一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法、制品及其应用技术

本发明专利技术公开了一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖制备方法、制品及其应用，其制备过程主要包括酸洗、超声提取、浓缩、冷藏、低温离心、冻融除胶、酶解、超滤、浓缩、醇沉、洗脱、冻干等步骤，能在生产琼脂的同时获得活性的非琼脂寡糖，提高了产品的经济附加值；所得龙须菜非琼脂寡糖还原糖含量≥55％，硫酸根含量≥15.5％，分子量范围为12‑28Kda，具有较强的抗黑素合成功率，可应用到制备具有抗黑素合成功能的药物、食品和化妆品中。

【技术实现步骤摘要】
一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法、制品及其应用
本专利技术属于海洋资源深加工
，具体涉及一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖制备方法、制品及其应用。
技术介绍
龙须菜(Gracilarialemaneiformis)属于红藻门江蓠科的一种经济型海藻，在粤东、西海区均有广泛分布，是制备琼脂的主要原料。在制琼脂过程中，常用碱水去除龙须菜中的硫酸根，以提高琼脂的凝胶强度，但同时也使大量的小分子水溶性酸性多糖流失。有文献报道，龙须菜中的多糖成分随着硫酸基团的流失，其抗氧化和抗免疫活性能力也随之减弱。因此，从制琼脂的过程中分离并纯化上述非琼脂的酸性多糖，并开发其新的药用价值，不仅有利于提高琼脂的凝胶强度，也有利于提高琼脂生产企业的产品附加值。此外，大量的文献指出龙须菜多糖具有抗氧化、抗癌、提高免疫力等功效，但鲜有提及龙须菜胶性多糖(琼脂类)和非琼脂性多糖在工艺制备和药用活性上的差异。曾有文献报道，经碱处理的琼脂尽管其胶凝度得到提高，但其非琼脂性多糖的得率和免疫活性有明显下降的趋势。基于上述
技术介绍
，本专利技术旨在提供一种在尽可能保障琼脂的凝胶强度的同时，分离、纯化含有更多硫酸酯基团的非琼脂性多糖，并通过一系列酶解手段分离、并纯化出具有有独特生理活性的寡糖，并对上述寡糖在抗黑素合成的功能方面进行研究。
技术实现思路
本专利技术公开了一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法、制品及其应用，提升龙须菜资源的经济附加值，拓宽龙须菜的应用范围，该龙须菜非琼脂寡糖具有抗黑素沉积的作用，能应用于制备具有相应抗黑色素合成的药物、食品和化妆品的制备。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备而成:(1)龙须菜脱盐、干燥、粉碎，加入2-5倍体积比的1％-3％无机酸溶液，70-90℃水浴70-90min，过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往步骤(1)所得藻体中加入6-9倍体积的蒸馏水，以超声波法提取2次，过滤，合并滤液；(3)将步骤(2)所得滤液以减压蒸馏法浓缩至相对密度为1.60-1.85，至4℃冷藏6-8h，4℃离心8-12min，分取胶体；(4)将步骤(3)所得胶体置于-50℃至-80℃冰柜中冷冻4-6h，置4℃放置6-8h解冻，1500rpm/min，4℃离心8-12min，分取上清液；(5)往步骤(4)所得上清液中加入0.5％-2.0％体积比的混合酶，用无机稀酸调整pH值至3.5-4.5，置37℃-55℃水浴36h，过10kDa超滤膜，浓缩至相对密度1.55-1.70，加乙醇至含醇量50％，3000rmp/min离心20min，分取沉淀；(6)将步骤(5)所得沉淀以蒸馏水复溶后，加乙醇至含醇量70％沉淀，100％-60％乙醇梯度洗涤沉淀，室温挥干沉淀至无醇味，冷冻干燥即得所述龙须菜非琼脂寡糖。进一步地，步骤(2)、(5)所述无机酸和无机稀酸为盐酸或硫酸。进一步地，步骤(2)所述超声波法提取的控制条件为：超声功率180-420W，提取温度为45-75℃，提取时间为60-120分钟。进一步地，步骤(5)所述混合酶为纤维素酶和木糖苷酶按2-5：1的比例混合。本专利技术还提供一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖，按照上述方法制备而成。进一步地，本专利技术所述一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖，其还原糖含量≥55％，硫酸根含量≥15.5％，分子量范围为12-28KDa。本专利技术还提供一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖，在制备具有抗黑素合成功能的药物、食品和化妆品中的应用。本专利技术相对于现有技术具有如下有益效果：(1)传统的碱处理龙须菜制琼脂工艺，以去除琼脂中的硫酸基团，提高琼脂凝胶强度为目的，但此过程损失了大量具有生理活性的小分子硫酸酯多糖。本专利技术采用酸处理及冻融分离技术，可在不显著降低琼脂凝胶强度的前提下，从琼脂中分离和纯化非琼脂的含硫酸基团小分子多糖。能在生产琼脂的同时获得活性的非琼脂寡糖，提高了产品的经济附加值。(2)本专利技术所述的酸处理提取超低温冻融制备的非琼脂寡糖，与传统碱处理提取工艺相比，能较大幅度提高非琼脂寡糖的提取率，总还原糖含量也明显更高。(3)本专利技术通过实验发现所述龙须菜非琼脂寡糖富含硫酸基团，可显著抑制因紫外线、药物等因素引起的α-黑素细胞刺激素过度分泌引起的细胞黑素合成增多，而黑素的过度合成是引起皮肤色素沉积的关键因素，本专利技术可应用到抗黑素合成、沉功能的药物、食品和化妆品的制备中，为后续产品的开发提供了技术支持。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此。下述实施例的参数选择并非穷尽性的组合方案，仅以供说明本专利技术的具体实施方法和结果提供参考。实施例1一种龙须菜非琼脂寡糖的制备方法如下：(1)龙须菜洗净、脱盐、干燥、粉碎过4目筛，加入相对于龙须菜3倍体积比的3％盐酸溶液，70℃水浴90min，趁热过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往所得藻体加入9倍体积的蒸馏水，以超声波法提取2次，超声功率180-420W，提取温度为45-75℃，提取时间为60-120分钟；过滤，合并滤液；(3)滤液以减压蒸馏法浓缩至相对密度为1.75，至4℃冷藏6h，1500rpm/min，4℃离心10min，分取胶体；(4)胶体置-80℃冰柜中冷冻5h，置4℃放置6h解冻，1500rpm/min，4℃离心10min，分取上清液；(5)往上清液加入0.5％的混合酶(纤维素酶:木糖苷酶按照2：1比例混合)，加稀盐酸调pH值至4.0，45℃水浴36h，过相对分子量为10kDa的超滤膜，减压蒸馏将滤液浓缩至相对密度1.60，加乙醇至含醇量50％，3000rmp/min离心20min，分取沉淀；(6)沉淀以蒸馏水复溶后，加乙醇至含醇量70％沉淀，100％-60％乙醇梯度洗涤沉淀，沉淀室温下挥干至无醇味，冷冻干燥即得所述龙须菜非琼脂寡糖。实施例2一种龙须菜非琼脂寡糖，其制备方法如下：(1)龙须菜洗净、脱盐、干燥、粉碎过4目筛，加入相对于龙须菜2倍体积比的2％硫酸溶液，80℃水浴80min，过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往所得藻体加入8倍体积的蒸馏水以超声波法提取2次，超声功率180-420W，提取温度为45-75℃，提取时间为60-120分钟；过滤，合并滤液；(3)滤液以减压蒸馏法浓缩至相对密度为1.85，至4℃冷藏7h，1500rpm/min，4℃离心8min，分取胶体；(4)胶体置-70℃冰柜中冷冻6h，置4℃放置5h解冻，1500rpm/min，4℃离心8min，分取上清液；(5)往上清液加入1.0％的混合酶(纤维素酶:木糖苷酶按照3：1比例混合)，稀硫酸调pH至3.5，55℃水浴36h，过相对分子量为10kDa的超滤膜，减压蒸馏将滤液浓缩至相对密度1.55，加乙醇至含醇量50％，3000rmp/min离心20min，分取沉淀；(6)沉淀以蒸馏水复溶后，加乙醇至含醇量70％沉淀，100％-60％乙醇梯度洗涤沉淀，沉淀室温下挥干至无醇味，冷冻干燥即得所述龙须菜非琼脂寡糖。实施例3一种龙须菜非琼脂寡糖，其制备方法如下：(1)龙须菜洗净、脱盐、干燥、粉碎过4目筛，加入相对于龙须菜5倍体积比的1％硫酸溶液，90℃水浴70min，过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往所得藻体加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备而成:(1)龙须菜脱盐、干燥、粉碎，加入2‑5倍体积比的1％‑3％无机酸溶液，70‑90℃水浴70‑90min，过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往步骤(1)所得藻体中加入6‑9倍体积的蒸馏水，以超声波法提取2次，过滤，合并滤液；(3)将步骤(2)所得滤液以减压蒸馏法浓缩至相对密度为1.60‑1.85，至4℃冷藏6‑8h，4℃离心8‑12min，分取胶体；(4)将步骤(3)所得胶体置于‑50℃至‑80℃中冷冻4‑6h，置4℃放置6‑8h解冻，1500rpm/min，4℃离心8‑12min，分取上清液；(5)往步骤(4)所得上清液中加入0.5％‑2.0％体积比的混合酶，用无机稀酸调整pH值至3.5‑4.5，置37℃‑55℃水浴36h，过10kDa超滤膜，浓缩至相对密度1.55‑1.70，加乙醇至含醇量50％，3000rmp/min离心20min，分取沉淀；(6)将步骤(5)所得沉淀以蒸馏水复溶后，加乙醇至含醇量70％沉淀，100％‑60％乙醇梯度洗涤沉淀，室温挥干沉淀至无醇味，冷冻干燥即得所述龙须菜非琼脂寡糖。

