一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法技术

本发明专利技术涉及一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，包括：(1)称取样品置于离心管中，加入乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈，震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液A；残渣加入乙酸乙酯，再进行一次操作，取出上清液B；(2)将上清液A和上清液B混合，干燥，复溶，离心过滤，进行液相色谱‑质谱分析，进行定性和定量分析。本发明专利技术样品前处理高效、简单，采用两步提取的方法，经过简单的净化后，运用高效的仪器分析方法，一次进样，完成200种药物的同时测定，非常适合对水产品中的药物残留进行筛查，通过筛查确定水产品中存在药物的数量和浓度，为水产品质量安全监管和隐患排查提供技术支撑。

A High-throughput Rapid Screening Method for Veterinary Drug Residues in Aquatic Products

The invention relates to a high-throughput rapid screening method for various veterinary drug residues in aquatic products, including: (1) weighing the sample in a centrifugal tube, adding ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt solution and acetonitrile, shaking, ultrasound, scroll, centrifugation, and extracting supernatant A; adding ethyl acetate to the residue, then performing one operation to extract supernatant B; (2) mixing supernatant A and supernatant B, drying. Re-dissolution, centrifugal filtration, liquid chromatography-mass spectrometry analysis, qualitative and quantitative analysis. The sample pretreatment of the invention is efficient and simple. After simple purification, an efficient instrument analysis method is used to complete the simultaneous determination of 200 kinds of medicines at one time. It is very suitable for screening drug residues in aquatic products. The quantity and concentration of drugs in aquatic products are determined by screening, so as to supervise the quality and safety of aquatic products and eliminate hidden dangers. Check to provide technical support.

