一种唾液DNA保存液及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种唾液DNA保存液，包括如下组分和含量：SDS 0.1‑8%（w/v）。本发明专利技术的唾液DNA保存液配方简单，用于保存人体唾液DNA样本，能够在室温条件下长期保存唾液DNA，所保存的唾液中DNA完整性好，能够保证唾液样本在各采集地之间运输过程中的稳定性，适用于基因检测及相关科学研究。

【技术实现步骤摘要】
一种唾液DNA保存液及其制备方法和用途
本专利技术涉及分子生物学
，特别是涉及一种唾液DNA保存液及其制备方法和用途。
技术介绍
DNA样本在分子生物学、医学鉴定、检测与治疗等领域中应用广泛，占有重要的地位。通常用于PCR扩增或检测的DNA是从抗凝血液中提取的，但血液样本作为DNA来源在一定程度上受到了限制，主要体现在两方面，一方面血液保存长时间容易形成凝集，对提取造成不便；另一方面采集血液也会对人体造成一定的创伤并且还要依靠专业技能才能完成。唾液是一种人体较易获得的体液，采集更为方便，且无创伤，是理想的体液样本，适合大范围取样。但唾液成分主要有水、口腔黏膜细胞、细菌、唾液淀粉酶、粘性糖等物质，成分复杂，不易长时间保存，因此，避免唾液腐败、保持脱落细胞内基因组DNA完整性对其应用至关重要。已有专利中的保护剂成分复杂，其中还有些不利于DNA完整性的保存，如专利公布号CN102440234B和CN105368812A成分非常复杂；CN102919218B中含有氯化镁，镁离子是核酸酶激活剂，不利于DNA的稳定性和完整性的保存；CN102919218B和CN105039306A中分别含有蔗糖和葡萄糖成分，虽然可以很好的保持该唾液保存固定液的粘度并维持细胞渗透压，但是容易引起细菌等微生物的滋生；氯化镁作为核酸酶的激活剂，容易引起DNA的降解。针对现有技术的不足，本专利技术提供一种简单的人体唾液DNA保存液组方，所述人体唾液DNA保存液用于保存唾液DNA，能够长期保持细胞中DNA的完整性，并且能够避免细菌等微生物的滋生。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种唾液DNA保存液及其制备方法和用途。本专利技术实施例提供了一种唾液DNA保存液，包括如下组分和含量：SDS0.1-8%（w/v）。可选择地，上述唾液DNA保存液中，上述SDS的含量为0.3-6%（w/v）。可选择地，上述唾液DNA保存液中，上述SDS的含量为0.5-2%（w/v）。可选择地，上述唾液DNA保存液中，上述SDS的含量为1.5%（w/v）。本专利技术实施例还提供了一种上述唾液DNA保存液的制备方法，上述制备方法包括如下步骤：a.称取组分：SDS0.1-8%（w/v），加入无菌水溶解；或将上述的唾液DNA保存液的组分制备成储存液的形式备用，配制时量取组分的体积；用无菌水定容；b.将步骤a所得溶液通过微孔滤膜过滤除菌，得到上述唾液DNA保存液。可选择地，上述唾液DNA保存液的制备方法还可以包括如下步骤：a.称取组分：上述SDS的含量为0.3-6%（w/v），加入无菌水溶解；或将上述的唾液保存液的组分制备成储存液的形式备用，配制时量取组分的体积；用无菌水定容；b.将步骤a所得溶液通过微孔滤膜过滤除菌，得到上述唾液DNA保存液。可选择地，上述唾液DNA保存液的制备方法还可以包括如下步骤：a.称取组分：上述SDS的含量为0.5-2%（w/v），加入无菌水溶解；或将上述的唾液DNA保存液的组分制备成储存液的形式备用，配制时量取组分的体积；用无菌水定容；b.将步骤a所得溶液通过微孔滤膜过滤除菌，得到上述唾液DNA保存液。可选择地，上述唾液DNA保存液的制备方法还可以包括如下步骤：a.称取组分：上述SDS的含量为1.5%（w/v），加入无菌水溶解；或将上述的唾液DNA保存液的组分制备成储存液的形式备用，配制时量取组分的体积；用无菌水定容；b.将步骤a所得溶液通过微孔滤膜过滤除菌，得到上述唾液DNA保存液。本专利技术实施例还提供了一种上述唾液DNA保存液在保存唾液DNA中的用途。可选择地，上述唾液为人体唾液。本专利技术提供的唾液DNA保存液中，其中SDS组分既可以作为变性剂和抑菌剂，可以将唾液中的粘蛋白和球蛋白等有机物质进行变性处理，在降低液体粘性的同时使得微生物不易于滋生，可以杀灭或抑制保存后的唾液中的微生物滋生；同时SDS又可以作为助溶剂，可以与蛋白质形成复合物而增强蛋白质的可溶性；破坏核酸酶的活性，保证DNA不被降解；本专利技术的唾液DNA保存液配方简单，用于保存人体唾液DNA样本，能够在室温条件下长期保存唾液DNA，所保存的唾液中DNA完整性好，能够保证唾液样本中DNA在各采集地之间运输过程中的稳定性，适用于基因检测及相关科学研究。