贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用制造技术

技术编号:20755716 阅读:38 留言:0更新日期:2019-04-03 12:21
本发明专利技术涉及贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用,所述的菌种为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)M6,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,其保藏编号为CGMCC No.15628,能够产生包括吲哚乙酸(IAA)、嗜铁素等促生物质,同时,该菌株还具有显著的溶解有机磷功效,此外,该菌对由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的小麦纹枯病具有较好的防治效果。

【技术实现步骤摘要】
贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用
本专利技术涉及一种贝莱斯芽孢杆菌,具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用。
技术介绍
植物真菌病害普遍存在于粮食和蔬菜作物中,由真菌引起的粮食作物病害已引发全球性粮食安全问题,如果能控制真菌病害在主要粮食作物中的传播,在全球范围内每年减少1.25亿吨,减少经济损失600亿以上。小麦是一种世界各地广泛种植的禾本科粮食作物,其总产量位居世界第二,在粮食安全保障体系和农业生产中有着举足轻重的地位,小麦的真菌病害有很多,包括纹枯病、根腐病、全蚀病、赤霉病、白粉病和条锈病等等,据统计,小麦病害一般可造成小麦减产10%~15%,严重的可造成小麦减产30%以上。目前,针对小麦纹枯病缺乏有效抗病品种,因此,针对小麦纹枯病的防治仍然是以化学防治为主,然而,化学农药的大量使用造成环境污染、农产品农药残留和病菌抗药性的产生。随着人们对生态环境的进一步重视以及可持续农业发展的需要,寻找高效、低毒的生物农药已成为一种趋势。同时,随着化学肥料的大面积大量施用,农作物的产量虽然得到了明显提高,但是过度地使用化学肥料同样也带来了一些环境问题,尤其是对土壤和水源生态系统造成富营养化等,因此,使用微生物肥料促进作物生长、提高对肥料的利用率也是未来的发展趋势。贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)于2008年被确定为解淀粉芽孢杆菌的后期异形体,是一个新种资源。目前针对贝莱斯芽孢杆菌的研究已较多,主要集中在应用该菌种进行生物防治的研究,但均没有报道该菌种能够产生吲哚乙酸(IAA)、嗜铁素促生物质,也未涉及贝莱斯芽孢杆菌具有溶解有机磷功效。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种具有贝莱斯芽孢杆菌及其在小麦纹枯病防病促生中的应用,该菌株能够产生包括吲哚乙酸(IAA)、嗜铁素等促生物质,同时,该菌株还具有显著的溶解有机磷功效,此外,该菌对由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的小麦纹枯病具有较好的防治效果。本专利技术所采用的技术方案为:贝莱斯芽孢杆菌,其特征在于:所述的菌种为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)M6,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,其保藏编号为CGMCCNo.15628。所述的贝莱斯芽孢杆菌能溶解土壤中的磷,用于制备土壤改良剂。所述的贝莱斯芽孢杆菌用于制备生物肥,促进土壤中磷元素的有效利用。所述的贝莱斯芽孢杆菌能产生促植物生长素,用于制备促生剂。所述的贝莱斯芽孢杆菌能产生嗜铁素,用于制备促生剂。所述的贝莱斯芽孢杆菌能显著抑制由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的小麦纹枯病,作为小麦纹枯病抗结菌。所述的贝莱斯芽孢杆菌作为作为小麦纹枯病抗结菌,用于制备小麦种植生物有机肥。本专利技术具有以下优点:本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌M6是从设施果蔬园土壤中分离获得,无生态毒性,安全性高;该菌在生长过程中能够产生包括促生长素(IAA)、嗜铁素等促生物质,同时具有溶解磷和抑制小麦纹枯病的功效。因此,利用该菌株制备生物肥能促进土壤中磷元素的有效利用,同时能够产生促进植物生长的IAA和嗜铁素,此外,该微生物对由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的小麦纹枯病具有较好的抑制效果,因此,该菌在小麦生物有机肥及生物农药中的应用前景广阔。附图说明图1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensisi)M6CGMCCNo.15268的菌落照片和显微照片。其中,A为菌落照片,B为显微照片。图2为贝莱斯芽孢杆菌系统进化树。图3为贝莱斯芽孢杆菌产生嗜铁素(菌落周围有透明圈产生)、IAA、溶解有机磷的实验(相比对照组,实验组培养基颜色消失)。其中,A:蛋白酶;B:嗜铁素;C:产IAA;D:溶解有机磷。图4为贝莱斯芽孢杆菌对小麦纹枯病的抑制实验。