一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，该方法以马蹄皮干粉为原料，经PBS浸泡、超声波破碎、蛋白酶水解、醇析和干燥制得马蹄皮硫酸多糖，能够将马蹄皮中的硫酸多糖有效提取，并通过正交优化参数，提高马蹄皮硫酸多糖的提取效率。本发明专利技术利用大量被废弃的马蹄皮为原料，制备硫酸多糖，为高值化利用天然资源开辟新途径，也为资源丰富成本低廉，且可规模化生产，满足医疗、保健及食品行业的工业需求。

A preparation method of sulfated polysaccharide from horseshoe skin

The invention discloses a preparation method of sulfated polysaccharide from horseshoe hide. The method takes dry powder of horseshoe hide as raw material, and makes sulfated polysaccharide from horseshoe hide by PBS soaking, ultrasonic breaking, protease hydrolysis, alcoholization and drying. The method can effectively extract sulfated polysaccharide from horseshoe hide, and improve the extraction efficiency of sulfated polysaccharide from horseshoe hide by orthogonal optimization of parameters. The invention uses a large number of discarded horseshoe skins as raw materials to prepare sulfated polysaccharides, opens up a new way for high value utilization of natural resources, enriches resources, has low cost, and can be produced on a large scale to meet the industrial needs of the medical, health and food industries.

【技术实现步骤摘要】
一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法
本专利技术涉及一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，属于天然药物的提取方法

