用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记制造技术

本发明专利技术提供用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记，所述分子标记选自HLA‑DPA1 rs3077、CYP27B1 rs4646536、IFNAR1‑3 rs2850015、PAK4 rs9676717或它们的组合。其中，HLA‑DPA1 rs3077 GG型、CYP27B1 rs4646536 AG型、IFNAR1‑3 rs2850015 N‑TT型、PAK4 rs9676717 CC型是与α干扰素治疗乙肝患者应答相关的优势基因型。利用分子标记或其组合判断为HBsAg转阴的患者在经IFN‑α治疗后发生HBsAg转阴的可能性增加。本方法可用于接受IFN‑α治疗的乙肝患者治疗有效性的精准评估。

Molecular markers for predicting the efficacy of interferon-alpha therapy in patients with hepatitis B

The present invention provides molecular markers for predicting the therapeutic effect of interferon-alpha on patients with hepatitis B. The molecular markers are selected from HLA_DPA1 rs3077, CYP27B1 rs4646536, IFNAR1_3 rs2850015, PAK4 rs9676717 or their combination. Among them, HLA DPA1 rs3077 GG, CYP27B1 rs46536 AG, IFNAR 1 3 rs2850015 N TT and PAK4 rs9676717 CC are the dominant genotypes related to the response of patients with hepatitis B treated with interferon-alpha. Patients with negative HBsAg judged by molecular markers or their combinations are more likely to develop negative HBsAg after IFN_alpha treatment. This method can be used to accurately evaluate the therapeutic effectiveness of hepatitis B patients receiving IFN alpha therapy.

