一种荧光分析方法和装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种荧光分析方法和装置，具体地，涉及一种无样品垫(优选地可进一步无结合垫)、基于荧光猝灭免疫层析原理的测试片及检测方法。本发明专利技术对原有层析试纸条结构进行简化，去除样品垫，却意外地发现变异系数显著减小。本发明专利技术方法仅通过测量所述测试区的荧光强度的变化来测定待测物的数量，专属性强；能够检测极低浓度待测物的数量，可同时对待测物质进行定性与定量分析。本发明专利技术方法灵敏度更高、定量更准确、变异系数更低、稳定性高、操作简便快捷、成本低廉、适合于现场快速定性定量检测。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光分析方法和装置
本专利技术属于体外检测
，具体地涉及一种基于测量荧光强度的分析方法和装置。
技术介绍
在免疫检测领域中，常常需要对各类抗原或抗体进行定性或定量检测。现有技术中，以“和双抗夹心”为基础衍生出多种免疫反应分析方法，如：放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法、时间分辨荧光法和荧光免疫法等，可用于确定病原微生物，对人体的特异性蛋白定量检测，从而对疾病进行辅助诊断或监测等等，用途非常广泛。这类免疫反应分析方法，通常将捕获抗体固定于固相载体，然后与抗原(目标蛋白)反应，洗涤后再与标记抗体反应，洗涤，最后检测放射性强度、溶液吸光度或光信号等，从而报告检测样本中目标蛋白的浓度。上述方法的自动化免去了人工洗涤的烦琐，但正因为自动化，使得仪器体积庞大价格昂贵，一般只在大型实验室使用。1990年，Beggs等综合胶体金和免疫分析技术，建立了胶体金免疫层析法(GICA)，用于检测人尿和血清中的HCG(BEGGSM，NOVOTNYM，SAMPEDROS.Aselfperformingchromatographicimmunoassayforthequalitativedeterminationofhumanchorionicgonadotrophin(HCG)inurineandserum[J].ClinChem，1990，36：1084-1085)。此后20年，人们在GICA的基础上，开发出了用于病原体(CN03115143.4)、激素(CN200610014168.3)、心脏标志物(CN200410011165.5)、肿瘤标志物(CN200510104796.6)、自身免疫病标志物(CN200410027291.X)等的检测试剂；同时也应用到食品、环境(CN03116692.X)和兽医(CN02139704.X)领域。由于该方法只需肉眼观察即可，非专业人士也可操作，使急诊、基层医院、病人床边和现场等远离大型实验室的地方开展相关检测成为可能，所以应用范围相当广泛。虽然这种免疫分析技术已经超过20年的发展，但其基本的工作原理并未改变，这决定了到目前为止，它只用于定性或半定量检测(根据检测线灰度深浅定量)，且灵敏度也不如前述的定量免疫分析方法，其进一步的应用遇到了瓶颈。传统的层析试纸条主要由4部分组成：样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫。其中样品垫用来承载样品溶液；硝酸纤维素膜(NC膜)用于承载捕获抗体且为免疫反应发生的重要区域；结合垫用于承载标记抗体；吸水垫用于提供层析的动力，使溶液通过层析作用向上流动。以上4部分在免疫层析试纸条反应的过程中都有可能因为材质、处理方法、承载量的不同等因素增加了测量结果的变异系数(CV)。一般样品垫要事先经过酪蛋白等处理后使用，此过程中会造成不同膜条样品垫之间的差异；结合垫则是由于承载的标记抗体量的不均匀等，导致膜条在测试时变异系数(CV)增大；这些皆能导致CV的大幅上升。在传统层析试纸条结构基础上，将结合剂固定于微孔中冻干或真空抽干，密闭保存，测试前样本溶液先复溶微孔中干化的结合剂，同时发生反应，再滴加于样品垫，沿NC膜层析涌动。该结构在一定程度上改善了CV，但在医学检验中，单纯改变结合垫的结构已经不能满足日益严格的临床要求。因此，本领域急需对现有的免疫层析方法进行变革，开发一种灵敏度更高、定量更准确、变异系数更低、操作简便快捷、成本低廉的层析试纸条及检测方法，从而进一步扩展其应用领域。
技术实现思路
本专利技术提供了一种无样品垫(优选地可进一步无结合垫)型测试片，用于定量检测样品中的待测物。本专利技术提供了一种定量检测待测物的检测方法，所述方法灵敏度高、定量准确、变异系数低、操作简便快捷、成本低廉。本专利技术还提供了一种定量检测待测物的检测装置。本专利技术的第一方面，提供了一种无样品垫型测试片，其特征在于，所述测试片包括：(i)层析膜，所述层析膜上的近端含有样品接触区；(ii)位于层析膜远端并与层析膜相连或相接触的吸水垫，所述吸水垫为吸收区，用于使得待测物从样品接触区扩散至吸收区；和(iii)位于所述样品接触区和所述吸收区之间的测试区，所述测试区包含固定化的第一捕获剂，所述第一捕获剂用于捕获从样品接触区移动至测试区的含吸光物质的复合物，所述含吸光物质的复合物为至少一种被吸光物质标记的结合剂与待测物或其等同物结合形成的复合物，且所述测试区具有荧光；其中，当所述第一捕获剂捕获所述含吸光物质的复合物时，所述吸光物质降低所述测试区的荧光强度。在另一优选例中，所述吸光物质为猝灭剂。在另一优选例中，所述测试片无结合垫。