBS。实施例1不同浓度PBS本身对细菌内毒素检测的影响1、进行不同浓度PBS本身对细菌内毒素检测的影响实验，考察PBS单独存在时对细菌内毒素含量检测的影响S1.分别用细菌内毒素检查用水将10×PBS稀释为5×PBS、1×PBS和0.5×PBS；S2.将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，漩涡混匀15min，制成2EU/mL(简称“E2”)、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.磷酸根离子在减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测中的应用。

【技术特征摘要】
1.磷酸根离子在减少或消除氢氧化铝佐剂干扰细菌内毒素检测中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用的方法为：用含有磷酸根离子的缓冲液稀释氢氧化铝佐剂，将稀释后的氢氧化铝佐剂与细菌内毒素工作标准品混匀，进行氢氧化铝佐剂中细菌内毒素含量的检测。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述磷酸根离子选自磷酸盐缓冲液。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为大于或等于10mM。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10～50mM。6.根据权利要求3所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊向党，梁真峰，卓培泽，宋灿辉，
申请(专利权)人：湛江安度斯生物有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44