Peroxiredoxin 4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种Peroxiredoxin 4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途。本发明专利技术能够从提高颗粒细胞抵御氧化应激能力的角度、以及卵母细胞抗氧化的作用，来改善体外培养未成熟卵母细胞的成熟率，也能够通过细胞内抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化，提高辅助生殖过程中卵母细胞受精率和临床妊娠率。

【技术实现步骤摘要】
Peroxiredoxin4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途
本专利技术属于辅助生殖、胚胎培养领域。具体的说是涉及Peroxiredoxin4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途。
技术介绍
随着年龄增长、病理条件下内环境的改变而导致的氧化应激/ROS损伤都将影响卵泡的发育。这是由于在病理状态下，颗粒细胞的氧化应激可导致细胞发生凋亡,影响颗粒细胞的保护及调节功能,从而影响卵子的发育。另一方面，辅助生殖治疗中的体内或体外已然成熟的卵子，在授精之前进行体外培养的过程中，由于氧化应激反应使其老化从而影响卵母细胞质量、影响授精能力和胚胎发育潜能，降低临床妊娠率。近些年来，胚胎移植技术已在动物引种和改良方面广泛应用，已成为体外受精、嵌合体、转基因和克隆动物实现的应用技术。在体外受精、转基因、克隆以及试管婴儿等胚胎生物技术中，经常会涉及到未成熟卵体外培养成熟（IVM），不同的未成熟卵培养液及培养方法会影响未成熟卵体外培养的成熟率、受精率及临床妊娠率。因此，如何提高未成熟卵体外培养成熟率一直是胚胎培养领域的关注焦点。现有未成熟卵体外培养成熟技术中，大部分技术焦点在于如何提高未成熟卵母细胞自身成熟率，在基础培养液中添加激素类、血清类及生长因子类(EGF)等。但是，目前还没有通过改善卵丘细胞-卵母细胞复合体（COC）颗粒细胞的氧化应激从而提高未成熟卵体外发育成熟的方法。目前普遍认为卵泡内产生的活性氧（ROS）和氧自由基，例如OH、O2以及H2O2，特别是排卵过程中产生的活性氧，不利于卵母细胞发育的。调节卵泡中活性氧和抗氧化剂之间的平衡，对于卵母细胞发育成熟和颗粒细胞功能起着关键作用。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术提出一种Peroxiredoxin4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途。进一步的，提出一种Peroxiredoxin4蛋白在调节体外培养卵母细胞中活性氧和抗氧化之间平衡的用途。进一步的，提出一种Peroxiredoxin4蛋白在抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡发挥调节作用的用途，进一步的，Peroxiredoxin4蛋白通过颗粒细胞内及卵母细胞自身的抗氧化应激机制发挥改善未成熟卵母细胞体外培养成熟的用途。进一步的，提出一种Peroxiredoxin4蛋白在抑制H2O2导致的卵丘扩展指数及卵母细胞MII成熟率下降的用途；以及，Peroxiredoxin4蛋白在抑制ROS导致的卵丘扩展指数及卵母细胞MII成熟率下降的用途。进一步的，提出一种Peroxiredoxin4蛋白通过细胞内抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化的用途，具体的，提出一种Peroxiredoxin4蛋白通过颗粒细胞内及卵母细胞自身的抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化的用途。进一步的，本专利技术还提出一种制备控制卵泡中活性氧和抗氧化剂之间平衡的试剂，该试剂中含有Peroxiredoxin4蛋白，还含有体外培养试剂上内允许添加的辅料。。所述试剂为卵母细胞培养液和体外未成熟卵培养液，还包含CZB培养液、KSOM培养液、MEM培养液、HTF培养液中的任何一种培养液，是作为基础培养基。以上所述基础培养基皆为本领域技术人员悉知的商品化培养试剂。进一步的，本专利技术还提出一种抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡发挥调节作用的试剂，该试剂的组合物含有Peroxiredoxin4蛋白。所述试剂为卵母细胞培养液和体外未成熟卵培养液，还包含CZB培养液、KSOM培养液、MEM培养液、HTF培养液中的任何一种培养液，是作为基础培养基。进一步的，本专利技术还提出一种抑制卵泡体外培养中外源性活性氧簇（ROS）导致的卵丘扩展指数及卵母细胞MII成熟率下降的试剂，该试剂的组合物中含有Peroxiredoxin4蛋白。所述试剂为卵母细胞培养液和体外未成熟卵培养液，还包含CZB培养液、KSOM培养液、MEM培养液、HTF培养液中的任何一种培养液，是作为基础培养基。进一步优选的，成熟卵子体外培养、体外未成熟卵培养过程中，所述卵母细胞体外培养液中Peroxiredoxin4蛋白的浓度为5-100μg/ml。较佳地，未成熟卵体外培养液中Peroxiredoxin4蛋白的浓度为15-25μg/ml。优选地，所述Peroxiredoxin4蛋白的浓度为20μg/ml。进一步的，本专利技术还提出一种提高未成熟卵细胞体外培养成熟率的培养方法，包括如下步骤：从物种来源体内取出未成熟卵的步骤；所述物种来源为人类和哺乳动物，哺乳动物包括小鼠、大鼠、猪、牛、羊、或者灵长类动物；将未成熟卵放置在含有Peroxiredoxin4蛋白的培养液中持续培养的步骤；培养的条件为37℃、5%CO2和饱和湿度，持续培养的时间为4—24小时，所述未成熟卵的物种来源与所述Peroxiredoxin4蛋白的物种来源可以相同，也可以不相同，在物种来源不相同的情况下，两个物种产生的Peroxiredoxin4蛋白之间应具有相同或者相似的功能。