【技术特征摘要】
1.一种抗黑素合成的龙须菜非琼脂寡糖的制备方法，其特征在于，按照如下步骤制备而成:(1)龙须菜脱盐、干燥、粉碎，加入2-5倍体积比的1％-3％无机酸溶液，70-90℃水浴70-90min，过滤，弃滤液，藻体晾干；(2)往步骤(1)所得藻体中加入6-9倍体积的蒸馏水，以超声波法提取2次，过滤，合并滤液；(3)将步骤(2)所得滤液以减压蒸馏法浓缩至相对密度为1.60-1.85，至4℃冷藏6-8h，4℃离心8-12min，分取胶体；(4)将步骤(3)所得胶体置于-50℃至-80℃中冷冻4-6h，置4℃放置6-8h解冻，1500rpm/min，4℃离心8-12min，分取上清液；(5)往步骤(4)所得上清液中加入0.5％-2.0％体积比的混合酶，用无机稀酸调整pH值至3.5-4.5，置37℃-55℃水浴36h，过10kDa超滤膜，浓缩至相对密度1.55-1.70，加乙醇至含醇量50％，3000rmp/min离心20min，分取沉淀；(6)将步骤(5)所得沉淀以蒸馏水复溶后，加乙醇至含醇量70％沉淀，100...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴科锋，叶华，吕应年，欧阳佩佩，廖雪华，刘义，李立，
申请(专利权)人：广东医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44