其中,A:平板实验;B:发酵液的组织离体防效试验。图5为贝莱斯芽孢杆菌对小麦促生的实验。其中,A:促生效果图片;B:促生数据。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行详细的说明。本专利技术涉及一种贝莱斯芽孢杆菌,该菌种为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)M6,分离于陕西省灞桥区的设施果园土壤,于2018年4月19日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,其保藏编号为CGMCCNo.15628。该菌具有促进植物生长的功效,并可在小麦纹枯病防治中得到应用,具体为:1、该菌种能溶解土壤中的有机磷,用于制备土壤改良剂;用于制备生物肥,促进土壤中磷元素的有效利用。2、该菌种能产生促植物生长素(IAA)和嗜铁素,用于制备促生剂。3、该菌种能显著抑制由立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)引起的小麦纹枯病,作为小麦纹枯病抗结菌,用于制备小麦种植生物有机肥。因此,该菌无生态毒性,安全性高,在小麦生物有机肥及生物农药中的应用前景广阔。此外,该菌能够产生抗逆性强的芽孢,能够与有机肥等复配形成稳定的商品制剂产品。实施例1:贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensisi)M6的分离、筛选与鉴定:(1)分离与筛选:从陕西省灞桥区设施大棚中,采集土壤,用保鲜袋带回;称取土样10g,加入装有90mL无菌水的三角瓶中,三角瓶中装有玻璃珠30颗,37℃、180rpm震荡30min,静置后获得土壤悬液;将土壤悬液稀释成10-5、10-6、10-7,吸取不同稀释度的土壤悬液100µL涂布于NA培养基上,置于37℃培养24h,挑取颜色、形态等不同的细菌单菌落纯化、保存;采用平板对峙法测定分离到的细菌对植物病原真菌的抑菌活性。将草莓灰霉病菌、番茄灰霉病菌和黄瓜灰霉病菌分别在PDA平板上活化3d,用打孔器在菌落边缘打取菌块(直径5mm),接种到PDA平板中央。培养1d后,在距离灰霉病菌块2cm处的2个对称点处接种待测细菌,25℃培养,随时观察抑菌结果。采用下列公式计算:抑菌率(%)=(各对照菌落半径-各处理菌落半径)/各对照菌落半径×100%。试验结果如图2和表1所示,由此可以看出:M6菌株对各种灰霉病菌有较好的拮抗作用。(2)鉴定:将筛选到的抑菌效果较好的M6菌株进行形态学和16SrDNA序列鉴定。形态学观察:将M6菌株在NA培养基平板上划线接种,37℃培养18h,观察菌落特征。菌落呈白色、半透明、稍隆起、圆形扁平、光滑湿润有粘性(见图1)。16SrDNA序列测定:采用TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKit,提取M6菌株的基因组DNA,根据细菌通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)进行PCR扩增。PCR扩增反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,54℃退火30s,72℃延伸lmin30s,共30个循环;最后72℃延伸1Omin。PCR扩增产物送去华大基因有限公司进行测序。经测序,M6菌株的16SrDNA序列长度为1458bp,序列为SEQIDNO:1。将测序结果在NCBIGenBank上进行序列比对,发现其与贝莱斯芽胞杆菌(BacillusvelezersisFZB42)的16SrDNA序列相似性高达99%,初步确定sw1本文档来自技高网
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【技术保护点】
1.贝莱斯芽孢杆菌,其特征在于:所述的菌种为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)M6,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,其保藏编号为CGMCC No.15628。

【技术特征摘要】
1.贝莱斯芽孢杆菌,其特征在于:所述的菌种为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)M6,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,其保藏编号为CGMCCNo.15628。2.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用,其特征在于:所述的贝莱斯芽孢杆菌能溶解土壤中的磷,用于制备土壤改良剂。3.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用,其特征在于:所述的贝莱斯芽孢杆菌用于制备生物肥,促进土壤中磷元素的有效利用。4.根据权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用,其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员:安超薛文娇马赛箭刘晨丁浩
申请(专利权)人:陕西省微生物研究所
类型:发明
国别省市:陕西,61

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