进一步的，本专利技术还提出一种延缓体外培养卵母细胞老化的培养方法，包括如下步骤：从物种来源体内取出成熟卵子的步骤；所述物种来源为人类和哺乳动物，哺乳动物包括小鼠、大鼠、猪、牛、羊、或者灵长类动物；将成熟卵子放置在含有Peroxiredoxin4蛋白的培养液中持续培养的步骤；培养的条件为37℃、5%CO2和和饱和湿度，持续培养的时间为3—6小时直到授精，所述成熟卵子的物种来源与所述Peroxiredoxin4蛋白的物种来源可以相同，也可以不相同，在物种来源不相同的情况下，两个物种产生的Peroxiredoxin4蛋白之间应具有相同或者相似的功能。进一步的，本专利技术还提出：Peroxiredoxin4蛋白在体内具有调节颗粒细胞内及卵母细胞自身的活性氧和抗氧化之间平衡、抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡的作用。本专利技术的Peroxiredoxin4蛋白具有调节颗粒细胞内及卵母细胞自身的活性氧和抗氧化之间平衡、抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡的作用。Peroxiredoxin4蛋白的用途不限于Peroxiredoxin4蛋白通过颗粒细胞内及卵母细胞自身的抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化的用途，制备控制卵泡中活性氧和抗氧化剂之间平衡的试剂，以及抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡而发挥调节作用的试剂，还包括Peroxiredoxin4蛋白作为药物和药物复方成分的其他用途，应用于促进卵母细胞成熟、延缓卵巢衰老。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种Peroxiredoxin4蛋白增强体外培养卵母细胞抗氧化作用的用途。本专利技术能够从提高颗粒细胞抵御氧化应激能力的角度、以及卵母细胞抗氧化的作用，来改善体外培养未成熟卵母细胞的成熟率，能够通过细胞内抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化，提高辅助生殖过程中卵母细胞受精率和临床妊娠率。关于本专利技术的优点可以藉由以下的专利技术详述及所附图式得到进一步的了解。附图说明图1为Peroxiredoxin4蛋白在胎儿期、成熟期、老年期表达量状况图；其中A/B/C:12h(胎儿期)D/E/F:3w(青春期)G/H/I:8w(成熟期)J/K/L:18m(老年期)C/F/I/L:阴参；图2为Peroxiredoxin4主要表达与小鼠卵巢颗粒细胞中，及随生长发育表达模式图；图3为Peroxired本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Peroxiredoxin4蛋白在调节体外培养卵母细胞中活性氧和抗氧化之间平衡的用途。

【技术特征摘要】
1.Peroxiredoxin4蛋白在调节体外培养卵母细胞中活性氧和抗氧化之间平衡的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：Peroxiredoxin4蛋白在抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡发挥调节作用的用途。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：Peroxiredoxin4蛋白在抑制H2O2导致的卵丘扩展指数及卵母细胞MII成熟率下降的用途。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于：Peroxiredoxin4蛋白通过颗粒细胞内及卵母细胞自身的抗氧化应激机制改善未成熟卵母细胞体外培养成熟的用途。5.如权利要求1所述的用途，其特征在于：Peroxiredoxin4蛋白通过颗粒细胞内及卵母细胞自身的抗氧化应激机制延缓卵母细胞老化的用途。6.一种制备控制卵泡中活性氧和抗氧化剂之间平衡的试剂，其特征在于：所述试剂中含有Peroxiredoxin4蛋白，还含有体外培养试剂内允许添加的辅料。7.一种抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡而发挥调节作用的试剂，其特征在于：该试剂组合物含有Peroxiredoxin4蛋白。8.一种抑制卵泡体外培养中外源性活性氧簇导致的卵丘扩展指数及卵母细胞MII成熟率下降的试剂，其特征在于：该试剂含有Peroxiredoxin4蛋白。9.如权利要求6所述的制备控制卵泡中活性氧和抗氧化剂之间平衡的试剂，其特征在于：所述试剂为体外卵母细胞培养液和未成熟卵培养液，包含CZB培养液、KSOM培养液、HTF培养液、MEM培养液中的任何一种培养液，是作为基础培养基。10.如权利要求7所述的抵御颗粒细胞氧化应激导致的细胞凋亡而发挥调节作用的体外试剂，其特征在于：所述试剂为体外未成熟卵培养液，还包含CZB培养液、KSOM培养液、HTF培养液、MEM培养液中的任何一种培养液，是作为基础培养基。11.如权利要求8所述的抑制卵泡体外培养中...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟艳，刘嘉茵，钱易，崔毓桂，严正杰，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32