本发明专利技术提供了一种c‑Met特异性抗体、组合物及试剂盒。所述c‑Met特异性抗体包含轻链CDR区和重链CDR区，所述轻链CDR区包含CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3，所述重链CDR区包含CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3。所述c‑MET抗体的优点包括：对c‑MET的亲和力强、特异性好，既无交叉反应，又稳定性好，能够在4℃下长时间保存。上述优点使得该c‑MET抗体及其衍生的组合物、试剂盒等产品有利于c‑MET的检测。
【技术实现步骤摘要】
一种c-Met特异性抗体、组合物及试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，特别涉及c-Met特异性抗体、组合物及试剂盒。
技术介绍
受体酪氨酸激酶(c-Met)是由原癌基因Met编码，其前体蛋白分子量为140KD，经糖基化作用后形成170KD的糖蛋白，进而切割成50KD的α亚基和145KD的β亚基，两个亚基以二硫键相连形成190KD的成熟受体蛋白，位于细胞膜上。β亚基有胞外区、跨膜区和胞内区，α亚基只有胞外部分。α亚基和β亚基的胞外区是配体识别部位，而胞内部分具有酪氨酸激酶活性。c-Met的配体为肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)，HGF与c-Met胞外域结合形成一个紧密复合体，诱导受体的多聚化、内吞、胞内激酶结构域中多个酪氨酸残基的磷酸化，从而激活多条信号级联通路，调控细胞的生长、迁移、增殖和存活。c-Met的异常激活可通过非HGF依赖性机制发生，如Met基因的突变、基因扩增及转录水平上调等。c-Met还可通过与EGFR的相互作用而被激活，与酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的耐药性有关。c-Met通路异常与肿瘤的发展、侵袭及转移密切相关，目前已在多种人类恶性肿瘤如肺癌、胃癌、乳腺癌等中发现异常高水平表达的c-Met。基于c-Met基因表达与肿瘤发生的相关性、c-Met过表达对EGFR-TKI的抗性，以及c-Met与EGFR-TKI间的协同效应，如何同时快速、准确地检测c-Met蛋白的表达情况对肿瘤患者的用药选择具有重要意义。免疫检测法由于操作简单、耗时短、成本相对较少，已经成为目前检测c-Met蛋白表达的主要方法。而c-Met蛋白的免疫检测法依托于c-Met蛋白抗体，c-Met蛋白抗体的优劣直接影响检测结果的准确性，因此需要一种特异性强、稳定性好的c-Met特异性抗体。其除了可用于c-Met基因表达检测外，还可能用于c-Met-HGF信号通路的靶向治疗。鉴于此，提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术提出一种与常规c-Met抗体不同的非重叠表位结合的c-Met抗体，其可有效应用于c-Met基因表达检测。为了实现上述目的，特采用以下技术方案：一种c-Met特异性抗体，包含轻链CDR区和重链CDR区，所述轻链CDR区包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述重链CDR区包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；其中，所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO：1～3所示；所述CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO：4～6所示。本专利技术还涉及组合物，所述组合物包括前述c-Met特异性抗体。进一步，所述c-Met抗体在所述组合物中的浓度为0.1～0.8μg/mL，例如，0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.4μg/mL、0.5μg/mL或0.8μg/mL。进一步，所述组合物中还包括抗体稳定剂。所述抗体稳定剂包括糖、醇类、生物碱、水溶性蛋白、无机盐和离子螯合剂中的一种或多种。其中，所述糖选自葡萄糖、果糖、蔗糖、鼠李糖、岩藻糖或海藻糖中的一种或多种；所述醇类选自甘油、山梨醇、甘露醇中的一种或多种；优选地，所述抗体稳定剂包括葡萄糖、山梨醇、甜菜碱、明胶、氯化钠、EDTA、Tween-20、Proclin-300(生物防腐剂)；更优选地，所述抗体稳定剂包括0.2-3％(质量比)葡萄糖、1-3％(质量比)山梨醇、0.2-4％(质量比)甜菜碱、0.05-0.1％(质量比)明胶、1-3％(质量比)的氯化钠、0.1-0.2％EDTA、0.1-2％(体积比)Tween20、0.005-0.05％(体积比)Proclin-300；最优选地，所述抗体稳定剂包括1％(质量比)葡萄糖、1.5％(质量比)山梨醇、2％(质量比)甜菜碱、0.5％(质量比)明胶、1.3％(质量比)的氯化钠、0.1％EDTA、1％(体积比)Tween20、0.01％(体积比)Proclin-300。抗体主要是蛋白质，要保持抗体的活性，主要是保持抗体蛋白空间结构的稳定。所述的抗体稳定剂中糖类可以与蛋白分子形成氢键，代替了蛋白质极性基团周围的水分子，稳定了蛋白质的高级结构，起到保护抗体活性的作用；甘油、山梨醇可以保持抗原抗体表面的滋润，使其不至于因失水而失活。另外一些水溶性蛋白或化学惰性的高分子物质的聚合物(如PEG等)因其分子量大，能够在抗原抗体表面形成一种保护膜，使蛋白结构免遭破坏。离子螯合剂有多重功效，如抗氧化、防腐，亦可防止一些离子沉积，Proclin-300可以抑制微生物的生长。