技术介绍
目前，天然多糖化学修饰以提升水溶性和生物学活性，为多糖生物学领域的重要研究方向，其中多糖硫酸化尤为引人重视。大量的研究证实，硫酸化的天然多糖，不仅大大增强了其水溶性，各项生物学活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、抗凝血等，也均得到了显著性提升。然而，多糖的硫酸化修饰过程中所用化学试剂，无可避免会造成环境污染及对药物的不良影响。本专利技术所提取的是天然硫酸多糖，过程中极少量使用了有机试剂，不采用其他酸碱或硫酸化化学修饰剂，不仅避免了环境污染，也保护了天然硫酸多糖的高效生物学活性。马蹄，也称荸荠，原产于中国南方，属莎草科多年生浅水草本植物，地下球茎为食，我国有2000多年悠久的种植史。我国是种植和出口马蹄大国，广泛栽种，覆盖广西、江苏、安徽、广东、湖南、湖北、江西、河北等省，种植面积超60万亩，年产量60-80万吨。马蹄及其深加工产品远销海外，国际上约99％的马蹄贸易来自中国。马蹄不仅营养丰富，每100g新鲜马蹄中约含1.5g蛋白、0.1g脂类、22g糖类、74mg微量元素以及4mg维生素，并且具有很好的药理学作用。《伤寒杂病论》记载，马蹄具有清热解毒、消肿化瘀、生津止渴、润肺化痰等功效。现代医学证实马蹄具有抗肿瘤、抗菌、治疗呼吸道疾病、利尿通便、治疗糖尿病、治疗高血压等药效。研究发现，马蹄的活性物质主要富集于果皮和果肉之间。在马蹄加工过程中，占总质量25％的马蹄皮被废弃，因此，本专利技术所需原材料十分丰富。我们研究发现，马蹄皮含有丰富的硫酸多糖，但目前未见从马蹄皮中制备该硫酸多糖的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，以期以马蹄皮为原料制备马蹄皮硫酸多糖。为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎备用；(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于磷酸盐缓冲液PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：(20-30)；(3)超声波处理3-10分钟，在30-60℃条件下搅拌浸泡1-10小时；(4)过滤后滤液用2-5‰木瓜蛋白酶于40-60℃条件处理80-100分钟；(5)沸水浴处理5-10分钟，加入去蛋白溶液Sevage溶液，搅拌8-15分钟后静置20-30分钟；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70-80％，静置过夜；(7)沉淀用70-80％乙醇洗涤后离心；(8)沉淀用6-8倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖；所述步骤(1)中，将马蹄风干粉碎后，过200目筛，制备粉末；所述步骤(2)中，PBS浓度为0.01-0.05mol/L，pH为5.5-6.5；所述步骤(3)中，超声波处理参数为：时间5s，间隔10s，20次；所述步骤(4)中，木瓜蛋白酶终浓度为质量(mg)体积比(ml)，静置环境温度为30-60℃；所述步骤(5)中，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；所述步骤(6)中，离心速度为5000rpm，向上清液中加入3-5倍体积的无水乙醇，静置环境温度为30-60℃；所述步骤(7)中，离心速度为5000rpm，用70-80％乙醇洗涤三次。本专利技术的马蹄皮硫酸多糖的制备方法能够有效提取马蹄皮中的硫酸多糖，具有安全、科学、简洁的优点。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，这些实施例只用来说明本专利技术，并不限制本专利技术的范围。一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎过200目筛备用；(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于0.01mol/L、pH为5.5的PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：20；(3)超声波处理3分钟，在30℃条件下搅拌浸泡1小时；(4)过滤后滤液用质量提交比为2‰的木瓜蛋白酶于40℃条件处理80分钟；(5)沸水浴处理5分钟，加入Sevage溶液，搅拌8分钟后静置20分钟，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70％，静置过夜，离心速度为5000rpm；(7)沉淀用70％乙醇洗涤三次后离心，离心速度为5000rpm；(8)沉淀用6倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。实施例2一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎过200目筛备用；(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于0.05mol/L，pH为6.5的PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：30；(3)超声波处理10分钟，在60℃条件下搅拌浸泡10小时；(4)过滤后滤液用质量提交比为5‰的木瓜蛋白酶于60℃条件处理100分钟；(5)沸水浴处理10分钟，加入Sevage溶液，搅拌15分钟后静置30分钟，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为80％，静置过夜，离心速度为5000rpm；(7)沉淀用80％乙醇洗涤三次后离心，离心速度为5000rpm；(8)沉淀用8倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。实施例3一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎过200目筛备用；(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于0.03mol/L，pH为6.0的PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：25；(3)超声波处理8分钟，在45℃条件下搅拌浸泡5小时；(4)过滤后滤液用质量提交比为3‰的木瓜蛋白酶于50℃条件处理90分钟；(5)沸水浴处理8分钟，加入Sevage溶液，搅拌12分钟后静置25分钟，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70％，静置过夜，离心速度为5000rpm；(7)沉淀用70％乙醇洗涤三次后离心，离心速度为5000rpm；(8)沉淀用7倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。实施例4一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，包括如下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎过200目筛备用；(2)取马蹄皮粉末1份(以质量计)，悬于0.02mol/L，pH为5.0的PBS中，质量(g)体积(ml)比为1：23；(3)超声波处理4分钟，在40℃条件下搅拌浸泡3小时；(4)过滤后滤液用质量提交比为4‰的木瓜蛋白酶于45℃条件处理85分钟；(5)沸水浴处理6分钟，加入Sevage溶液，搅拌10分钟后静置23分钟，Sevage溶液为：氯仿/正丁醇＝4:1(V/V)；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为75％，静置过夜，离心速度为5000rpm；(7)沉淀用75％乙醇洗涤三次后离心，离心速度为5000rpm；(8)沉淀用7倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。实施例5马蹄皮硫酸多糖生产工艺参数正交优化1、新鲜马蹄皮风干，粉碎备用；2、根据正交单因素结果进行正交实验设计(表1)3、取马蹄皮粉末10g，悬于PBS中；4、超声波处理，搅拌浸泡；5、过滤后滤液用2-5‰木瓜蛋白酶于40-60℃条件处理80-100分钟；6、沸水浴处理5-10分钟，加入Sevage溶液，搅拌8-15分钟后静置20-30分钟；7、离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马蹄皮硫酸多糖的提取方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎成粉末备用；(2)取马蹄皮粉末1份，悬于磷酸盐缓冲液中，质量体积比为1：(20‑30)；(3)将步骤(2)获得的液体超声波处理3‑10分钟，在30‑60℃条件下搅拌浸泡1‑10小时；(4)将步骤(3)的溶液过滤后滤液用2‑5‰木瓜蛋白酶于40‑60℃条件下处理80‑100分钟；(5)将步骤(4)获得的溶液沸水浴处理5‑10分钟，加入去蛋白溶液，搅拌8‑15分钟后静置20‑30分钟；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70‑80％，静置过夜；(7)沉淀用70‑80％乙醇洗涤后离心；(8)沉淀用6‑8倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。

【技术特征摘要】
1.一种马蹄皮硫酸多糖的提取方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)新鲜马蹄皮风干，粉碎成粉末备用；(2)取马蹄皮粉末1份，悬于磷酸盐缓冲液中，质量体积比为1：(20-30)；(3)将步骤(2)获得的液体超声波处理3-10分钟，在30-60℃条件下搅拌浸泡1-10小时；(4)将步骤(3)的溶液过滤后滤液用2-5‰木瓜蛋白酶于40-60℃条件下处理80-100分钟；(5)将步骤(4)获得的溶液沸水浴处理5-10分钟，加入去蛋白溶液，搅拌8-15分钟后静置20-30分钟；(6)离心取上清液，加入乙醇至乙醇体积浓度为70-80％，静置过夜；(7)沉淀用70-80％乙醇洗涤后离心；(8)沉淀用6-8倍量的水溶后，冷冻干燥，获得马蹄皮硫酸多糖。2.根据权利要求1所述的一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的粉末是过200目筛制备得到的粉末。3.根据权利要求1所述的一种马蹄皮硫酸多糖的制备方法，其特征在于：步...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘华忠，罗萍，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：广东,44