【技术实现步骤摘要】
用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记
本专利技术属于生物医药领域，具体地说，涉及一种用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记。
技术介绍
干扰素(interferon,IFN)、长效干扰素(Pegylatedinterferon,PEG-IFN)和核苷类似物(nucleosideanalogues,NAs)是乙肝主要治疗药物。α干扰素(IFN-α)治疗乙型肝炎的原理和特点：具有免疫调节和抗病毒作用，能有效抑制病毒的产生，治愈后复发概率低，治疗慢性乙型肝炎疗程明确；可达到乙型肝炎e抗原(HepatitisBeantigen,HBeAg)血清学转阴和乙肝表面抗原(HepatitisBsurfaceantigen,HBsAg)清除以实现临床治愈；耐药变异较少，疗效相对持久，停药后可维持疗效。缺点是不良反应较多，不适用于肝功能失代偿者。干扰素诱导的信号通路除了最初的Jak-Stat途径以外，很多新发现的信号途径对干扰素反应也是必需的。干扰素反应最终激活抗病毒的效应蛋白通路,包括TYK2/JAK1/ISGF/OAS1，Mx1，PKR、IFN-αR/PKC/STAT1，IFN-αR/MAPKs，IRS-1/PI3K-p70S6激酶等途径。这些效应蛋白通过抑制病毒转录、降解病毒RNA、抑制翻译和修饰蛋白的功能来控制病毒复制的过程。干扰素对宿主免疫细胞活性也有影响，如对巨噬细胞、T细胞、B细胞、中性粒细胞和NK细胞等均有调节和激活作用。以往的国内外研究只检测IFN-α经典信号通路中1-3种相关的基因位点。由于干扰素在免疫系统中的复杂作用，迫切需要分析多个基因位点构成的基因调控网络来预测乙肝患者使用干扰素治疗的临床结果。中国丙型肝炎防治指南(2015版)中提到IL-28基因多态性。包括IL-28B基因、人类白细胞抗原(HLA)I类分子HLAB57、Ⅱ类分子HLADRB1和DQB1的等位基因多态性可影响HCV清除。例如，IL-28B基因rs12979860CC型有利于HCV病毒清除，而TT型病毒清除率很低。使用PEG-IFN-α治疗，宿主的IL-28B基因多态性与持续病毒学应答(SVR)相关，特别是感染了HCV基因1型或4型病毒的患者。IL-28Brs12979860的CC基因型、rs8099917的TT基因型以及rs12980275的AA基因型与HCV感染的自发清除和IFN治疗应答具有良好相关性。随着精准医学的进步，药物基因组生物标志物的存在和定量与患者对特定药物或药物种类的预测反应相关。研究表明乙型肝炎患者对IFN-α治疗应答存在一定差异，现有文献中公开了一些对乙型肝炎患者宿主基因多态性的研究结果，例如发表在Antiviralresearch,2014；102:35-43.上的文献RoleofIL-28BpolymorphismsinthetreatmentofchronichepatitisBHBeAg-negativepatientswithpeginterferon公开了IL-28B(rs12979860、rs12980275)基因多态性与HBeAg阴性的慢性乙肝患者接受PEG-IFN-α2a治疗所产生的HBsAg清除有关，其中rs12979860CC型、rs12980275AA型为PEG-IFN-α2a治疗应答的优势基因型。发表在JournalofViralHepatitis,2015,22(3):318-327.上的文献RoleofCYP27B1+2838promoterpolymorphisminthetreatmentofchronichepatitisBHBeAgnegativewithPEG-interferon公开了CYP27B1rs4646536位点AA型是对PEG-IFN-α2a引起HBsAg清除具有明显优势的乙肝患者基因型。目前乙肝治疗领域面临的问题：一是疗程较长。长期注射IFN-α只有约30％的HBeAg转换率，即临床发现只有30-40％的患者能够对IFN-α的治疗产生血清学应答，而且只有用药24-48周后才能明确判断是否有效。与其他类型药物相比，干扰素是HBsAg清除率最高的药物，但清除率也只能达到5％。二是目前上市的PEG-IFN-α不良反应大。以发热最常见，其次为乏力，食欲减低、肝区疼痛、肌肉痛、腰痛、脱发、严重恶心、皮疹等。三是治疗易复发。NAs的作用为抑制病毒复制环节，在免疫调节方面没有作用。NAs有较好的耐受性，抗病毒能力强，不易产生耐药，停药易复发。HBsAg清除是逐步接近的过程，不同个体接近理想终点所需时间不同，许多已经达到HBsAg低水平的优势人群在固定时间节点停止了治疗，结果导致现有疗效的倒退，甚至出现复发及病毒进展。现有固定疗程很难使多数人群获益。四是使用NAs降低病毒载量后联合或序贯PEG-IFN的方案，较NAs单药能提高HBeAg转换率和HBsAg清除率。但序贯使用PEG-IFN治疗可能带来更多不良反应和更大经济负担。尽管以往研究揭示了乙肝患者对IFN-α治疗的应答存在基因多态性差异，但每篇文献只检测少量IFN-α相关基因位点，而且不同对比文献的研究对象基线情况、人群、观察的应答终点各不一致。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于预测α干扰素(IFN-α)治疗乙肝患者疗效的分子标记。本专利技术的另一目的是提供一种用于预测中国汉族原发性慢性乙型肝炎患者使用IFN-α治疗效果的基因检测预测模型及其构建方法。特别涉及通过对HBsAg转阴组和非转阴组的慢性乙肝患者进行基因多态性比较分析，找到不同SNP在HBsAg转阴组和非转阴组发生频率的差异来预测使用IFN-α治疗的临床结果。本专利技术构思如下：1、针对中国汉族原发性慢性乙型肝炎患者进行研究数据收集，既包括基因数据，也包括临床的人口学、病理生理、免疫学以及用药反应等长期随访数据。2、由于IFN-α在免疫系统中的复杂作用，迫切需要综合分析多个基因位点构成的基因调控网络来预测乙肝患者对IFN-α治疗的临床效果。给IFN-α用药人群的筛选提供直接、准确的指导依据。3、现有乙肝药物HBsAg清除率小于5％，本专利技术涉及的方法以HBsAg清除为研究指标，筛选出与该指标相关的SNP位点，在治疗前进行基因检测以预测乙肝疗效。一是可加快筛选“有潜力获得乙肝HBsAg清除的优势人群”的速度，二是能筛选出使用IFN-α后获得HBsAg高清除率(>60％)的患者人群。为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供用于预测IFN-α治疗乙肝患者疗效的分子标记，所述分子标记为以下方案I～IV中的任一个：方案I：HLA-DPA1rs3077和PAK4rs9676717的组合；方案II：HLA-DPA1rs3077、PAK4rs9676717、CYP27B1rs4646536和IFNAR1rs2850015的组合；方案Ⅲ：PAK4rs9676717和IFNAR1-3rs2850015的组合；方案Ⅳ：PAK4rs9676717；其中，HLA-DPA1rs3077GG型、CYP27B1rs4646536AG型、IFNAR1-3rs2850015N-TT型、PAK4rs9676717CC型是与α干扰素治疗乙肝患者应答相关的优势基因型。所述乙肝患者包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记，其特征在于，所述分子标记为以下方案I～IV中的任一个：方案I：HLA‑DPA1 rs3077和PAK4 rs9676717的组合；方案II：HLA‑DPA1 rs3077、PAK4 rs9676717、CYP27B1 rs4646536和IFNAR1 rs2850015的组合；方案Ⅲ：PAK4 rs9676717和IFNAR1‑3 rs2850015的组合；方案Ⅳ：PAK4 rs9676717；其中，HLA‑DPA1 rs3077 GG型、CYP27B1 rs4646536 AG型、IFNAR1‑3 rs2850015 N‑TT型、PAK4 rs9676717 CC型是与α干扰素治疗乙肝患者应答相关的优势基因型。

【技术特征摘要】
1.用于预测α干扰素治疗乙肝患者疗效的分子标记，其特征在于，所述分子标记为以下方案I～IV中的任一个：方案I：HLA-DPA1rs3077和PAK4rs9676717的组合；方案II：HLA-DPA1rs3077、PAK4rs9676717、CYP27B1rs4646536和IFNAR1rs2850015的组合；方案Ⅲ：PAK4rs9676717和IFNAR1-3rs2850015的组合；方案Ⅳ：PAK4rs9676717；其中，HLA-DPA1rs3077GG型、CYP27B1rs4646536AG型、IFNAR1-3rs2850015N-TT型、PAK4rs9676717CC型是与α干扰素治疗乙肝患者应答相关的优势基因型。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述乙肝患者包括中国汉族原发性慢性乙型肝炎患者。3.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述疗效的评价指标至少包括乙肝患者体内的HBsAg水平。4.根据权利要求3所述的分子标记，其特征在于，所述疗效的评价指标还包括乙肝患者体内的HBeAg、HBVDNA、ALT水平。5.根据权利要求1-4任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：童梅，程永庆，刘金毅，王潞，陈晨，
申请(专利权)人：北京三元基因药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11