一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，包括杂色曲霉HY12菌株分生孢子悬浮液的配制和发酵培养。本发明专利技术提供的一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，通过对杂色曲霉HY12菌株生长繁殖习性的研究，利用本发明专利技术中的培养方法，可在短时间内使得杂色曲霉HY12具有极快的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，对斜纹夜蛾具有较高的致畸率和致死率，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。

A Culture Method of Aspergillus versicolor HY12 Strain

The invention provides a culture method of Aspergillus heterochromatosus HY12 strain, including preparation of conidia suspension of Aspergillus heterochromatosus HY12 strain and fermentation culture. The present invention provides a cultivation method of Aspergillus heterochromatosus HY12 strain. By studying the growth and Reproduction Habits of Aspergillus heterochromatosus HY12 strain, the cultivation method of the present invention can make Aspergillus heterochromatosus HY12 have extremely fast growth and reproduction speed in a short time, can produce a large number of conidia, has high teratogenicity and lethality to Spodoptera litura, and can be used for the later stage of the development of Spodoptera litura The control of moths lays an experimental foundation and provides a useful reference for the control of other pests in this field.

【技术实现步骤摘要】
一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法
本专利技术涉及生物领域，特别是涉及一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法。
技术介绍
自专利技术化学农药之后，化学农药以每年5％惊人速度增长。虽然在过去的几十年中，化学农药在农业增产和害虫防治中起到了重要作用，但化学农药的大量使用，带来了严重的“3R”问题(即抗药性Resistance，农药残留Residence，再猖獗Resurgence)，也带来了一系列的生态环境问题。长期大量使用化学农药导致抗药性害虫增加，特别是近10年来，棉铃虫、蚜虫、小菜蛾、斜纹夜蛾、叶螨类等多发性害虫对菊酯类、有机磷类化学农药的抗药性增加了几百乃至数千倍。化学农药的施用，使农产品中农药残留量增加，严重污染了环境，危及人类建康及生命。随着人们生活水平的提高，人们对环境的要求越来越高，因此迫使人们寻找一种害虫防治替代方法。斜纹夜蛾(Spodopteralitura)属鳞翅目夜蛾科，危害寄主相当广泛，除十字花科蔬菜外，还可危害包括瓜、茄、豆、葱、韭菜、菠菜以及粮食、经济作物等近100科、300多种植物，是一种重要的农作物害虫，以幼虫咬食叶片、花蕾、花及果实，初龄幼虫啮食叶片下表皮及叶肉，仅留上表皮呈透明斑。斜纹夜蛾4龄以后进入暴食，咬食叶片，仅留主脉，在包心椰菜上，幼虫还可钻入叶球内危害，把内部吃空，并排泄粪便，造成污染，使之降低乃至失去商品价值。斜纹夜蛾虫害在国内各地都有发生，对生产带来了极大的损害。为了规避杀虫剂抗性的问题，也使农民和种植者能够回应消费者对农药残留问题，需要一个有效的方法来控制斜纹夜蛾而不涉及化学药品残留。因此，研究斜纹夜蛾生长和繁殖特性，提供一种能够感染斜纹夜蛾的菌株，并探索合适培养菌株的方法，使得菌株速度繁殖，为防治斜纹夜蛾提供实验基础是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，通过对杂色曲霉HY12菌株生长繁殖习性的研究，利用本专利技术中的培养方法，可在短时间内使得杂色曲霉HY12具有极快的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，对斜纹夜蛾的繁衍具有一定的抑制作用，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：从烟田斜纹夜蛾为害区采集土样，从土样中于偶然情况下分离获得13个真菌菌株并对真菌进行纯培养，经形态学观察初步鉴定，它们分别为白僵菌属(Beauverja)2株，镰刀菌属(Fusarium)2株，曲霉属(Aspergullus)3株，木霉属(Trichoderma)1株，青霉属(Penicillium)1株，枝孢属(Cladosporium)1株、未鉴定真菌3株。用纯培养的13个菌株接种斜纹夜蛾3龄幼虫后观察，筛选出1株繁殖速度快，对斜纹夜蛾致病性强的菌株。