枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和试剂盒及它们的应用以及降解呕吐毒素的方法技术

本发明专利技术涉及微生物领域，公开了一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和试剂盒及它们的应用，以及降解呕吐毒素的方法。具体地，本发明专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.14597。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌可以高效且快速地降解粮油和/或饲料中的呕吐毒素，特别是，即使粮油和/饲料中的呕吐毒素含量高达50ppm时，该枯草芽胞杆菌菌也可以高效且快速地降解呕吐毒素，并且对粮油和/或饲料的适口性无影响；同时，将该枯草芽孢杆菌添加至受呕吐毒素污染的粮油和/或饲料中，具有安全性。因此，该枯草芽孢杆菌具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和试剂盒及它们的应用以及降解呕吐毒素的方法
本专利技术涉及微生物领域，具体地，涉及一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和试剂盒及它们的应用，以及降解呕吐毒素的方法。
技术介绍
呕吐毒素(vomitoxin)，又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，化学名称为3α,7α,15-三羟基草镰孢菌-9-烯-8-酮，由于它可以引起猪的呕吐而得名，主要是由禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)、黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)感染小麦、大麦、燕麦、玉米等谷物产生的单端孢霉烯族毒素。在全世界范围内，呕吐毒素是粮食、饲料、食品的主要污染霉菌毒素之一，严重影响人和牲畜的健康。人畜摄入了被呕吐毒素污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡，其严重危害性已经引起了各国的普遍重视。呕吐毒素对我国谷物类原料的污染相当普遍，其检出率和检出量都是霉菌毒素中最高的一种，据甄阳光等人调查显示，中国饲料和原料呕吐毒素的超标比例接近70％，玉米中呕吐毒素的超标率为57.1％，毒素平均含量为1.01mg/kg，最高含量为2.13mg/kg。由于呕吐毒素在谷物、饲料中的普遍存在性、高含量特性和急慢性毒性，降低或者去除其毒性显得尤为重要与迫切。目前，国内外呕吐毒素脱毒方法主要有物理法、化学处理和生物方法三大类。虽然物理、化学方法脱毒已经取得一定程度的成功，但仍然存在脱毒效果有限、可能造成重要营养物质的丢失、成本较高等缺点，从而限制了这两种方法在实际生产中的应用。生物法主要是利用微生物或其降解产物进行毒素降解的过程，具有可以在温和的条件下使毒素的毒力降低，对原料的感官性状、适口性、营养物质影响较小等优点，同时，还具有安全、环保、高效的特点，被认为是最佳脱毒方法。因此，利用现代生物技术去除粮油或/饲料中呕吐毒素的研究具有良好的应用前景。专利申请CN103243047A中公开了一株高效降解呕吐毒素的枯草芽孢杆菌及其应用，将900μL枯草芽孢杆菌ANSB471发酵液与100μL呕吐毒素(100μg/ml)反应，反应2小时对呕吐毒素的降解率为25％，反应24小时对呕吐毒素的降解率为56％，反应48小时对呕吐毒素的降解率为80％，降解率尚有待提高。另外，现有的降解呕吐毒素的生物法大多是在温和的条件(如温度25-37℃且最高不超过40℃，pH为7左右)下进行，然而，在较高的温度负荷下(如在容器中进行运输期间或在饲料粒化期间的情况下)或苛刻的酸碱性条件下尚无较好的解决办法，这就限制了生物法在降解呕吐毒素中的应用范围。因此，有必要寻找一种高效的且安全性高的，并且在较高的温度负荷或苛刻的酸碱条件下可以使用的生物降解呕吐毒素的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有的呕吐毒素降解过程中存在的上述缺陷，提供了一株枯草芽孢杆菌、含有该菌的菌剂和试剂盒及它们的应用，以及降解呕吐毒素的方法。为了实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.14597。第二方面，本专利技术还提供了一种菌剂，其中，该菌剂含有上述枯草芽孢杆菌。第三方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述枯草芽孢杆菌和/或上述菌剂。第四方面，本专利技术还提供了上述枯草芽孢杆菌、上述菌剂、上述试剂盒在降解呕吐毒素毒素中的应用。第四方面，本专利技术还提供了一种降解呕吐毒素的方法，其中，该方法包括：将上述枯草芽孢杆菌和/或上述菌剂与呕吐毒素污染的样品接触，以降解样品中的呕吐毒素。第五方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术所述的枯草芽孢杆菌和/或本专利技术所述的菌剂。