含有从脂肪来源的干细胞提取的外排体作为活性成分的用于预防或治疗肺纤维化的组合物制造技术

本发明专利技术涉及组合物，其用于预防或治疗肺纤维化并且包含从脂肪来源的干细胞提取的外排体作为活性成分；所述外排体在制备用于预防或治疗肺纤维化的药物中的用途；以及肺纤维化治疗方法，所述方法包括向对象施用含有所述外排体作为活性成分的药物组合物的步骤。从根据本发明专利技术的脂肪来源的干细胞提取的外排体包含与肺纤维化治疗相关的生长因子，例如HGF(肝细胞生长因子)和IL‑10，并且可以显著地减少肺纤维化诱导的试验动物模型中的纤维化区域。因此，可有效地用于预防或治疗肺纤维化。此外，在使用根据本发明专利技术的外排体的肺纤维化治疗中，几乎不用担心由在典型的肺纤维化治疗发生时使用的基于类固醇的药物和抗氧化剂引起的副作用，并且外排体可以通过基于注射或摄入的施用自然地输送至肺部而不用手术处理，并且因此，可以方便且经济地治疗肺纤维化。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含有从脂肪来源的干细胞提取的外排体作为活性成分的用于预防或治疗肺纤维化的组合物
本公开内容涉及用于预防或治疗肺纤维化的组合物，其含有从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分，所述外排体在制备用于预防或治疗肺纤维化的药物中的用途以及用于预防肺纤维化的方法，所述方法包括向对象施用含有所述外排体作为活性成分的药物组合物的步骤。
技术介绍
肺纤维化是指由于当慢性炎性细胞浸润到肺泡壁中时诱导组织的纤维化，肺组织发生严重的结构损伤的疾病。随着纤维化的进行，肺组织变硬并且肺泡壁变厚。结果，血液中的氧供应减少，从而导致呼吸短促。目前，还没有用于完全恢复已经发生纤维化的肺组织的治疗方法。除了早期检测并治疗以及肺移植的一些病例外，大多数患者在症状出现后3至5年内死亡。为了治疗早期检测到的肺纤维化，使用基于类固醇的药物例如类固醇、硫唑嘌呤或环磷酰胺，抗氧化剂例如乙酰半胱氨酸，生长因子例如细胞因子IFN-γ等。尽管自2000年以来一直在研究和报道使用基于类固醇的药物和抗氧化剂的治疗方法，但没有明确证实有效力的药物。报道称目前可用的药物当长期施用时会引起全身性副作用或引起耐受性副作用。最近引起很多关注的涉及施用生长因子的治疗方法是使用“干扰素”的相对基础的治疗方法，“干扰素”抑制已知作为肺纤维化中的重要因子的TGF-β的产生。因为该治疗方法是基于对疾病原因的分析，所以与使用基于类固醇的药物或抗氧化剂的治疗方法相比它具有更少的副作用，并且已经报道了多种治疗方法例如注射剂、气溶胶等。然而，由于肺纤维化的确切原因尚不清楚，因此单一成分(例如干扰素)的治疗效果可能是暂时的并且可能仅在某些患者中发生。因此，需要进行持续的研究和临床试验。为了克服这些局限性，报道了使用能够产生和调节多种因子的干细胞和所述干细胞的培养物用于治疗肺纤维化的研究(韩国专利登记号10-0837167和韩国专利公开号10-2009-0122415)。然而，干细胞的最大问题是无法确认其准确效力，因为它们体内存活率在患者之间不一致，并且无法避免干细胞向癌细胞发展的风险。此外，含有从干细胞分泌的多种生长因子的培养物可引起意想不到的问题，因为它们除生长因子外还含有多种细胞废物。在此背景下，本公开内容的专利技术人已经一直致力于开发用于肺纤维化的治疗剂，并且因此已经鉴定出从脂肪来源的干细胞分离的外排体含有与肺纤维化的治疗相关的生长因子，例如HGF(肝细胞生长因子，hepatocytegrowthfactor)和IL-10，并且在肺纤维化诱导的试验动物模型中表现出对肺纤维化的优异治疗效果。公开内容技术问题本公开内容旨在提供用于预防或治疗肺纤维化的药物组合物，其含有从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分。本公开内容还旨在提供所述外排体在制备用于预防或治疗肺纤维化的药物中的用途。本公开内容还旨在提供用于预防肺纤维化的方法，其包括向对象施用含有所述外排体作为活性成分的药物组合物的步骤。技术方案为了解决上述问题，本公开内容提供了用于预防或治疗肺纤维化的组合物，其包含从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分，所述外排体在制备用于预防或治疗肺纤维化的药物中的用途以及用于预防肺纤维化的方法，所述方法包括向对象施用含有所述外排体作为活性成分的药物组合物的步骤。在下文中，详细描述了本公开内容。在一个方面，本公开内容提供了用于预防或治疗肺纤维化的药物组合物，其含有从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分。在本公开内容中，术语“干细胞”是指这样的细胞，由于其在细胞环境下在存在适当信号的情况下的多能性，不仅可以自我更新而且还可以分化成多种细胞类型，包括脂肪、骨髓、脐带血、胎盘等，并且可用于治疗多种细胞损伤性疾病，例如心肌梗塞、脑梗塞、退行性关节炎、骨折等。在本公开内容中，干细胞可以是自体或同种异体干细胞，并且可来源于任何动物物种，包括人和非人哺乳动物。在本公开内容中，术语“脂肪来源的干细胞”是指来源于脂肪组织的干细胞。脂肪组织为收获干细胞提供了良好的条件，原因是可以容易地取得大量组织。此外，脂肪来源的干细胞在培养时表现出稳定的生长和增殖，并且可以分化成多种细胞类型。