一种杂色曲霉HY12(Aspergillusversicolor)菌株，该菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其保藏编号为CGMCCNO：14790；其培养方法步骤包括：(1)杂色曲霉HY12菌株分生孢子悬浮液的配制将所述杂色曲霉HY12菌株在真菌培养基平板上培养至充分产孢，挑取分生孢子粉，利用Tween80溶液配制成孢子悬浮液；(2)发酵培养将步骤(1)中的所述孢子悬浮液接种至发酵培养基中，于28-30℃、pH5.5-6.0的条件下，光照培养1-2d，即可获得所述杂色曲霉HY12菌株的发酵液。杂色曲霉HY12菌株的生长量随温度的升高而增大，在28℃为最大值，当发酵培养基的温度高于30℃时，菌体生长受到明显抑制；其中当发酵培养基的pH为6时，菌体生长量较大，但随着pH的升高而抑制菌体生长。进一步的，步骤(1)中所述真菌培养基包括以下重量份数的组分，葡萄糖4份，蛋白胨1份，酵母浸出粉1份，琼脂2份，庆大霉素0.2份，水100份。进一步的，所述Tween80溶液的浓度为0.05％。本专利技术公开的Tween80溶液的浓度为0.05％，能够克服真菌疏水性，使孢子分散均匀。进一步的，所述孢子悬浮液的浓度为108个/mL。孢子悬浮液能将孢子较好的分散，便于下一步的吸取和接种，设定为108个/mL的浓度，能将孢子较好的分散，便于下一步的吸取和接种，如果孢子悬浮液的浓度过大，则浓影响计数的精确性；反之，浓度过小过则降低接种成功率。进一步的，所述发酵培养基包括葡萄糖40-50g，蛋白胨5-10，酵母浸出粉5-10g和水1000mL。进一步的，所述发酵培养基的C/N为20:1。进一步的，所述光照条件为12hL:12hD。进一步的，所述孢子悬浮液与发酵培养基的体积比为1:100-150。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术提供了一种杂色曲霉HY12菌株培养方法，具有如下技术优点：本专利技术通过对杂色曲霉HY12菌株生长繁殖习性的研究，利用本专利技术中的培养方法，可在短时间内使得杂色曲霉HY12具有极快的生长繁殖速度，能够产生大量的分生孢子，对斜纹夜蛾具有较高的致畸率和致死率，为后期对斜纹夜蛾的防治奠定实验基础，同时为本领域内其他害虫的防治提供有利的参考。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术提供的杂色曲霉HY12菌株在实施例2提供的发酵培养基中不同时间内的生长情况。图2附图为本专利技术提供的不同温度下杂色曲霉HY12菌株的生长情况；图3附图为本专利技术提供的不同pH下杂色曲霉HY12菌株的生长情况；图4附图为本专利技术提供的不同碳源下杂色曲霉HY12菌株的生长情况；图5附图为本专利技术提供的杂色曲霉HY12菌株在实施例6提供的发酵培养基中不同时间内的生长情况。图6附图为本专利技术提供的杂色曲霉HY12菌株在实施例7提供的发酵培养基中不同时间内的生长情况。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1杂色曲霉HY12菌株筛选从湘南烟田斜纹夜蛾为害区采集47个土样，其中永州江华25个土样，衡阳16个土样，江永4个土样，宁远2个土样。其中利用5点取样法采集土样，选择两烟株之间的中心距离处作为取土点，用土铲向下切取长10cm、宽10cm、深5cm土壤样品放入无菌的自封塑料袋中，带回实验室，置于冰箱中保存备以分离。详细记录样品采集的时间、地点及相关信息，不同土样要分别进行标记。将采回的烟田土样在无菌状态下碾碎并充分混合，过目筛后再充分混合，进一步用四分法进行多次取样，直至最终土壤样品量为20-50g。土壤悬浮液的制备：随机挑取2.5g土壤样品，加入50mL0.05％吐温-80溶液置于试管中，充分震荡混匀；取出2mL悬浊液加入到另一试管中，再加入8mL0.05％吐温80溶液中，震荡混匀，从中再本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，其特征在于，所述菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNO：14790；其培养方法步骤包括：(1)杂色曲霉HY12菌株分生孢子悬浮液的配制将所述杂色曲霉HY12菌株在真菌培养基平板上培养至充分产孢，挑取分生孢子粉，利用Tween 80溶液配制成孢子悬浮液；(2)发酵培养将步骤(1)中的所述孢子悬浮液接种至发酵培养基中，于28‑30℃、pH5.5‑6.0的条件下，光照培养1‑2d，即可获得所述杂色曲霉HY12菌株的发酵液。

【技术特征摘要】
1.一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，其特征在于，所述菌株于2017年10月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCCNO：14790；其培养方法步骤包括：(1)杂色曲霉HY12菌株分生孢子悬浮液的配制将所述杂色曲霉HY12菌株在真菌培养基平板上培养至充分产孢，挑取分生孢子粉，利用Tween80溶液配制成孢子悬浮液；(2)发酵培养将步骤(1)中的所述孢子悬浮液接种至发酵培养基中，于28-30℃、pH5.5-6.0的条件下，光照培养1-2d，即可获得所述杂色曲霉HY12菌株的发酵液。2.根据权利要求1所述的一种杂色曲霉HY12菌株的培养方法，其特征在于，步骤(1)中所述真菌培养基包括以下重量份数的组分，葡萄糖4份，蛋白胨1份，酵母浸出粉1份，琼脂2份，庆大霉素0.2份，水100份。3...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭琳，胡秋龙，伍绍龙，汤心砚，杨中侠，樊吉君，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43