本专利技术还涉及一种c-MET检测试剂盒，所述试剂盒包括前述c-Met特异性抗体或组合物。进一步，所述试剂盒中还包括其他辅助检测试剂。所述其他辅助检测试剂包括抗所述c-MET抗体的二抗、封闭液和内源性过氧化物酶阻断剂中的一种或多种，其中所述二抗标记有显色剂。进一步，所述显色剂选自荧光标记、酶、金属离子或同位素。优选地，所述显色剂为辣根过氧化物酶，所述试剂盒还包括显色底物DAB。与现有技术相比，本专利技术提供的试剂盒具有以下优势：本专利技术提供一种c-MET抗体及其衍生产品，所述抗体的优点包括：对c-MET的亲和力强、特异性好，既无交叉反应，又具有良好稳定性，同时能够长时间保存。上述优点使得该c-MET抗体及其衍生的组合物、试剂盒等产品有利于在实际c-MET检测中进行推广应用。附图说明图1为实施例8所述试剂盒对NCI-H441细胞的免疫组化染色结果；图2为实施例8所述试剂盒对MCF-7细胞的免疫组化染色结果；图3为实施例8中阴性试剂对NCI-H441细胞的免疫组化染色结果；图4为实施例12所述试剂盒对c-MET高表达的非小细胞肺癌样本的免疫组合染色结果；图5为实施例12所述试剂盒对c-MET低表达的非小细胞肺癌样本的免疫组合染色结果。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，但并不局限于此。以下实施例中所采用的分子生物学实验技术，如无特殊说明，通常按照常规方法操作，具体可参见《分子克隆实验指南》(第三版)(SambrookJ,RussellDW，JanssenK,ArgentineJ.黄培堂等译，2002，北京：科学出版社)，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1c-MET单克隆抗体的制备1.免疫动物购买重组人Met(c-Met)蛋白(ab84806)作为免疫抗原，与弗氏完全佐剂1:1混合(每只小鼠的免疫抗原用量为100μg)，制备成"油包水"乳状液，免疫8-12周龄雌性Balb/c小鼠，免疫方式为皮下多点注射；两周之后，将免疫抗原与不完全弗氏佐剂混合(每只小鼠的免疫抗原用量为50μg)，对所述小鼠进行加强免疫，免疫方式为皮下多点注射；每隔两周以同样的方法进行加强免疫，共加强免疫3次。最后一次加强免疫采用静脉注射，免疫后的第3天，于小鼠眼眶后静脉丛采血并离心分离得到血清。采用方阵滴定法确定重组人Met(c-Met)蛋白的最佳包被浓度并以该浓度包被酶标板，其中空白对照以不含抗原的包被液包被。倍比稀释(起始稀释浓度1×10-2μg/mL，稀释范围为1×10-2～1×10-7μg/mL)待测小鼠免疫血清，以小鼠免疫前血清为阴性对照，间接ELISA方法检测血清的抗体效价。酶标仪上测定OD4本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种c‑Met特异性抗体，其特征在于包含轻链CDR区和重链CDR区，所述轻链CDR区包含CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3，所述重链CDR区包含CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3；所述CDR‑L1、CDR‑L2和CDR‑L3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1～3所示；所述CDR‑H1、CDR‑H2和CDR‑H3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4～6所示。
【技术特征摘要】
1.一种c-Met特异性抗体，其特征在于包含轻链CDR区和重链CDR区，所述轻链CDR区包含CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述重链CDR区包含CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；所述CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的氨基酸序列分别如SEQIDNO：1～3所示；所述CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的氨基酸序列分别如SEQIDNO：4～6所示。2.一种组合物，其特征在于包含如权利要求1所述的c-Met特异性抗体。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于所述c-Met抗体在所述组合物中的浓度为0.1～0.8μg/mL。4.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于还包括抗体稳定剂。5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述抗体稳定剂包括糖、醇类、生物碱、水溶性蛋白、无机盐和离子螯合剂中的一种或多种。6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于所述糖选自葡萄糖、果糖、蔗糖、鼠李糖、岩藻糖或海藻糖中的一种或多种；所述醇类选自甘油、山梨醇、甘露醇中的一种或多种；优选地，所述抗体稳定剂包括葡萄糖、山梨醇、甜菜碱、明胶、氯化钠、EDTA、Tween-20、Proclin-300；更优选地，所述抗体稳...
【专利技术属性】
技术研发人员：许嘉森，吴诗扬，刘志明，刘苏燕，黄洁芬，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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