报道称，干细胞不但分化为脂肪组织，而且还分化为间充质组织，例如软骨、骨骼、神经组织、血管组织等，以及其他多种组织例如肝、肾、心血管组织等。在本公开内容中，术语“外排体”是指从细胞分泌的40nm至120nm大小的纳米囊泡，并且包括免疫学上重要的蛋白质主要组织相容性复合物(MHC)和热休克蛋白、诱导强烈的抗肿瘤免疫应答的抗炎微小RNA和调节胶原蛋白的积累的微小RNA。此外，已知它与其他细胞或组织结合并发挥多种作用，例如膜组分、蛋白质和RNA等的转运。本公开内容的外排体是来源于干细胞的外排体并且可来源于脂肪来源的干细胞、脐带来源的干细胞或骨髓来源的干细胞，但不限于此。因为来源于干细胞的外排体含有与相应干细胞的增殖、分化和再生相关的基因、蛋白质、生长因子等，所以它可以在组织再生中发挥重要作用。具体地，可从本公开内容的脂肪来源的干细胞分离含有起源细胞的遗传信息、蛋白质和生长因子的外排体。分离的外排体可具有干细胞的基本特征并且可包含组织再生所必需的生长因子、生物活性蛋白质、基因等。在本公开内容的一个示例性实施方案中，已经鉴定来源于脂肪来源的干细胞的外排体含有与肺纤维化的治疗相关的生长因子，例如HGF(肝细胞生长因子)、白细胞介素-10等(图3，B)。可通过本领域已知的外排体分离方法获得外排体。它可通过包括以下步骤的分离方法获得，但不限于此：1)在正常培养基中培养干细胞，然后在无血清、无抗生素的培养基中传代培养的步骤；2)回收细胞培养物的上清液的步骤；3)通过离心所回收的细胞培养物的上清液来去除细胞碎片的步骤；以及4)通过多过滤系统过滤去除了细胞碎片的细胞培养上清液获得分离/纯化的外排体的步骤。具体地，在步骤1)中，干细胞可以是脂肪来源的干细胞、脐带来源的干细胞或骨髓来源的干细胞，但不限于此。例如，它可以是脂肪来源的干细胞。脂肪来源的干细胞可以是来源于人或动物的干细胞。在步骤1)中，干细胞可以在常氧条件或低氧条件下培养，但不限于此。常氧条件可以是正常氧浓度的培养条件，即，其中供应21％的氧(O2)，但不限于此，或者其中不向细胞培养基添加低氧细胞敏化剂的培养条件。低氧细胞敏化剂是诱导低氧条件的物质，并且可选自氯化钴、去铁草酰胺(desferrioxamine)和二甲基草酰甘氨酸(dimethyloxalylglycine，DMOG)，但不限于此。低氧条件可以是低氧浓度的培养条件，即，其中供应10％或更少的氧(O2)，但不限于此，或者其中向细胞培养基添加低氧细胞敏化剂的培养条件。低氧浓度可以是0.5％至10％、0.5％至5％或0.5％至2％的氧浓度，但不限于此。低氧细胞敏化剂与如上所述相同。在本公开内容的一个示例性实施方案中，通过向用于培养脂肪来源的干细胞的培养基添加100μM氯化钴(II)六水合物(CoCl2·6H2O)来诱导低氧培养条件(图5，A)。在步骤1)中，正常培养基可以是本领域常用的任何培养基。可使用DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)、MEM(最小必需培养基)或RPMI1640(RoswellParkMemo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于预防或治疗肺纤维化的药物组合物，其包含从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.08.05 KR 10-2016-00997781.用于预防或治疗肺纤维化的药物组合物，其包含从脂肪来源的干细胞分离的外排体作为活性成分。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述外排体是从在常氧条件下培养的脂肪来源的干细胞分离的。3.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述外排体是从在低氧条件下培养的脂肪来源的干细胞分离的。4.根据权利要求3所述的药物组合物，其中所述低氧条件是由0.5％至10％的氧或由低氧细胞敏化剂诱导的。5.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述外排体包含肝细胞生长因子(HGF)和白细胞介素-10。6.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于气管内施用或吸入。7.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述药物组合物是注射剂。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中所述注射剂包含浓度为5×108至5×1010个颗粒/kg的外排体。9.从脂肪来源的干细胞分离的外排体在制备用于预防或治疗肺纤维化的药物中的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述外排体是从在常氧条件下培养的脂肪来源的干细胞分离的。11.根据权利要求9所述的用途，其中所述外排体是从在低氧条件下培养的脂肪来源的干细胞分离的。12.根据权利要求11所...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵容佑，崔志淑，廉承镐，丁软齐，
申请(专利权)人：胞外体干细胞株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国,KR