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌可以高效且快速地降解粮油和/或饲料中的呕吐毒素，特别是，即使粮油和/饲料中的呕吐毒素含量高达50ppm以上(优选至少为100ppm，进一步优选至少为150ppm，更进一步优选至少为200ppm)时，该枯草芽孢杆菌也可以高效且快速地降解呕吐毒素，并且对粮油和/或饲料的适口性无影响(即处理前后口味基本无差异)；同时，将该枯草芽孢杆菌添加至受呕吐毒素污染的粮油和/或饲料中，具有安全性。因此，该枯草芽孢杆菌具有良好的应用前景。此外，本专利技术提供的枯草芽孢杆菌还具有高温和酸碱稳定性，这进一步扩大了其应用的范围。本专利技术的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。生物保藏本专利技术提供的菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，并于2017年09月08日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCCNO.14597。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。第一方面，本专利技术提供了一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其中，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.14597。本专利技术提供的枯草芽孢杆菌分离自受呕吐毒素污染的土壤样本(采集地为北京)。所述枯草芽孢杆菌的分离可以采用本领域常规的用于新菌株分离的方法，例如可以采用液相富集法或土壤环流法。液相富集法具体可以包括：称取适量受呕吐毒素污染土壤样品加入到装有LB液体培养基的三角瓶中，加入适量玻璃珠。将三角瓶在28-37℃，160-180rpm下振荡；将土壤混合液转入离心管，取离心后的上清液作为呕吐毒素钝化微生物的来源。将所述上清液接种到含有呕吐毒素的LB液体培养基中，在28-37℃，160-180rpm下振荡培养。用无菌吸管吸取1-2mL，移入另一个富集培养三角瓶中。如此转移三次后，将上清液分别稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7或10-8倍，吸取适量涂布于含有50、100、200或300mg/L的呕吐毒素的LB固体培养基上进行平板划线，28-37℃培养3-4天后，分离单菌落。土壤环流法具体可以包括：称取100g受呕吐毒素污染土壤与适量粒径约为3mm的砂粒混合均匀，置于环流装置的上层。下层装入LB培养基200mL作为环流液。启动空气压缩机，开始驯化过程，期间根据环流液的蒸发情况定期补加环流液。驯化结束后，将下层环流液分别稀释10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7或10-8倍，吸取适量涂布于含有50、100、200或300mg/L的呕吐毒素的LB固体培养基上进行平板划线，28-37℃培养3-4天后，分离单菌落。本专利技术的专利技术人从筛选出的菌株中选取了一株对呕吐毒素降解作用最强的细菌进行了DNA提取与鉴定，鉴定结果显示，该菌株的16srDNA序列与枯草芽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC NO.14597。

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNO.14597。2.一种菌剂，其特征在于，该菌剂含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌。3.根据权利要求2所述的菌剂，其中，所述菌剂含有所述枯草芽孢杆菌的活菌体、死菌体和发酵产物中的至少一种，优选为活菌体和/或发酵产物；优选地，所述菌剂为液态菌剂和/或固态菌剂，优选为固态菌剂。4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和/或权利要求2或3所述的菌剂。5.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌、权利要求2或3所述的菌剂、权利要求4所述的试剂盒在降解呕吐毒素中的应用，优选为在降解粮油和/或饲料中的呕吐毒素中的应用，更优选为在降解玉米中的呕吐毒素中的应用。6.一种降解呕吐毒素的方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1所述的枯草芽孢杆菌和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭剑，苏会波，王靖，唐堂，黄锦，张媛，陈博，佟毅，吴延东，赵雪松，
申请(专利权)人：中粮营养健康研究院有限公司，吉林中粮生化有限公司，中粮集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11