【技术实现步骤摘要】
一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法
本专利技术属于水产品质量安全领域，特别涉及一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法。
技术介绍
养殖水产品中的药物残留是影响水产品质量安全的主要风险因子。水产品中的药物残留主要来源于养殖过程中渔药使用，由于渔药的使用不规范，存在超剂量或违规使用的情况，导致水产品中药物残留呈现杂乱和未知状态。残留在生物体的药物随着食物链的传递进入人体，进而影响人类的健康，因此应建立高效的检测技术，将药物残留带来的风险控制在较低的水平。目前养殖水产品中的药物残留主要分为两大类，一类是禁用药物，在水产品中不得检出，另一类的限用药物，这类药物允许在水产动物养殖过程中使用，但残留量应满足国际或国内规定的最大残留限量。目前水产品中的药物残留监测模式仅是针对已知的药物进行监测，无法知道产品中是否还存在其他药物，存在严重的漏检现象；另外，每种或每类药物均采用不同的检验方法，要想进行全面检测，必须一个项目一个项目依次检测，不仅检测周期长、成本高、而且耗时耗力。由于检测效率的低下和检测技术的局限性，造成了不能及时全面、准确的了解养殖水产品中药物残留状况，无法知道水产品中是否存在其他药物成分，致使水产品的安全隐患很难被发现，渔业事故在短时间内也很难得到正确的判断和处置。因此，建立高效、高通量的水产品中多种类药物残留同时检测的方法，以一种方法代替多种方法，具有十分重要的意义。利用高效液相色谱-质谱联用技术研究动物源食品中多种类药物残留同时检测方法是目前食品中药物残留检测研究的热点。明楠等人采用QuEChERS结合LC-MS/MS同时测定虾肉中72种兽药残留，样品用酸化乙腈提取，C18固相萃取柱净化，大部分目标化合物的回收率介于61％～119％。王珮等人利用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱对7类45种兽残留检测方法进行了研究，样品经BAP-SPE富集净化，甲醇、甲酸乙腈和甲醇乙酸乙酯依次洗脱，吹干定容上机检测，实现了45种兽药的同时检测，方法LOD在0.50～20.00μg/L之间，稳定性与检测限满足了兽药多残留的筛查检测要求。李诗言等人利用液相色谱-四级杆-飞行时间质谱建立了中华鳖中42种兽药残留的液质快速筛查方法，样品采用乙腈/水提取，经HLB柱净化上机，10min内42种药物得以色谱分离，定量限范围为5～50μg/kg，实现了中华鳖中42种兽药快速定性确证。MarilenaE等人运用HPLC-MS/MS技术，建立了奶粉和鱼肉中143种兽药筛查方法，样品依次加入水(含有甲酸，乙二胺四乙酸钠)溶液、甲醇和乙腈，混合后，采用超声加热的方式进行提取，内标法定量，鱼肉样品中筛查检出限为20μg/kg～200μg/kg。上述兽药残留筛查方法在水产品药物残留检测中起到了一定的作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，该方法样品前处理高效、简单，采用两步提取的方法，经过简单的净化后，运用高效的仪器分析方法，一次进样，完成200种药物的同时测定，非常适合对水产品中的药物残留进行筛查，通过筛查确定水产品中存在药物的数量和浓度，为水产品质量安全监管和隐患排查提供技术支撑。本专利技术提供了一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，包括：(1)称取样品置于离心管中，加入乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈，震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液A；残渣加入乙酸乙酯，再进行一次震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液B；(2)将上清液A和上清液B混合，干燥，加入甲酸乙腈-水溶液复溶，离心过滤，进行液相色谱-质谱分析，与筛查数据库进行对比分析，确定样品中兽药残留的种类，然后采用标准添加法对阳性组分进行定量分析。所述步骤(1)中的样品、乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈的比例为2g:100-300μL:5-20mL。所述乙二胺四乙酸二钠盐溶液的浓度为0.1-0.2M。所述步骤(1)和(2)中的离心温度为5℃，离心速度为10000r/min，离心时间为10min。所述步骤(2)中的干燥方式为40℃N2吹干或减压蒸发至干。所述步骤(2)中的甲酸乙腈-水溶液中乙腈与水的体积比为40:60，甲酸与乙腈的体积比为0.1:99.9所述步骤(2)中的液相色谱-质谱分析条件为：液相色谱条件：色谱柱：AccucoreRP-MS；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；流动相A为0.1％甲酸水溶液,流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；洗脱梯度：0～3.0min，5％B；3.0～22.0min，5％～100％B；22.0～25.0min，100％B；25.0～25.1min，100％～5％B；25.1～30.0min，5％B；质谱分析条件：HESI离子源，喷雾电压：3200V(+)，2800V(-)；鞘气：8L/min；辅气：10L/min；吹扫气：1.5L/min；辅气加热温度：350℃；离子传输管温度：325℃；质谱数据获取模式：FullMS/dd-MS2；FullMS分辨率70000，最大注入时间100ms，扫描范围(m/z)：150～1000；二级质谱分辨率17500，触发阈值为2×105，最大注入时间80ms。本专利技术以水产行业关注的200种兽药为检测目标，该药物分别为：(1)甾体激素类化合物27种；(2)磺胺类抗生素24种；(3)喹诺酮类抗生素18种；(4)硝基呋喃类抗生素4种；(5)四环素类7种；(6)氯霉素类3种；(7)大环内脂抗生素类10种；(8)β-内酰胺类抗生素9种；(9)染料类12种；(10)Beta-受体激动剂类20种；(11)硝基咪唑类7种；(12)镇静剂类16种；(13)苯并咪唑类13种；(14)阿维菌素类4种；(15)头孢菌素类8种；(16)喹噁啉类5种；(17)三嗪类2种；(18)其他农药11种。本专利技术采用两步提取法，将残留在水产品中的极性药物和非极性药物提取出来，然后利用低温高速离心和溶剂溶解等通用的净化技术进行净化，超高压液相色谱-高分辨质谱分析，一次进样，实现了鱼、虾和蟹三种水产品中18类200种药物同时筛查的目的。本方法检出限为1～50μg/kg，其中灵敏度为1μg/kg的化合物达100种、5μg/kg的化合物达41种、10μg/kg的化合物达33种、50μg/kg的化合物达26种。在1、10、50μg/kg三个添加水平下，方法回收率30％～120％之间，精密度在5％～20％之间。本专利技术的定性原则如下：1)保留时间偏差<15s2)目标物母离子/子离子必须同时出现，且传输离子对的信噪比(S/N)≥3；3)母离子质核比偏差<3ppm；碎片离子质核比偏差<20ppm且至少有一个碎片与数据库中匹配时；4)同位素质核比偏差<10ppm、相对丰度偏差<25％、综合比对分>75％。有益效果本专利技术样品前处理高效、简单，采用两步提取的方法，经过简单的净化后，运用高效的仪器分析方法，一次进样，完成200种药物的同时测定，非常适合对水产品中的药物残留进行筛查，通过筛查确定水产品中存在药物的数量和浓度，为水产品质量安全监管和隐患排查提供技术支撑。附图说明图1a和b为36种典型化合物提取离子流图(50ng/mL)；图2为筛查数据库界面；图3为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，包括：(1)称取样品置于离心管中，加入乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈，震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液A；残渣加入乙酸乙酯，再进行一次震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液B；(2)将上清液A和上清液B混合，干燥，加入甲酸乙腈‑水溶液复溶，离心过滤，进行液相色谱‑质谱分析，与筛查数据库进行对比分析，确定样品中兽药残留的种类，然后采用标准添加法对阳性组分进行定量分析。

【技术特征摘要】
1.一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，包括：(1)称取样品置于离心管中，加入乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈，震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液A；残渣加入乙酸乙酯，再进行一次震荡、超声、涡旋、离心，取出上清液B；(2)将上清液A和上清液B混合，干燥，加入甲酸乙腈-水溶液复溶，离心过滤，进行液相色谱-质谱分析，与筛查数据库进行对比分析，确定样品中兽药残留的种类，然后采用标准添加法对阳性组分进行定量分析。2.根据权利要求1所述的一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，其特征在于：所述步骤(1)中的样品、乙二胺四乙酸二钠盐溶液和乙腈的比例为2g:100-300μL:5-20mL。3.根据权利要求2所述的一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，其特征在于：所述乙二胺四乙酸二钠盐溶液的浓度为0.1-0.2M。4.根据权利要求1所述的一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，其特征在于：所述步骤(1)和(2)中的离心温度为5℃，离心速度为10000r/min，离心时间为10min。5.根据权利要求1所述的一种水产品中多种类兽药残留高通量快速筛查方法，其特征在于：所述步骤(2)中的干燥方式为40℃N2吹干或减压蒸发至干。6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：于慧娟，汪洋，孔聪，陈清平，王守英，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31