在另一优选例中，所述测试片还包括基片(背衬片)，所述基片的长度不超过层析膜和吸水垫的总长度。在另一优选例中，所述测试片由层析膜、吸水垫和基片构成。在另一优选例中，所述测试片还包括将层析膜和吸水垫粘附于基片的粘附材料。在另一优选例中，所述层析膜上含有荧光层。在另一优选例中，所述测试片为成品。在另一优选例中，所述测试片还包括结合剂。在另一优选例中，所述测试片还包括含有结合剂的容器或固相载体，优选地包括含有干化结合剂的微孔。在另一优选例中，所述微孔内加入待测物样品，与所述微孔内的结合剂形成复合物溶液。在另一优选例中，所述复合物溶液与所述样品接触区接触。在另一优选例中，所述复合物溶液以水平(0°)至垂直角度(90°)中任一角度与所述样品接触区接触。在另一优选例中，所述复合物溶液以水平方向或垂直方向与所述样品接触区接触。在另一优选例中，所述层析膜为硝酸纤维素膜(NC膜)。在另一优选例中，所述测试区的荧光为所述测试片的自有荧光。在另一优选例中，所述待测物为抗原或抗体。在另一优选例中，所述结合剂特异性结合待测物或其等同物；较佳地，所述结合剂为抗原、抗体或寡核苷酸。在另一优选例中，所述结合剂可以包含两种结合剂，其中，一种被吸光物质标记的结合剂，另一种被生物素标记的结合剂，所述两种结合剂同时与待测物结合，从而形成一种被生物素标记的含吸光物质的复合物。在另一优选例中，所述含吸光物质的复合物可以含有待测物，也可以含有待测物等同物。在另一优选例中，所述第一捕获剂特异性结合于所述含吸光物质的复合物。在另一优选例中，所述第一捕获剂为链亲和素、待测物或待测物的等同物的抗体。在另一优选例中，所述结合剂的数量大于所述待测物的数量；所述第一捕获剂的数量大于从样品接触区移动至测试区的所述含吸光物质的复合物的数量。在另一优选例中，所述的待测物包括：蛋白、核酸或小分子化合物。在另一优选例中，所述的待测物包括肿瘤标志物、心肌标志物等特异性的蛋白。在另一优选例中，所述的待测物是液相(溶液)、悬浮液。在另一优选例中，所述测试片自有荧光的激发或发射光谱与所述吸光物质的吸收光谱全部或部分重叠。在另一优选例中，所述的吸光物质的吸收光谱范围为300-1000nm。在另一优选例中，所述的吸光物质选自下组：胶体金、纳米金棒、纳米银棒、或其组合。在另一优选例中，所述的胶体金是平均粒径为10-70nm的胶体金颗粒，优选地20-40nm的胶体金颗粒。在另一优选例中，所述测试片还包括至少一个位于测试区和吸收区之间的对照区，所述对照区含有固定化的第二捕获剂，其中，所述第二捕获剂用于特异性结合(多余的)被吸光物质标记的结合剂。在另一优选例中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无样品垫型测试片，其特征在于，所述测试片包括：(i)层析膜，所述层析膜上的近端含有样品接触区；(ii)位于层析膜远端并与层析膜相连或相接触的吸水垫，所述吸水垫为吸收区，用于使得待测物从样品接触区扩散至吸收区；和(iii)位于所述样品接触区和所述吸收区之间的测试区，所述测试区包含固定化的第一捕获剂，所述第一捕获剂用于捕获从样品接触区移动至测试区的含吸光物质的复合物，所述含吸光物质的复合物为至少一种被吸光物质标记的结合剂与待测物或其等同物结合形成的复合物，且所述测试区具有荧光；其中，当所述第一捕获剂捕获所述含吸光物质的复合物时，所述吸光物质降低所述测试区的荧光强度。

【技术特征摘要】
1.一种无样品垫型测试片，其特征在于，所述测试片包括：(i)层析膜，所述层析膜上的近端含有样品接触区；(ii)位于层析膜远端并与层析膜相连或相接触的吸水垫，所述吸水垫为吸收区，用于使得待测物从样品接触区扩散至吸收区；和(iii)位于所述样品接触区和所述吸收区之间的测试区，所述测试区包含固定化的第一捕获剂，所述第一捕获剂用于捕获从样品接触区移动至测试区的含吸光物质的复合物，所述含吸光物质的复合物为至少一种被吸光物质标记的结合剂与待测物或其等同物结合形成的复合物，且所述测试区具有荧光；其中，当所述第一捕获剂捕获所述含吸光物质的复合物时，所述吸光物质降低所述测试区的荧光强度。2.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述测试片无结合垫。3.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述测试片还包括基片(背衬片)，所述基片的长度不超过层析膜和吸水垫的总长度。4.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述测试片还包括结合剂。5.如权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述测试片还包括至少一个位于测试区和吸收区之间的对照区，所述对照区含有固定化的第二捕获剂，其中，所述第二捕获剂用于特异性结合(多余的)被吸光物质标记的结合剂。6.一种定量检测待测物的荧光分析方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(1)提供一复合物溶液，所述复合物溶液中含有待测物样品...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊蕾，张唯，李久彤，陈亮，周雪雷，
申请(专利权)人：上海鑫谱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31