附图说明图1为本专利技术实施例2提供的方法采集的唾液样本使用实施例1的唾液DNA保存液保存1周、1个月、3个月、6个月、12个月后按照实施例3提供的方法提取的DNA为模板，进行PCR扩增得到的琼脂糖凝胶电泳图，图中：M表示DNAMarker(由上至下分子量分别为10000bp、5000bp、3000bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp、250bp、100bp)；1-5为唾液样本室温保存1周、1个月、3个月、6个月、12个月后提取得到的DNA为模板进行PCR扩增得到的结果，即实施例5的PCR鉴定图。具体实施方式为了使本领域技术人员更好地理解本专利技术的技术方案能予以实施，下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。实施例1唾液DNA保存液制备本实施例的唾液DNA保存液包括如下组分和含量：SDS1.5％(w/v)。本实施例的唾液DNA保存液的制备方法如下：a.称取0.75克SDS加入到50ml烧杯中，加入量取好的40ml超纯水，通过磁力搅拌器混合均匀；b.将烧杯中SDS溶液转移至50ml容量瓶中，并用超纯水定容至刻度；d.用一次性滤膜装置将上述保存液进行过滤，保存于储液瓶中。或可选的，其中SDS储存液的浓度可以配制成10％(w/v)备用；配制时准确量取SDS储存液，然后用无菌水定容；所得溶液按步骤（d）操作以除菌；步骤（d）微孔滤膜可以选用孔径0.45微米以下、优选0.22微米以下的微孔滤膜。实施例2唾液样本采集与保存本实施例中唾液样本采集和保存方法如下：(1)采样前30分钟漱口以除去食物残渣及残留微生物，漱口之后30分钟内不要进食、饮水、刷牙、吸烟或嚼口香糖；(2)开始吐唾液前，放松脸颊，并轻轻揉搓15-30秒以产生唾液,将唾液收集到无菌的2mLEP管中；(3)按照上述方法采集一个人的唾液2mL；(4)取与唾液等体积的实施例1制备的唾液DNA保存液加入到唾液样品中，并颠倒混匀10-20次；(5)混匀后样品可以放置室温保存。实施例3唾液样本DNA提取本实施例中唾液样本DNA的提取方法如下：(1)取500ul保存过程中的唾液，加入1mlbuffer(100mmol/LTri-HCl，pH8.0,0.5％SDS,10mMEDTA)和6ul20mg/ul的蛋白酶K，涡旋仪上震荡混匀;(2)将本实施例中上述步骤(1)处理后的唾液进行55℃水浴处理20min；(3)加入600ul苯酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)，颠倒混匀，10000rpm离心5min，取上清；(4)向本实施例中上述步骤(3)的上清液中加入600ul的氯仿：异戊醇(24:1)，颠倒混匀后10000rpm离心5min，取上清；(5)向本实施例中上述步骤(4)的上清液体中加入等体积的-20℃预冷的异丙醇，混匀后沉淀1h；(6)将上述液体14000rpm离心10min，弃上清；(7)用500ul70％乙醇洗涤上述沉淀一次，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种唾液DNA保存液，其特征在于包括如下组分和含量：SDS 0.1‑8%（w/v）。

【技术特征摘要】
1.一种唾液DNA保存液，其特征在于包括如下组分和含量：SDS0.1-8%（w/v）。2.根据权利要求1所述的唾液DNA保存液，其特征在于所述SDS的含量为0.3-6%（w/v）。3.根据权利要求2所述的唾液DNA保存液，其特征在于所述SDS的含量为0.5-2%（w/v）。4.根据权利要求3所述的唾液DNA保存液，其特征在于所述SDS的含量为1.5%（w/v）。5.一种根据权利要求1所述的唾液DNA保存液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：a.称取权利要求1所述的唾液DNA保存液的组分，加入无菌水溶解；或将权利要求1所述的唾液DNA保存液的组分制备成储存液的形式备用，配制时量取组分的体积；用无菌水定容；b.将步骤a所得溶液通过微孔滤膜过滤除菌，得到所述唾液DNA保存液。6.一种根据权利要求2所述的唾液DNA保存液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：a.称取权利要求2所述的唾液DNA保存液的组分，加入无菌水溶解；或将权利要求1所述的唾液DNA保存液的组分制备成储存液的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝淑静，
申请(专利权)人：北京中科唯新生物医学研究所有限公司，北京唯新精准医学研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11